果蝇唾腺染色体的简易封片方法

果蝇属(Drosophila)分为八个亚属,共有九百多个种。在 Sophophora 亚属中的普通果蝇(D.melanogaster)是遗传学及细胞学研究中应用得最多的一个种。例如 果蝇的唾腺染色体,不仅是大学遗传学实验和中学生物学实验用作观察巨形染色体(macro chromoso-me)和多线染色体(Polytene chromosome)的典型材料,而且在遗传学上,可以根据唾腺     

果蝇(Drosophila melanogaster)唾腺染色体的制备及染色体识别

果蝇(Drosophila melanogaster)唾腺染色体的制备与分析是果蝇细胞遗传研究的基本实验技术,也是非常流行的遗传学教学实验。国内绝大多数的实验教材介绍了这个实验的操作方法,但对于如何辨别染色体各条臂,并进而识别具体的带纹均未予以介绍。笔者详细介绍唾腺染色体的制备及拍摄、数码照片拼接方法;并着重介绍如何根据各条臂端粒端的形态特征,以及利用Lefevre的唾腺染色体照片图谱中指示的蓬突(puff)、缢缩及带纹组合特征识别染色体臂的方法,供研究和实验教学参考。     

唾腺染色体制片方法的简化与改进

以果蝇、日蝇及其3龄幼虫为研究对象,采用先染色后分离唾腺组织的方法简化了唾腺染色体的制备过程。通过比较发现,日蝇可能是更适合制备唾腺染色体的试验材料。     

果蝇唾腺染色体制片方法的改进

果蝇唾腺染色体的制片观察是高等学校遗传学实验的主要内容之一,但传统的制片方法往往不易得到理想的制片效果,需要大量的活体材料的准备与学生剖取腺体的操作。根据长期的教学实践,对实验作了一些改进,最终使唾腺染色体各臂能较好的伸展开,易于观察,得到了较好的实验结果。     

果蝇唾腺染色体的制作技术研究

[目的]为果蝇唾腺染色体试验教学及相关研究提供成熟的制作技术。[方法]以野生型果蝇三龄幼虫为试验材料,通过三龄幼虫培养、唾腺剥离、压片、解离、染色等完整的制片过程探索染色体制片规律。[结果]利用镊子柄部进行压片效果很好,染色体伸展充分。通过比较4种染色试剂（苏木精、醋酸洋红、卡宝品红和改良苯酚品红）的染色效果选出的最佳试剂为改良苯酚品红。[结论]该研究为果蝇唾腺染色体的制作提供了成熟的技术参考。     

天然基因克隆的制备

果蝇唾腺染色体为多线染色体,其上的每一条横纹带就是一个具有多个相同DNA序列的基因集合体,这个集合体至少相当于一个基因的克隆。本研究利用8.8NHCl打断果蝇唾腺染色体的间带区,使每条横纹带相互分离,实现了天然基因克隆的切割。本方法简单易行,为开发转基因动物和转基因植物提供了新的研究途径。     

果蝇唾腺染色体观察及制片技术改进

在遗传学实验中观察果蝇唾腺细胞染色体,能够使学生对染色体是遗传物质载体这一概念有一个感性认识。虽然在教科书和一些其它资料上较详细地介绍了果蝇唾腺染色体的制片方法,但在实际操作中很难得到满意效果,尤其对学生来说,要在一次实验课上既完成装片,又要进行观察,制片过程难度很大,主要存在问题有两个,一是准确剖     

快速获得果蝇唾腺体的技巧和方法

解剖了三龄幼虫,获取唾腺体是果蝇唾腺染色体制片和观察的第一步。在长期的实验准备中,虽提供大量的三龄幼虫,但在解剖幼虫时因切入点不精确,且操作工具不当,最后较难得到理想的唾腺体,影响后期唾腺的染色体制片和观察。经过大量的实验,对解剖幼虫时的切入点和操作工具以及操作角度进行探索和改进。最终证明,改进后的方法不但能够节约时间,节省材料,而且能够快速地获得完整的唾腺体,大大提高染色体制片和观察的效果。     

盐酸解离对果蝇唾腺染色体解聚与制片效果的影响

盐酸解离是果蝇唾腺染色体制片中的关键步骤,研究了盐酸浓度与处理时间对染色体解聚合与制片效果的影响.解离不充分时,压片后唾腺染色体仍团聚在一起;解离过度时,染色体结构受损,二者都达不到制片的要求.用2 mol/L盐酸处理20 min或者用3 mol/L盐酸处理15 min,染色体解聚适度,染色体分散,染色体臂及横纹均清晰可见,制片效果理想.用3 mol/L盐酸解离,所需时间短,更适合于制片观察.     

果蝇实验对“发现式”实验教学改革的推动作用

在开展遗传学的有关实验教学中,果蝇是较为经典且常见的实验材料。现阶段我国诸多高校通过将果蝇作为实验材料的遗传学实验,仍然以较为经典的验证式教学为主,无法吸引学生实验兴趣,无法提升教学质量。由此本次研究针对果蝇实验对"发现式"实验教学改革的作用展开研究,对实验教学内容进行调整,实现了"验证式"实验教学至"发现式"实验教学的转变,从而有效提高实验学习成效。     

Histone acetylation in insect chromosomes

Acetylation of histones takes place along the salivary gland chromosomes of Chironomus thummi when RNA synthesis is active. It can be observed but not measured quantitatively by autoradiography of chromosome squashes. The "fixatives" commonly used in preparing squashes of insect chromosomes preferentially extract the highly acetylated "arginine-rich" histone fractions; the use of such fixatives may explain the reported absence of histone acetylation in Drosophila melanogaster.     

Epithelial origin of polyoma salivary tumors in mice: evidence based on chromosome-marked cells

Trypsin dissection of epithelium from mesenchyme of salivary gland rudiments allows reassembly of glands having either epithelium or mesenchyme selectively marked by T(6) chromosomes. Virus-induced tumors in such glands invariably bear the karyotype of the epithelial component. The method solves a specific example from a group of classical problems concerning epithelial as opposed to mesenchymal origin of neoplasms.     

Salivary gland lysates from the sand fly Lutzomyia longipalpis enhance Leishmania infectivity

Leishmaniasis is a parasitic disease transmitted by phlebotomine sand flies. The role of sand fly saliva in transmission of the disease was investigated by injecting mice with Leishmania major parasites in the presence of homogenized salivary glands from Lutzomyia longipalpis. This procedure resulted in cutaneous lesions of Leishmania major that were routinely five to ten times as large and contained as much as 5000 times as many parasites as controls. With inocula consisting of low numbers of Leishmania major, parasites were detected at the site of injection only when the inoculum also contained salivary gland material. This enhancing effect of sand fly salivary glands on cutaneous leishmaniasis occurred with as little as 10 percent of the contents of one salivary gland of one fly. Material obtained from other bloodsucking arthropods could not mediate the phenomenon.     

镰形扇头蜱唾液腺抑制消减杂交文库的构建和分析

【目的】寻找镰形扇头蜱吸血后较吸血前唾液腺差异表达基因。【方法】以抑制消减杂交法分别构建镰形扇头蜱半饱血雌蜱和吸血雄蜱唾液腺以pGEM-T-easy为载体的cDNA文库，并测序进行生物信息学分析。【结果】分别测得247个雌蜱有效EST序列和168个雄蜱有效EST序列，并预测雌蜱可能含有5′末端和3′末端的EST序列分别为25个和44个，雄蜱可能含有5′末端和3′末端EST序列分别为53个和74个。随机选择非重复的24个雌蜱序列和21个雄蜱序列以RT-PCR方法验证消减效果；在吸血后唾液腺中，雌蜱有13个基因表达上调或新表达，消减效率为54%，雄蜱有9个基因表达上调或新表达，消减效率为43%。对所测有效序列经BLAST分析，检索247个雌蜱序列获得141个匹配，匹配率为57%，其中有32个蜱基因，占141个匹配基因的23%；检索168个雄蜱序列获得125个匹配，匹配率为74%，其中有29个蜱基因，占125个匹配基因的23%。BLAST检索结果显示这些蛋白主要包括帮助蜱口器固定免疫调节蛋白、抗凝血蛋白、加强能量代谢的线粒体蛋白和促进基因转录的各种转录因子。【结论】这些蛋白主要是为了适应蜱吸血的生理过程及应变蜱因吸血而产生的免疫防御和排斥。     

Dopamine-beta-hydroxylase: evidence for increased activity in sympathetic neurons during psychotic states

Tritiated dopamine was infused into psychiatric patients during acute psychotic episodes and in remission. An index of the activity of dopamine-beta-hydroxylase of salivary gland sympathetic neurons was determined by measuring the distribution of tritiated metabolites in salivary fluid. Increased synthesis of norepinephrine occurred in acute schizophrenia and in the manic state of manic-depressive psychosis but not in the depressed phase.     

Lysosomal and free acid phosphatase in salivary glands of chironomus tentans

In cells of salivary glands of last-instar larvae of Chironomus tentans, acid phosphatase activity is bound to (probable) lysosomes and a few other cell organelles. At the end of the pupal molt the salivary gland breaks down. While acid phosphatase in areas of nondegenerated cells is still restricted to the structures mentioned, in degenerated areas the enzyme is freely distributed in the cytoplasm.     

成年皖西白鹅母鹅消化腺的形态学观察

研究了成年皖西白鹅母鹅消化腺的形态特征。结果表明 :成年皖西白鹅母鹅消化腺由唾液腺、肝脏和胰腺组成。肝脏的组织结构由肝小叶和门管区构成 ,肝小叶由中央静脉、肝细胞管和肝窦组成 ,门管区包括小叶间胆管、小叶间动脉和小叶间静脉 ,还有淋巴组织分布。胰腺包括外分泌部和内分泌部 ,外分泌部由腺泡和导管组成 ,内分泌部为一细胞团 ,即胰岛。     

Junctional membrane permeability: restoration by repolarizing current

In cells of the Chironomus salivary gland, junctional membrane conductance, depressed by various chemical treatments, is restored to its normal high level by currents passed inward through nonjunctional cell membrane.     

蜂王浆高产蜜蜂与意大利蜜蜂哺育蜂唾液腺蛋白质组分析

【目的】比较蜂王浆高产蜜蜂（浆蜂,Apis mellifera liguatica）和意大利蜜蜂（意蜂,Apis mellifera liguatica）哺育蜂头唾腺、胸唾腺的蛋白质组差异,揭示唾液腺调控蜂王浆生产的分子基础,为解析浆蜂蜂王浆高产机理提供依据。【方法】解剖浆蜂、意蜂哺育蜂头唾腺和胸唾腺,提取蛋白质、液内酶切并进行液相色谱与串联质谱蛋白质组分析。采用MaxQuant软件对质谱数据定量和定性分析,利用Perseus软件对结果进行生物信息学分析。使用SignalP预测分泌性蛋白。利用ClueGO软件对唾液腺蛋白质组进行生物学进程和代谢通路富集分析。【结果】浆蜂和意蜂哺育蜂唾液腺共鉴定到2 335个蛋白,其中头唾腺1 823个,胸唾腺1 922个。浆蜂、意蜂头唾腺和胸唾腺核心蛋白表达谱相似,主要参与RNA代谢、核酸代谢、ATP代谢、蛋白质的翻译、翻译调控和分解代谢,为腺体行使生物学功能提供了必要的代谢能和核酸、蛋白质等原料。浆蜂、意蜂哺育蜂头唾腺和胸唾腺主成分分析（PCA）显示二者唾液腺分子基础在选育过程中出现了一定程度的分化。意蜂、浆蜂头唾腺分别上调表达254和333个蛋白,意蜂小分子、碳水化合物代谢等通路上调,浆蜂有机氮化合物合成、细胞氧化还原稳态、氨基酸代谢、氧化还原等通路上调,证明浆蜂头唾腺细胞蛋白质合成、氨基酸代谢旺盛、供能加强。意蜂、浆蜂胸唾腺分别上调表达412和162个蛋白,意蜂氧化磷酸化、翻译调控等通路上调,浆蜂氧化磷酸化、对有毒物质的反应等通路上调,说明浆蜂胸唾腺细胞抗逆水平提高。浆蜂、意蜂唾液腺共鉴定到43个分泌性蛋白,其中有15个也在蜂王浆中得到鉴定,蜂王浆主蛋白1、2、3、4、5、7同时在头唾腺和胸唾腺中检出,表明头唾腺和胸唾腺均参与了蜂王浆主蛋白的合成;参与花蜜转化的α-葡萄糖苷酶和参与化学信息素合成与释放的气味结合蛋白3、13、17、21同时在头唾腺和胸唾腺中检出,为花蜜转化和信息素合成奠定了基础。蜂王浆主蛋白1、2、3、7,昆虫储存蛋白70a、110,气味结合蛋白3、13、17、21以及与幼虫先天免疫紧密相关的转铁蛋白、载脂蛋白III样蛋白均在浆蜂唾液腺中高表达,说明浆蜂唾液腺信息素和蜂王浆蛋白质合成较意蜂旺盛。【结论】浆蜂、意蜂唾液腺具有相似的核心蛋白质组以保证蜂王浆蛋白质、信息素和转化酶的合成与分泌。经过长期选育,浆蜂、意蜂唾液腺分子基础出现差异,浆蜂哺育蜂唾液腺较意蜂蛋白质合成、氨基酸代谢旺盛,细胞供能、抗逆性加强且分泌性蛋白普遍在浆蜂唾液腺上调表达,为浆蜂提供了更加持久和高效的蛋白质合成系统,促成了蜂王浆的高产。