猪卵子体外受精方法研究

本试验分析研究了：（1）猪卵子体外成熟所需要的培养时间；（2）促性腺激素和猪卵泡液对猪卵子体外成熟的作用；（3）不同体外受精次数对猪卵子体受精率的影响；（4）不同精子获能辅助剂对猪精子体外获能的作用；（5）不同种类猪精液的体外受精能力。研究结果表明，猪卵子体外成熟所需培养时间是32－36小时，在体外成熟培养液中加入0.25IU/ml PMSG（或FSH）和10％猪卵泡液可以促进猪卵子体外成熟，在精子体外获能培养液中加入0.05mg/ml肝素，在体外受精培养液中加入2mg/ml咖啡因可以促进猪精子体外获能并可提高体外受精率，体外成熟后的猪卵子进行2次受精可以获得较高的体外受精率，本试验用新鲜射出精子，冷冻射出精子，新附睾精子，冷冻附睾精子对体外成熟猪卵子进行体外受精，受精后卵裂率（2－4细胞期）分别是24.26％、23.40%,22.65%和24.24%。     

钙离子载体诱导猪冷冻精子体外获能的研究

本研究首次报道了猪冷冻精子的体外获能。用 I—A 诱导猪冷冻精子体外获能,可穿透去透明带仓鼠卵。I—A 浓度以0.3μM 为宜,穿透率为60%,有原核卵百分率为39.2%。咖啡因可促进 I—A 的作用,并能促进卵内原核的发育。I—A 可诱导猪冷冻精子的顶体反应,有顶体反应活精子百分率与穿透率呈强正相关(r=0.968,P<0.01,n=12)。结果说明,用 I—A 诱导获能的猪冻精可用于猪的卵子的体外受精。猪冻精在卵内的发育能力较低,推测这是猪冷冻精子受胎率低的一个主要原因。     

鸡精子获能的检测

许多哺乳动物如大鼠、雪貂、金黄地鼠、绵羊、山羊、猪、马、牛等存在受精的精子有一个获能期的现象。本研究的目的是用一个体外试验获得一个直接的证据，以证明鸡的精子与卵子受精，是否需要一个获能期。     

利用CTC染色进行猪精子不同体外获能方法的比较

为了探讨不同方法对猪精子体外获能的影响,本试验以猪的新鲜精液为研究对象,分别经肝素上游法、钙离子载体诱导法和咖啡因诱导法进行精子不同获能时间的处理,并利用金霉素荧光染色法（chlortetracycline,CTC）对其获能效果进行检验。结果表明,采用肝素上游法孵育40 min处理后,精子的获能比例显著高于其他各处理组（P<0.05）,说明肝素上游法可以较好地诱发猪精子在体外获能。     

肝素和钙离子载体诱导猪射出精子体外获能的研究

本文采用肝素和钙离子载体诱导猪射出精子体外获能,根据对去透明带仓鼠卵的穿透情况评价获能效果,并用台盼兰·姬姆萨染色观察精子的死活及顶体状态。结果表明,未经获能处理的猪精子不能穿透仓鼠卵,肝素和I-A均能诱导猪精子体外获能并引起顶体反应。经获能处理的精子,在授精后2小时穿透卵子,4小时开始形成雄原核,6小时形成发育良好的雄原核。肝素处理以100μg效果最好,穿透率达77.8%,有原核卵百分率达47.2%;I-A处理以0.3uM为宜,穿透率达66.7%,有原核卵百分率达42.4%。咖啡因与肝素和I-A具有协同作用,能提高精子的穿透能力。有顶体反应的活精子百分率与穿透率呈强正相关(肝素组:r=0.97,P<0.01;I-A组:r=0.94,P<0.01)。     

家畜精子的获能

许多动物的精子,在被自然射出或由副睾中取出时,并不具备同卵子结合的能力。只是当它们在母畜生殖道内存留一定时间,形态上和生化上发生一些变化之后,才能同卵子正常结合。这一现象称为精子的“获能”(capacitation)。二十多年来,这方面的研究很多。兔子精子的获能至少需要10小时,这同兔子的排卵反应需要10—14小时是相适应的。绵羊精子的获能,需要1.5小时。牛精子大约需要二十小时。此外还证实,田鼠、小鼠、雪貂、猫、猪、马、猴的精子都需要获能,而狗、鸡的精子则不需经过获能即可同卵子结合。至于人类的精子也是需要获能的。     

猪精子体外获能的研究概况

精子获能现象的发现大大促进了体外受精技术的发展。近年来，在精子体外获能的研究过程中不断加深了人们对精子获能机理的认识，同时也不断提高了精子体外获能的效果．进一步推动了体外受精技术的发展。就当前猪精子体外获能研究概况进行综述，希望能对进一步深入研究有所启示。     

精子成熟和体外受精

无论在体内或体外,精子和卵子的成熟对于受精的成功都是必需的。精子的成熟不仅包括在雄性动物体内所发生的过程,亦包括在雌性动物所发生的获能过程。牛精子是在输卵管中获能。在体内,获能活性存在于发情时的输卵管液中,而不存在于黄化输卵管液中。实验证明,发情输卵管液的获能活性是因其中含有氨基多糖(Glycosaminoglycan):肝素或硫酸肝素。在体外,肝素可使牛精子获能,使鲜精或冻精的受精率超过70％。用肝素获能的精子作体外受精,已能使胚胎发育,并已出生犊牛。肝素使精子获能的机理尚不清楚。肝素可     

发情羊血清和血清白蛋白对幼龄杜寒羊体外受精效果的影响

正哺乳动物体外受精技术(in vitro fertilization,简称为IVF)是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。它由精子采集、体外获能和卵母细胞采集、体外成熟、受精、受精卵培养等技术组成。目前已有10多种哺乳动物的"试管动物"相继出生。但在羊的体外受精技术研究中,一直存在着精子获能效果差和卵母细胞卵裂率低等问题。迄今为止,未见有关在幼龄绵羊的卵母细胞体外     

猪卵母细胞的体外成熟与体外受精的研究现状

<正> 自从张明宽(1958)首次报道兔卵子体外受精获得成功,并产下仔兔以来,30多年中,有关哺乳动物的体外受精研究已取得进展。但猪的体外受精研究较晚,直到1986年,台湾郑登贵才首次报道“试管猪”。现在我国许多教学和科研单位也在从事此项课题的研究。本文拟从猪卵母细胞的体外成熟培养、精子的体外获能和体外受精等方面,简述其研究现状。一、猪卵母细胞的体外成熟培养 1.卵子的收集母猪在宰后半小时内摘取卵巢,放入加有抗菌素的生理盐水(35～37℃),2小时内带回实验室。用2.5ml注射器从卵巢中吸取直径为2～8mm卵泡     

牛精子体外获能的研究进展

文章从精子体外获能的分子机制和体外获能的影响因素等两个方面对牛精子体外获能的发展现状作了比较全面的概括.同时指出了各种处理精子方法的优缺点.并指出了牛精子体外获能的研究价值和意义.     

水貂银狐精子体外获能前后表面元素变化的研究

哺乳动物精子的体外获能是体外受精中的一个关键问题,而元素成分又在精子获能中发挥着极其重要的作用。Yanagimachi(1982)提出仓鼠精子的体外获能与钙元素有关;Mrsny等(1987)发现钾、镁元素是仓鼠精子获能和顶体反应所必需的;Hyne(1984)又证实钠也是豚鼠精子体外获能或顶体反应最重要的元素。然而,在野生动物水貂和银狐精子获能前后元素成分的变化,至今国内外尚     

猪卵泡卵母细胞的体外成熟与体外受精

本试验对猪卵泡卵母细胞不同体外成熟培养时间、不同精子获能时间、不同精卵共孵育时间对体外受精的影响进行了研究。结果表明,体外成熟培养44 h左右,精子获能时间在1～2 h之间,精卵共孵育时间在6～8 h之间,受精后卵裂率最高。     

β-谷甾醇、淫羊藿苷对猪精子体外获能效果的影响

探讨中药单体成分β-谷甾醇(β-sitosterol)、淫羊藿苷(Icariin,Ica)对猪精子体外获能的影响,以期提高体外受精效果.以mTBM+肝素获能液为对照组,分别添加β-谷甾醇、淫羊藿苷的低、中、高3个剂量为试验组,利用金霉素荧光染色(chlortetracycline,CTC)法结合体外受精检验体外获能效果.在mTBM+肝素中添加β-谷甾醇2(中剂量0.08 mg/L)、淫羊藿苷2(中剂量17 mg/L)的B型精子率(获能精子)显著高于对照组和其他剂量组(P＜0.05),F型精子率(未获能精子)显著低于对照组和其他剂量组(P＜0.05),AR型精子率(发生顶体反应精子)与对照组和其他剂量组差异不显著(P0.05),卵裂率和囊胚率均极显著高于对照组和其他剂量组(P＜0.01);表明中药单体成分β-谷甾醇、淫羊藿苷能够显著促进猪精子体外获能效果.     

不同获能条件对猪精子体外获能和体外受精的影响

探讨猪精子在mTBM和TALP中分别获能2、3、4、5h和6h对体外获能的影响,并研究最适获能时间的精子体外受精的效果。结果表明:随着获能时间的延长,猪精子顶体反应率逐渐升高、质膜完整性逐渐下降,获能6h时的顶体反应率显著高于其他时间组,分别为52.5%和50.8%(P<0.05);质膜完整性显著低于其他时间组,分别为30.5%和31.4%(P<0.05);可获能4h的超激活运动率显著高于其他时间组,分别为56.6%和54.5%。将鲜精与冻融的精子获能4h后与成熟的猪卵母细胞进行体外受精,mTBM处理组的卵裂率显著高于TALP,分别为42.7%与40.2%和35.9%与33.4%,但鲜精与冷冻精液组间差异不显著。     

肝素钙离子载体咖啡因在家畜精子体外获能中的作用

前言自 Brackett 等(1981)通过体外受精(InVitro Capacition,IVF)技术获得首例试管牛以来,已相继通过 IVF 得到了绵羊(花田章1985)、山羊(福田丰,1986)、猪(Cheng等,1986)的试管后代,我国也先后在牛、绵羊、猪取得成功。精子在与卵子受精之前必须发生获能和顶体反应,精子的体外获能和顶体反应是家畜体外受精过程的重要一环。自 Chang 和 Austin(1951)发现精子的获能现象以来,许多学者     

猪精子获能前后细胞亚组分蛋白分离及酪氨酸磷酸化蛋白的鉴定

本研究对猪精子获能前后细胞亚组分蛋白进行分离以及对酪氨酸磷酸化蛋白进行鉴定,旨在为哺乳动物精子受精生物学研究奠定理论基础。利用动物精子体外获能培养、细胞亚组分分离技术及蛋白免疫印迹的方法,分离猪精子细胞亚组分蛋白及酪氨酸磷酸化蛋白鉴定。结果表明,猪精子经过获能培养后各项活力指标均得到显著提高,且与精子蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰密切相关;获能精子中126、108、79ku的高分子量蛋白磷酸化程度明显高于未获能精子;分子质量约为25、47、50ku的膜蛋白及47ku胞浆蛋白发生酪氨酸磷酸化,其中25、47ku的膜蛋白酪氨酸磷酸化程度显著高于未获能精子(P<0.05);分子量约为23、37、42～50ku的核蛋白发生酪氨酸磷酸化,获能精子中23ku的核蛋白酪氨酸磷酸化程度显著高于未获能精子(P<0.05)。结果提示,猪精子细胞不同亚组分中,发生酪氨酸磷酸化修饰的蛋白以膜蛋白及核蛋白为主,同时有少量的胞浆蛋白。     

哺乳动物的精子获能及其鉴定

精子获能是精卵结合的前提,是哺乳动物受精过程中的关键环节。精子获能的发现促使体外授精研究取得了突破性进展,为人类研究受精机理奠定了基础。本文从体内、体外两方面论述了哺乳动物精子获能的培养方法,并且对精子获能的评价方法进行了综述。     

半胱氨酸对猪卵母细胞体外成熟、体外受精及GSH水平的影响

体外受精技术也称胚胎生产技术（invitro production,IVP）,包括卵母细胞的体外成熟、精子的获能、卵子的体外受精和受精卵的体外培养等几个连续的过程。半胱氨酸是GSH的前体物质,在牛体外胚胎生产过程中疏基复合物能增加细胞内GSH的合成,在受精和胚胎的开始阶段保持高浓度GSH可以增加发育率。试验的目的是评价半胱氨酸对猪卵母细胞的成熟率、受精率及成熟培养时期卵母细胞内GSH水平的影响,现报道如下。     

卵子获能探讨

二十多年来,关于精子的“获能”(Capac-itation.)研究很多,并取得不少进展。精子存在着“获能”及“去能”(decapacita-tiorn)作用已为人们研究证实,至于卵子有没有“获能”与“去能”(衰老化)作用呢?这是本文探讨与研究的主要内容。卵子是一个经高度分化的细胞,能受精并继而进行胚胎发育。大多数农畜和其它一些哺