山羊精液保存与人工授精

正精液保存与人工授精技术最大限度地提高了优秀种公畜的利用率,加速了品种改良。精液保存技术分为常温保存、低温保存和冷冻保存三种类型。常温保存因保存时间很短,在生产上意义不大,研究较少。目前对山羊精液保存技术的研究主要集中于低温保存(冷藏)和冷冻保存。精子代谢速率决定了精液低温保存时间,暂时抑制精子的代谢活动,可在不丧失受精能力的前提下延长精子的存活时间。抑制精子代谢率的方法主要有降低环境温度、降低稀释液p H及提高稀释液     

蓝狐精子常温保存与低温保存的比较研究

为探讨行之有效的精液保存方法,提高狐人工授精技术的效率,对9只种公蓝狐的精液进行了常温保存与低温保存试验。结果表明,常温保存精液精子平均存活时间为26.2 h,平均生存指数为12.75;低温保存精液精子平均存活时间为40 h,平均生存指数为17.92。低温保存可以延长精子的体外存活时间。数据分析结果表明,低温保存生存指数与常温保存生存指数的比值与常温保存生存指数呈线性关系,即低温保存效果与精液品质呈正相关,精液品质越高,低温保存效果越好。     

猪精液体外低温保存技术新进展

伴随猪联合育种的开展及人工输精技术的推广运用,猪精液低温保存技术已成为研究的热点。精液低温保存是通过降低或抑制精子新陈代谢、维持精子质膜及顶体结构完整性,延长精子体外存活时间。主要包括:液氮超低温(-196?℃)冷冻保存、4~5?℃低温"冷休克"保存以及15~17?℃鲜精体外保存。早期研究主要集中在低温保护剂和技术方法的筛选与优化,对猪精液低温保存进行了深入探索。近年来,有关猪精液低温保存过程中抑制猪精子低温损伤、延长精子的存活寿命及提高精子的受精能力等研究取得突破性进展。该文就近年来不同保存技术、保护剂及未来重点解决的问题进行简要概述,旨在为开展相关研究以及实际生产应用提供理论参考。     

猪精液低温保存运输箱的研制

精液的保存有两种方法,固态保存和液态保存,在生产实践中,因为猪精液低温保存的技术不成熟,所以猪精液主要以常温保存为主。由于常温保存的有效存活时间短,不便于长时间和长距离的保存运输,因此大大限制了人工授精技术的推广。为了延长猪精液的存活时间,保证母猪的受孕率,提高优良种猪的利用率,推动人工授精技术的大力发展,减少本交疾病的发生,本试验对猪精液的低温保存、低温保存稀释液的选择和猪精液低温保存运输箱进行研究。试验结果表明,猪精液低温保存的稀释液以Tris-乳糖稀释液(Tris 3.04g、柠檬酸1.3g、乳糖2.375g、青霉素0.06g、链霉素0.1g、双蒸水100mL、脱脂奶粉)的保存效果最佳(P0.05)。猪精液在低温保存运输箱的有效存活时间为(50.4±2.4)h,精液在冰箱冷藏室的有效存活时间为(59.3±15.1)h,低温保存运输箱与冰箱冷藏室之间差异不显著(P0.05)。猪精液低温保存运输箱中精液低温保存效果基本上与冰箱冷藏室中精子低温保存效果达到了一致水平。     

木糖醇对猪精液低温保存的影响

<正>虽然猪精液保存技术的研究已有近50年的历史[1],但其保存效果很不理想。主要原因是低温保存和冷冻保存后精子活率、顶体完整率、受精能力等都比鲜精要差[2]。在精液低温保存的过程中,精子膜的完整性对复苏后精子的活力和受精能力是至关重要     

家畜精液冷冻保存技术研究进展

家畜精液保存技术是二十世纪随着人工授精技术广泛应用而生产的,原理是通过降低或抑制精子新陈代谢程度达到延长精子在体外寿命的目的。为此,研究者试验将精液放在低温状态（非结冰）或冷冻（结冰）状态下保存。精液低温保存通常是在0～5℃范围施行,这是在冷冻保存以前常用的方法。显然,低温保存不可能很长时间。     

猪精液超低温保存技术及其对养猪业未来的重要作用

鉴于人工授精可以说是提高畜产动物生产性能最重要的工具,精液的长期保存可以给拥有优良畜产动物的生产者和人工授精行业带来许多额外的好处。精液的超低温保存技术可以大大地促进农业上优秀基因的扩散,快速地提高畜产动物的生产性能。就养猪行业来说,使用冷冻精液能有助于控制某些病原体的传播,因此可保护动物的健康。此外,备用的冷冻精液可以最大限度地减少突发性传染性疾病或自然灾害所产生的危害。再者,成功的超低温保存技术是精液的国际间销售所必需的。最后,基因库的影响力取决于是否有可供利用的实用的低温保存种质资源。尽管精液的长期保存具有这些潜在的优势,但是猪精子对低温非常敏感,且冷冻-冻融精液并没有被养猪行业普遍接受。笔者所在实验室的研究目标是利用超低温保存技术开发猪精液长期保存的有效操作规程。笔者猜测,既然精子质膜是低温诱导型损伤发生的主要部位,那么利用具有特殊特性的分子（如胆固醇）来增强精子细胞膜,将能够提高猪精子抵抗低温和超低温保存期间所产生不良作用的能力。根据笔者所在实验室的研究结果,这种方法应该有助于减缓精子冷却后功能上的下降,从而使其具有更好的存活力和运动能力和较低的不可调节精子获能和顶体反应发生率。     

褪黑素对羊精液低温保存效果的影响

为研究精液低温保存稀释液中添加不同浓度褪黑素对羊精液低温保存效果的影响,本试验将不同浓度褪黑素(0、10、20、40、80mg/L)添加到羊精液低温保存稀释液中,通过分析5d内各组之间的精子活率、顶体完整性、质膜完整性、线粒体活性等精子质量评定指标的差异。结果表明:经过5d的保存,20mg/L试验组对山羊精液的精子活率、顶体完整率、质膜完整率以及线粒体活性均显著高于其他试验组(P0.05)。说明适度浓度(20mg/L)的褪黑素有利于提高精子保存品质;但随着添加褪黑素浓度的升高(至80mg/L),精子低温保存效果下降明显。     

家畜精液的低温保存

家畜精液的低温保存是人工授精技术的新发展。精液保存在干冰(-79℃)或液氮(-196℃)中,精子可以长期存活。牛冷冻精液的最长保存时间已长达25年以上,这对于提高优良种畜的利用率,改良畜群品质有很大意义。精液冷冻保存的原理并不完全清楚。1938年Luyet氏提出了冷冻过程中的玻璃化学说,至今仍然是解释精子在低温中存活的主要学说。     

不同稀释液对蓝狐精子低温保存的影响

为探讨行之有效的精液保存方法,提高狐人工授精技术的效率,用4种稀释液对4只公蓝狐精液进行体外低温保存,采用伊红-苯胺黑法检测精子活率,低渗肿胀法检测精子质膜的完整性,考马斯亮蓝染色法检测精子的顶体状态。结果表明:低温保存时精子的活率、质膜的完整性、顶体的完整性明显比常温保存时比率高;氨基乙酸稀释液对精子的保存效果优于其他3种稀释液,精子活率为(63.62±2.47)%,质膜完整性为(57.00±3.17)%,顶体完整性为(65.30±2.48)%。     

葡萄籽原花青素对山羊精液低温保存效果的影响

为提高精液低温保存质量,在山羊精液低温保存基础稀释液中分别添加浓度为0、10、30、50、70 mg/L葡萄籽原花青素,检测精液保存过程中各组之间的精子活率、顶体完整性、质膜完整性、线粒体活性、T-AOC、MDA等精子质量评定指标,探讨葡萄籽原花青素对山羊精液低温保存效果的影响及最适添加浓度。结果表明:一定浓度葡萄籽原花青素可提高精液保存质量,且最适添加浓度30 mg/L。在30 mg/L处理组中,精液各项指标(MDA除外)在保存期间均最高,且5 d时精子活率、顶体完整率.、线粒体活性、T-AOC显著高于其他组(P0.05),其精子活率为51.46%,顶体完整率为67.55%,质膜完整率为50.97%,线粒体活性为50.78%。     

谷胱甘肽对湖羊精液低温保存效果的影响

为探究谷胱甘肽(GSH)对湖羊精液低温保存效果的影响,在基础稀释液中分别添加了0(对照组)、2、4、8、10 mM的GSH,在4℃保存过程中对精子的活率、活力及直线速率等运动性能指标进行了检测。结果表明,与对照组相比,在保存1～3 d时,4～8 mM的GSH显著提高了精子活率(P0.05),10 mM的GSH对精子活率没有显著影响(P0.05);保存4～6 d时,4 mM的GSH显著提高了精子活率和精子运动性能(P0.05)。说明GSH可以提高湖羊精液在低温保存下的质量,且以4 mM的GSH对湖羊精液的低温保存效果最好。     

猪精液4℃低温保存技术研究

为丰富猪鲜精保存技术、改善与提高精液保存质量,本研究以市场占有率高、性能稳定和可耐受4℃低温的长效稀释剂为对照,探讨本课题组研制的4℃稀释剂(低温Ⅰ号、低温Ⅱ号)对猪精液低温保存效果的影响。结果表明:低温Ⅰ号和低温Ⅱ号稀释剂对猪精液的有效保存时间和总存活时间均显著高于对照组(P<0.05)。保存至第6天时,对照组精子活力显著降低(P<0.05),保存至第10天时,低温Ⅰ号、低温Ⅱ号、对照组精子活力分别为74.6、76.0、0;保存第10天时,对照组pH显著低于2个实验组(P<0.05);保存从第5天开始,实验组质膜完整性显著高于对照组(P<0.05)。综上,本课题组研制的稀释剂对猪精液4℃低温保存效果较好,而且低温Ⅱ号对精子活力和质膜完整性保存效果更优。     

水蛭素对猪精液低温保存的影响

为了改善猪精液低温保存方法,通过在改进的猪精液低温稀释液中添加不同浓度(0,0.50,1.00,1.50,2.00 mg/mL)的水蛭素,研究在4℃低温保存条件下其对猪精液品质的影响。试验采用PI荧光染色检测精子活率,利用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活力,Diff-Quik染色检测精子畸形率,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整率及采用低渗肿胀法(HOST)检测质膜完整率。猪精液保存7 d,每天检测上述指标,试验重复5次。结果表明:稀释液中添加一定浓度的水蛭素在一定时间内有利于维持精子的活率、活力,降低精子的畸形率,提高精子的顶体完整率和质膜完整率,并且水蛭素浓度越高,保存效果越好。因此,在本试验条件下,2.00 mg/mL是水蛭素在猪精液低温保存时的最佳添加浓度。     

猪精液4℃保存的研究进展及技术措施

目前人工授精技术已广泛应用于畜牧生产中,一直以来猪精液的保存以及高效利用都是研究热点,然而猪精液4℃低温保存技术受诸多因素影响没能得到良好应用。文章主要以现阶段猪精液保存技术为基础,探讨4℃低温保存技术的机制、优势,影响猪精液4℃保存的因素,并对4℃低温保存技术措施进行系统综述,旨在完善4℃低温保存技术体系,为生猪人工授精技术的进一步发展提供理论基础以及新的路径。     

绵羊精液4℃液态保存的稀释液配方优化研究

本试验旨在通过改变绵羊精液低温保存稀释液组成成分,探讨添加脱脂奶粉替代牛奶和大豆卵磷脂替代卵黄在精液低温保存的可行性。试验一在绵羊精液稀释中,添加不同浓度的(4%、7%、10%、13%)脱脂奶粉替代鲜牛奶作为试验组,对照组添加牛奶。结果表明:10%的脱脂奶粉替代牛奶,随着绵羊精液4℃液态保存时间的延长,其精子活力、存活率、顶体完整率与牛奶组差异均不显著(P0.05),添加4%、7%和13%脱脂奶粉组的上述指标则随着精液保存时间的延长呈现显著下降趋势(P0.05)。在试验一的基础上,试验二用不同浓度(0.375%、0.75%、1.5%、3%)的大豆卵磷脂取代稀释液中的卵黄,进行绵羊精液低温保存试验。结果表明以0.375%的大豆卵磷脂取代绵羊精液低温保存稀释液中的卵黄时,对精子保存效果最好,随着保存时间的延长精子活力、存活率、顶体完整率与对照组差异均不显著(P0.05)。     

稀释液冻干粉剂低温超长时间保存绵羊精液效果

为研究经过冷冻干燥处理的粉剂稀释液与原稀释液对绵羊精液保存的效果,采集6只盘羊与巴什拜羊杂交公羊的精液,分别用粉剂稀释液(A组)和原稀释液(B组)稀释降温后的冰水混合物长期保存,在第0、1、3、6、9和12天分别对精子活率和顶体完整率进行检测,并统计低温保存第9天的精液进行人工授精的受胎率。结果表明:粉剂稀释液与原稀释液低温长时间保存绵羊精子,在保存第9天的精子活率均能达到0.5,顶体完整率均高于65%,粉剂稀释液与原稀释液对精子活率和顶体完整率的保护能力无明显差异(P0.05);粉剂稀释液与原稀释液在低温保存第9天后进行人工授精,受胎率分别为66.9%和67.8%,两者受胎率差异不显著(P0.05)。说明稀释液冻干粉剂与液体稀释液低温保存绵羊精子具有相同效果。     

N-乙酰半胱氨酸对绵羊精液低温保存效果的影响

为研究精液稀释液中不同浓度N-乙酰半胱氨酸(NAC)对绵羊精液低温保存效果的影响,试验用含有不同浓度(0,0.5,1.0,1.5,2.0 mmol/L)NAC的绵羊精液稀释液在4℃条件下保存绵羊精液,并对精子活率、有效存活时间以及48小时的精子畸形率和顶体完整率进行了检测。结果表明:在稀释液中添加1.0 mmol/L的NAC能显著提高精子有效存活时间、总存活时间和48小时精子的顶体完整率(P0.05)。说明添加1.0 mmol/L NAC的精液稀释液能显著改善绵羊精液的低温保存效果。     

影响猪精液保存时间的因素

猪的人工授精是各种家畜人工授精技术程序中最简单的，但猪的精液不能长时间保存成为制约猪人工授精广泛开展的主要因素。猪精子的生理特点，使猪的精液在保存方法上受到限制，即只能采用常温保存。另外，还有许多因素，会使猪的精子的保存时间受到影响。本文重点探讨影响猪精液保存时间的因素，以供从事猪人工授精的人员参考。1 保存温度1.1 低温保存猪的精子大约在12～13℃为低温极限温度。猪的精液加入除糖类外，再加入卵黄液，即使在12℃的温度下保存效果也不理想。目前猪的精子不能耐受低温的原因尚不清楚。浓缩精液(分离出大部分的精…     

蜂王浆对低温保存绵羊精子质量和糖转运蛋白GLUTs表达的影响

实验旨在研究稀释液中添加蜂王浆对低温保存绵羊精子质量和糖转运蛋白丰度的影响。通过假阴道法采集8只杜泊公羊精液,将活率不低于0.8的精液混合,分别用含0.00%、0.25%、0.50%、0.75%和1.00%蜂王浆的稀释液将精液稀释至8倍,0.00%蜂王浆组为对照组,置于5℃保存。在保存0、24、48、72 h利用计算机辅助精子分析系统、低渗膨胀实验、双荧光探针和Western Blot分别检测精子运动参数、质膜完整性、线粒体活性以及糖转运蛋白GLUT 3和GLUT 8丰度。结果表明：在低温保存72 h时,0.75%蜂王浆组精子的活率、活力、直线运动速率、路径速度、曲线运动速率、质膜完整性和线粒体活性均显著高于对照组。WesternBlot结果显示精子GLUT3和GLUT8丰度均随保存时间延长而降低,保存72h时GLUT8的丰度显著低于0 h;保存72 h时0.75%蜂王浆组GLUT 3和GLUT 8丰度显著高于对照组。综上,在稀释液中添加0.75%的蜂王浆可有效提高低温保存绵羊精子的质量,这与精子GLUTs蛋白表达和精子能量代谢密切相关。