当前我国猪病流行动态与防治对策

一、当前猪病流行趋势1.新的疫病不断增多,病原变异加快,毒力增强。圆环病毒中PCV2a基因组的1042核苷酸发生胸苷激酶的缺失即为PCV2b,PCV2b的毒力大于PCV2a。猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒表现Nsp2基因的部分缺失和ORF5基因糖基化位点的增加。口蹄疫病毒中传统新猪毒和泛亚毒疫苗对O型耿马属口蹄疫保护率不高。     

科技进展

<正>猪圆环病毒2型在衣壳蛋白234氨基酸发生突变提高病毒毒力猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,在世界范围内给猪业生产造成巨大的经济损失。其主要有两个基因型:PCV2a和PCV2b。在中国和其他国家已经出现PCV2b基因型病毒的衣壳蛋白的ORF2区域发生突变的毒株。对新出现的PCV2b基因型突变株毒力的确定是非常必要的,把它和PCV2a、PCV2b基因型毒株进行比较,调查突变病毒的毒力是否更强。     

猪圆环病毒2型分子流行病学及疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)在世界范围内广泛分布,主要以PCV2a和PCV2b两种基因型为主,PCV2b亚型为当前流行基因型。现有商品化疫苗主要针对PCV2a型病毒,也可对PCV2b型病毒产生部分交叉保护,但不能显著控制PCV2b型病毒在猪群中的传播。除此之外,由于已有的商品化疫苗以传统疫苗为主,存在种毒增殖难、疫苗生产周期长等缺点。因此,研发PCV2b新型疫苗可能成为未来PCV2疫苗研制的主要方向。对PCV2的分子流行病学及疫苗研究现状进行了综述,以期为PCV2疫苗的研究提供参考。     

中国部分地区猪圆环病毒2型的基因型分析

对中国11个省(市)部分猪场收集的812份病料,应用ORF2-PCR进行检测,发现有235份为PCV2阳性病料.利用鉴别PCR方法从235份阳性病料中,检出10份PCV2a基因型和133份PCV2b基因型,检出率分别为4.2%、56.6%.进一步对ORF2-PCR检测阳性的部分模板进行全基因组扩增,构建阳性重组质粒,对插入质粒的片段进行测序鉴定,利用DNAStar进行同源性分析,同GenBank参考毒株绘制系统发育树,从系统发育树中也可分出PCV2a、PCV2b 2种基因型.鉴别PCR和测序结果说明,我国部分地区流行的猪圆环病毒2型以PCV2b基因型为主,少数为PCV2a基因型,也有既非PCV2a又非PCV2b的基因型(PCV2c?).     

PCV2a和PCV2b感染性克隆的体外拯救

 研究旨在获得PCV2a和PCV2b的拯救毒株。对筛选得到的PCV2a和PCV2b感染性克隆分别进行酶切,使酶切得到的全长基因组DNA自身环化并分别转染PK15细胞。经IFA和PCR验证,确认成功拯救出两亚型PCV2病毒。病毒传至第9代时对PCV2a和PCV2b的毒价分别进行测定,结果显示PCV2a的毒价为103.5TCID50/mL, PCV2b的毒价为104.6TCID50/mL。本试验为分型特异性序列与病毒致病力相关性的研究打下了基础.     

猪圆环病毒2型的流行病学和传播特点

近十年来猪圆环病毒2型（PCV2）普遍在猪群中流行,90年代以后感染圆环病毒2型导致的临床疾病给世界猪业生产造成了巨大的损失。PCV2包括几个基冈型。从流行病学数据可以看出,全球PCV2基因型从PCV2a转移到PCV2b,PCV2b可引起更严重的疾病。此外,流行病学研究分析指出PCV2感染动力学的改进与感染PCV2后临床症状的增加有很强的关联。     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗.选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒.攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化.采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高.2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护.以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株.病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤.本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护.     

2型猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是一种基因组较小,但有较高进化速率的DNA病毒,其是影响养猪业经济发展的重要病原体。到目前为止,PCV2具有5种基因型-PCV2a到PCV2e,但对PCV2流行株的基因序列的检测发现,PCV2的基因型仍在持续的发展。自2012年以来,PCV2d基因型的圆环病毒在北美取代了以前主导的PCV2b基因型感染,同时在中国和韩国也有了类似的趋势。圆环病毒的新兴基因型,其毒力存在增强的可能性,基于PCV2a基因型制备的疫苗,是否对PCV2d基因型圆环病毒的感染具有保护作用,已引起各国学者的重视。本文通过对PCV2的生物学特性、抗体变异情况以及其基因进化情况进行综合的分析总结,从而为PCV2疫苗的开发与研制奠定理论基础。     

猪圆环病毒2a型和2b型Cap蛋白的原核表达及鉴定

为制备猪圆环病毒2a型（PCV2a）和2b型（PCV2b）Cap蛋白，用生物信息学软件优化PCV2a Cap基因和PCV2b Cap基因密码子、克隆至p ET28a载体中、转化BL21(DE3)、构建重组蛋白表达菌株，通过优化原核表达的温度、IPTG浓度等条件进行蛋白表达，采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。结果显示：重组PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白的分子量约为30 k Da，在不同温度下都以包涵体形式存在，在37℃下以终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达的Cap蛋白表达量最高。试验成功制备了PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白，为制备PCV2二价疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。     

上海地区发病猪群猪圆环病毒2型阳性样本中其他病原混合感染状况调查

本研究对2009年至2011年上海地区发病猪群内脏样本进行猪圆环病毒2型(Porcine circovirus,PCV2)检测,对PCV2阳性样本进行2a/2b分型检测,并对PCV2阳性样本进行其他病原混合感染状况调查。上海地区发病猪群PCV2阳性率平均为54.34%,以PCV2b单纯感染为主。在PCV2阳性样品中,其他病毒混合感染率平均达到60.2%,细菌混合感染率达到61.22%,病毒与细菌同时混合感染率为41.84%,平均混合感染率达到53.06%。研究表明,上海地区发病猪群PCV2阳性样本与其他病原混合感染比例较高,病毒主要以PRRSV为主,细菌主要以大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌及副猪嗜血杆菌为主;混合感染是导致猪群死亡的重要因素,也是当今上海地区猪群疫病的感染现状及发病模式。     

科技进展

巴西圣保罗州感染猪圆环病毒2型猪群的流产胎猪中检测到基因型2a和2b的猪圆环病毒猪圆环病毒2型(PCV2)与许多复杂疾病相关,其中包括繁殖障碍。这个研究的目的是鉴别巴西圣保罗州繁殖障碍猪的PCV2亚型,调查与其它传染性病原共感染的情况。巴西圣保罗州5个商品猪饲养场168个流产胎猪和木乃伊胎用聚合酶链式反应(PCR)检测出感染了PCV2。阳性样品再用PCR检测细小病毒(PPV)、钩端螺旋体和布鲁氏菌病。PCV2在18个样品中被检测到(检出率为10.7%)。分别检测到2、10、和0个样品为猪细小病毒(PPV)、布氏杆菌和钩端螺旋体阳性。对11个PCV2株测序判定是2a型(n=     

猪圆环病毒Ⅱ型流行病学新特点及致病机理研究进展

猪圆环病毒是猪圆环病毒病的主要致病因素,该病给养猪业带来很大的经济损失。猪圆环病毒变异较快,是单链DNA病毒中最高的;易感猪主要通过消化道和呼吸道水平传播而感染,猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)人工或自然感染猪的排泄物、鼻腔、口腔和扁桃体拭子和患畜的尿液和粪便中均能检测到PCV2。断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的发病主要与猪体内PCV2含量有关。PCV2特异抗体对猪群的PCV2感染具有保护作用。PCV2诱导猪继发性免疫缺陷,淋巴细胞缺失,影响PCV2感染结果的因素有:病毒、宿主、混合感染和免疫调节等。     

猪圆环病毒病的临床症状与防控措施

1猪圆环病毒病（PCVD）简介 猪圆环病毒病（Porcine circovirus diseases,PCVD）是继猪蓝耳病（Porcinere productive and respiratory syndrome,PRRS）之后新发现的猪的重要传染病。猪圆环病毒2型（下文提到的圆环病毒都指猪圆环病毒2型）为该病的病原,有两种基因型,PCV2a和PCV2b,一般认为后者在猪场的感染率更高,致病力也更强。     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）是迄今发现的最小的动物病毒之一。PCV具有PCV1和PCV2两种基因型。PCV1无致病性。PCV2有致病性,它不仅是断奶猪多系统衰竭综合症（Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS）的主要病原（Bolin等，2001；McNeilly等，2001），     

调查人用疫苗中猪圆环病毒污染情况

在两个人用轮状病毒疫苗中发现了猪网环病毒1型（PCV1）和2型（PCV2）的基因，我们继续调查PCV1的基因序列是否在其它病毒疫苗中存在。我们用qRT—PCR检测疫苗种毒、散装和成品疫苗，     

共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定

为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap(V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-ΔgE和pPRV-ΔgE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-ΔgE和rPRV-ΔgE。Western blot分析表明rPRV-V2C-ΔgE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64 ku和28 ku两个片段。重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C-ΔgE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖。本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础。     

猪圆环病毒2型竞争定量PCR检测方法的建立及应用

根据猪圆环病毒2型(PCV2)BF的序列设计引物,扩增472 bp的ORF2部分基因片段,并克隆到pGEM-T载体中,构建含PCV2-ORF2部分基因片段的重组质粒.利用Xba I限制性内切酶消化后获得共用同1对引物但缺失196 bp的竞争重组子.通过重组质粒与竞争重组子间的竞争定量PCR方法(qc-PCR),建立猪PCV2-ORF2的标准竞争曲线和直线回归方程,并对PCV2试验感染猪血清中PCV2核酸的动态变化进行了研究.     

猪圆环病毒2型(PCV2):发病机理及与先天性免疫的相互作用(I)

猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)是猪圆环病毒相关疾病(Porcine Circovirus–Associated Disease,PCVAD)的主要病原。病毒对淋巴组织具有嗜性,会导致猪的淋巴系统功能衰竭和免疫抑制。免疫刺激或其他病原共同感染会使该病加重。PCV2寄生在特定的免疫细胞,如巨噬细胞和树突状细胞中,并调节它们的功能。感染猪的IL-10和促炎性细胞因子上调会促进发病。猪的遗传特性将影响其对PCV2的易感性,但是病毒毒力的遗传决定簇目前还不清楚。PCV2 DNA和蛋白质与多种细胞基因相互作用,控制免疫反应,调节病毒的复制和致病。中和抗体和细胞介导免疫是重要的免疫相关保护。虽然目前有有效的疫苗,但是PCV2的变异株不断出现。尽管现在对了解PCV2的致病机理和免疫相互作用已经有了很大的进步,但仍旧存在很多问题有待解决。     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株毒力分析

本研究对367份猪内脏样本进行PCV2检测,对阳性样本进行2a/2b鉴别诊断,并采用ORF2测序方法对部分阳性样本进行测序。在发病猪群中PCV2b阳性率远高于健康猪群,而健康猪群中PCV2a的阳性率高于发病猪群,从而在临床表型方面论证了PCV2b毒力强于PCV2a。通过比较12株PCV2 ORF2推导氨基酸序列的关键氨基酸位点,9株PCV2b毒株在ORF2氨基酸76位为I,131位为T;而3株PCV2a毒株在ORF2氨基酸76位为L,131位为P,据比对结果可知,PCV2b毒株为强毒株,PCV2a毒株为弱毒株。研究结果表明,PCV2的2种亚型2a/2b无论是临床表型还是ORF2基因型,毒力表现都是有差异的,且PCV2b毒力要强于PCV2a。     

猪圆环病毒基因组结构及其分子特征研究进展

目前,国际上已分离获得2个不同血清型的猪圆环病毒（PCV）,并命名为猪圆环病毒1型（PCV-1）和猪圆环病毒2型（PCV-2）。PCV-1对猪无致病性,而PCV-2被认为是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原。PCV基因组为单股环状双向DNA,由2个头一头相对排列的开放性阅读框和基因间隔区组成,包含rep基因、cap基因及病毒DNA复制起始区茎环序列。rep基因编码2种不同的复制酶相关蛋白,cap基因编码病毒结构蛋白或衣壳蛋白,茎环序列在病毒蛋白合成、DNA自身复制及子代病毒产生中发挥重要作用。PCV-2衣壳蛋白110位（P→A）和191位（R→S）氨基酸突变,提高PCV-2在体外组织培养中的增殖效率,而减弱其对动物的致病性和毒力。