Mi基因家族番茄对南方根结线虫的抗性鉴定及评价

为明确Mi-1~Mi-9基因家族番茄材料对我国南方根结线虫的抗性,采用温室盆栽接种方法对37个番茄品种进行了抗性鉴定。结果明确了8个含有Mi基因的番茄材料中,7个材料对南方根结线虫表现为免疫或高抗。在抗性基因未明确的材料中,6个材料具有南方根结线虫抗性。在16个抗性未知的秘鲁番茄材料中,12个材料抗南方根结线虫。研究证实Mi基因家族番茄对我国南方根结线虫具有优良抗性,为进一步挖掘利用Mi家族基因提供了重要依据。     

南方根结线虫辣椒Me3毒性群体适合度代价及专化性分析

 将南方根结线虫自然群体在含有Me3抗线虫基因的辣椒HDA149上连续选择15代,获得了一对针对辣椒（Capsicum annuum L.）抗线虫基因Me3的南方根结线虫毒性和无毒近等基因系。通过将Me3毒性线虫接种在抗病辣椒HDA149、感病辣椒茄门以研究适合度代价,结果显示,南方根结线虫Me3毒性群体在感病辣椒上存在适合度代价,适应值仅为76%。将Me3毒性线虫接种在含有其它抗线虫基因（Mi、Me）的番茄和辣椒上研究南方根结线虫Me3毒性的专化性,结果表明Me3毒性线虫不能在含有Mi抗线虫基因的番茄上产生根结和卵块,但是可以在含有其它Me基因的辣椒上产生卵块。说明南方根结线虫Me3毒性对抗性基因Me 存在专化性。     

番茄抗根结线虫基因(Mi)和抗叶霉病基因(Cf5)的Multiplex-CAPS检测

 建立了同时检测番茄抗根结线虫基因(Mi) 和抗叶霉病基因(Cf5) 的Mutiplex-CAPS技术,并利用该技术检测了12份番茄材料含有的抗性基因。     

基于分子检测技术的番茄和茄子嫁接番茄砧木培育方法

摘要：为了获得能够同时作为番茄和茄子嫁接的砧木，选用自主培育的多抗番茄砧木组合26个，国内优良番茄嫁接砧木品种4个和国外引进番茄嫁接砧木3个，分别进行抗病基因包括抗根结线虫的Mi1和Mi-2、抗颈腐根腐的Frl、抗枯萎病的I-2/5和抗黄萎病的Ve1基因的分子标记检测；同时还测定了砧木品种根、茎的主要生理指标，包括壮苗指数（茎粗/株高）、根系质量和下胚轴长度等。结果表明：番茄砧木嫁接试验中，番茄接穗的嫁接成活率和移栽成活率均在95.0%以上，茄子接穗的嫁接成活率和移栽成活率均在85.0%以上。筛选出的HC483、HC484、HC490、HC493、HC494、HC495、500-2、B2和Y1共9个砧木品种综合表现较为突出，而且以这些番茄砧木培育得到的种苗长势旺盛、根系发达且抗多种病虫害。     

不同生态条件杧果着色及花色苷合成相关基因表达比较

【目的】比较2个不同生态区杧果果实着色的差异,并探讨着色差异的内在机理。【方法】试验于2012年比较了‘台农1号’杧果在四川攀枝花和广东雷州2个生态区的果皮颜色、花色苷含量和花色苷合成相关基因表达模式差异。【结果】四川攀枝花地区高海拔、昼夜温差大,较低降雨量,该生态区‘台农1号’杧果果皮花色苷含量显著高于雷州地区,着色较好,果皮色度角显著低于雷州地区。花色苷合成基因Mi PAL、Mi C4H、Mi CHS1、Mi F3H1、Mi DFR和Mi UFGT的相对表达量以攀枝花地区显著高于雷州地区,其中Mi C4H、Mi CHS1、Mi F3H1、Mi DFR和Mi UFGT基因的相对表达量分别为雷州地区的130、228、63、2.7和4.3倍。【结论】四川攀枝花地区海拔高、辐射强和昼夜温差大等生态因子有利于诱导果皮中花色苷合成相关基因尤其是Mi PAL、Mi CHS1、Mi DFR和Mi UFGT的表达,促进‘台农1号’果皮着色。     

辣椒抗根结线虫相关WRKY基因的分离

为了确定抗性基因Me3介导表达的抗根结线虫相关WRKY基因的种类及其表达特点,以含Me3基因的辣椒HDA149品种为材料,接种南方根结线虫二龄幼虫,通过同源克隆法获得辣椒4个WRKY新基因片段。利用RT-PCR技术克隆了WRKY-a、WRKY-b、WRKY-c、CaWRKY1、WRKY1和CaWRKY2等 6个WRKY基因的全长cDNA。研究表明,WRKY-a、CaWRKY2基因是受根结线虫诱导表达的;CaWRKY1基因的表达具有组织特异性,在根、叶中表达,在茎中不表达。聚类分析表明WRKY-a、WRKY-c、CaWRKY2蛋白属于第Ⅰ组WRKY蛋白,WRKY-b、CaWRKY1属于第Ⅱc亚组,WRKY1属于第Ⅱa亚组。     

野生番茄LA2157中热稳定抗根结线虫基因Mi-9候选基因的分离与过表达载体构建

根结线虫是番茄上的重要土传病害,选育抗根结线虫品种是最有效的防治方法,但是目前转育到栽培番茄中的抗根结线虫基因Mi-1在土温高于28℃时就丧失了抗性。本试验利用热稳定抗根结线虫野生番茄材料LA2157,根据Mi-1基因的序列信息,对其中热稳定抗根结线虫Mi-9基因进行同源克隆,在LA2157中共获得2个候选基因片段;通过In-Fusion克隆技术,将候选基因与过表达载体p BI121进行连接,经电泳检测和测序分析,最终构建Mi-9候选基因的过表达重组载体。     

杧果MiLCYB2基因启动子的克隆与序列分析

【目的】了解杧果Mi LCYB2基因的表达调控规律。【方法】应用染色体步移方法克隆了991 bp的Mi LCYB2基因启动子序列。【结果】用在线软件Plant CARE分析表明,该序列除含有启动子基本元件,如TATA-BOX、CAAT-BOX外,还含有ABA、GA、Auxin、SA、Me JA多种植物激素响应元件,以及参与生理周期调控、MYBHv1结合位点和光响应元件等一些其他的调控序列,推测Mi LCYB2基因的表达受多种植物激素、光照、生理周期、MYBHv1转录因子等的调控。【结论】杧果Mi LCYB2基因启动子的分离与序列分析为进一步探究杧果类胡萝卜素基因的调控机制提供了新的理论基础。     

土壤寄生性线虫及其生态防治对策研究

土壤寄生性线虫是温室生产中危害极大的病害之一.现根据多年生产经验,指出了土壤寄生性线虫含植物寄生性线虫、食真菌线虫、食细菌线虫、食肉性线虫和动物寄生性线虫5类,并对各类型线虫的生活习性和弱点进行了分析;提出了采取引进抗性品种、诱引作物利用、抗绿肥作物利用等不依赖农药消毒而进行土壤寄生性线虫防治的生态防治对策.     

果树线虫病害调查和防治

１９８８－１９９３年在福建省主要果树栽培区调查树线虫病，从果树根部和根际土壤中查出植物线虫２１属，其中根结线虫（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ）根腐线虫（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ）穿孔线虫（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ）肾状线虫，剑线虫，毛刺线虫和拟毛刺线虫，对果树有一定为害。试验结果表明，利用抗线虫果树和砧木品种，改良土壤，施用杀线虫剂等措施能有效防治果树虫病。     

杨梅根结线虫病研究

杨梅根结线虫病是一种新发现的杨梅病害，病原线虫为爪哇根结线虫，南方根结线虫和北方根结线虫。爪哇根结线虫为优势种。病害的影响因素有果树品种，种植方式和土壤ｐＨ值。呋喃丹对病害个有防治效果。调节土壤ｐＨ值和用客土改良土壤可以减缓病害和促进果树生长。     

不同番茄育种材料对TMV的抗性研究初报

重要基础工作,为此我们有目的地观察了一批含抗病基因的材料及野生番茄,并在自然条件及人工接种条件下对TMV的抗性表现进行了初步研究,以期了解这些材料的特性和进一步利用的可能性。 供试材料包括抗TMV、晚疫病、青枯病、根瘤线虫、黄萎病、枯萎病生理小种1、8等番茄砧木材料以及部分野生材料,番茄近缘野生种S.Pennellii等。 试验材料于3月8日播于温室,4月1日分苗,4月25日定植于露地,采用人工接种方法进行抗性鉴定。 一、含抗TMV基因GCR番茄 材料的抗性鉴定 (一)含不同抗TMV基因GCR系统番茄品种对北京地区主要TMV株系混合毒源的…     

抗番茄黄化曲叶病毒病番茄新品种“Ty191”的选育

“Ty191”是以S11为母本，TS30为父本的中早熟杂交一代番茄新品种。该品种果实粉红色，正圆形，单果质量约250 g。维生素C含量18.8 mg·(100g)^-1,β-胡萝卜含量207μg·(100g)^-1,总酸含量5.23 g·kg^-1,可溶性糖含量6 g·(100g)^-1,糖酸比11.47。色泽亮丽，红果，口味酸甜，抗裂果，质地硬，耐储运。含纯合Ty1和Ty3抗性基因，高抗番茄黄化曲叶病毒病，兼抗烟草花叶病毒病、枯萎病、叶霉病、根结线虫。耐热性强，适合于早秋、早春日光温室和大棚越夏栽培。2020年通过国家品种审认定，登记编号为GPD番茄(2020)150247。     

四重PCR技术鉴定番茄Ty-1、Ty-2、Mi和Cf-5基因研究

以番茄为试材,只利用1次PCR反应体系,同时对与番茄黄化曲叶病毒病(Tomatoyellow leaf curl virus)的Ty-1、Ty-2基因、番茄根结线虫病(Root-knot nematode)的Mi基因和番茄叶霉病(Leaf mold)的Cf-5基因紧密连锁的SCAR标记进行了筛选.结果表明:扩增的特异性片段和单引物扩增的片段吻合,即对与Ty-1基因、Ty-2基因、Mi基因和Cf-5基因紧密连锁的片段特异性扩增,所获得的片段大小分别是395、900、750和960 bp.经TaqI酶切后所获得的特异性片段大小与前人试验所得大小基本相同,初步证明了四重PCR检测的准确性.该体系可对Ty-1、Ty-2、Mi和Cf-5 4个抗病基因进行同时筛选,在苗期辅助选择.降低了生产成本,节约时间、人力、物力,为分子标记辅助选择育种奠定了基础.     

番茄砧木及品种对南方根结线虫的抗性鉴定

 为了测定3种番茄砧木及7个番茄品种对南方根结线虫的抗病程度, 采用室内盆栽番茄人工接种南方根结线虫法调查番茄植株对根结线虫的抗性指标, 结果表明: 国外引进的5 个番茄抗性品种(Trofeo、Beatrice、1411、Romana、Garry) 及两个番茄砧木( Energy、He-Man) 均为抗性品种; 荷兰的Cairo和国内的耐线虫番茄品种中华一号为感病品种, 番茄砧木Beaufort为中感品种。     

抗黄化曲叶病毒病番茄新品种迪抗

迪抗是上海种都种业科技有限公司在2008年从以色列引进的高抗番茄黄化曲叶病毒病的一代杂交种,携带TY-1和Mi抗性基因。2008年和2009年秋季参加上海种都展示园区品种田间对比试验,表现高抗番茄黄化曲叶病毒病,果实大小均匀,商品性好。     

果树线虫病害调查和防治

１９８８－１９９３年在福建省主要果树栽培区调查果树线虫病。从果树根部和根际土壤中查出植物线虫２１属，其中根结线虫（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ），根腐线虫（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ），穿孔线虫（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ），肾状线虫（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ），剑线虫（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ），毛刺线虫（Ｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ）和拟毛刺线虫（Ｐａｒａｔｒｉｃｈｏｄｏｒｕｓ）对果树有一定为害。试验结果表明，利用抗线虫果树和砧木品种、改良土壤、施用杀线虫剂等措施能有效防治果树线虫病。     

香蕉穿孔线虫β-1，4-内切葡聚糖酶基因的克隆与特征分析

 植物寄生线虫的分泌物在线虫的侵染过程中具有重要的作用,其中纤维素水解酶是研究的较多的主要分泌物之一。采用RT-PCR和RACE方法,从香蕉穿孔线虫（Radopholus similis）中获得编码β-1,4-内切葡聚糖酶基因的cDNA序列,命名为RS-eng-1 （GenBank登录号为EU414839）。该cDNA序列全长为1 630 bp,包含一个1 404 bp的开放阅读框（ORF）,编码含467个氨基酸的蛋白,理论分子量与等电点分别为48.22 kD和6.04。序列分析表明该酶含有糖基水解酶家族5（GHF5）的保守结构域,N端具有22个氨基酸残基组成的信号肽,C端含有细菌式样的纤维素结合域（CBDⅡ）。原位杂交结果显示此基因在相似穿孔线虫的食道腺部位表达,并且Southern结果显示其为多拷贝基因。cDNA与基因组DNA重叠分析表明,此基因包含6个内含子,切割点符合5'-GT...AG-3'的规律。进化分析显示该酶与细菌Bacillus subtilis和Erwina carotovora 分泌的纤维素酶属于同一支,推测其来源于细菌的水平基因转移。     

广州地区番石榴根结线虫鉴定与14-3-3基因的克隆

【目的】摸清广州地区番石榴根结线虫的种类、分布及致病机制。【方法】观察番石榴根结线虫的雄虫、二龄幼虫、雌虫及其会阴花纹的形态学特征,根据根结线虫的通用引物#C2F3和#1108对线虫mt DNA的COⅡ和lr RNA基因间序列进行PCR扩增,获得750 bp的特异扩增产物,将扩增片段在Gen Bank上进行Blast比对。通过南方根结线虫与北方根结线虫的14-3-3序列设计简并引物,进一步扩增已鉴定的象耳豆根结线虫的14-3-3基因。【结果】广州地区番石榴根结线虫的形态与象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)相似;其扩增片段与象耳豆根结线虫(M.enterolobii)比对,序列相似性在99%以上。扩增了象耳豆根结线虫的14-3-3基因,结果显示该基因的开放阅读框包含783 bp的片段,编码261个氨基酸,命名为Me-14-3-3。【结论】广州地区番石榴根结线虫为象耳豆根结线虫(M.enterolobii),14-3-3蛋白基因被成功克隆,扩增结果为进一步研究14-3-3蛋白基因在象耳豆根结线虫生长发育中的功能、摸清致病机制等方面奠定良好的基础。     

辣椒抗根结线虫基因Me3的精细定位

 以含Me3基因的抗根结线虫辣椒自交系‘HDA149’为父本,感根结线虫辣椒自交系‘8214’为母本,构建了一个2 133株的F2作图群体。采用群体分离分析法（Bulked Segregant Analysis,BSA）,构建抗、感病两个DNA池,对由两亲本筛选出来的285对引物进行扩增分析,发现引物SSCP_B322和EPMS658在抗、感池间具有稳定的多态性。继续用这两对引物对F2单株进行扩增,以JoinMap 3.0软件分析发现SSCP_B322和EPMS658标记位于Me3基因两侧,遗传图距分别为0.56 cM和1.33 cM。运用回交群体BC1和F3群体验证实了这两个标记,可有效用于辣椒抗线虫分子标记辅助育种,也为图位克隆Me3基因奠定了基础。