家畜精液冷冻保存技术的研究综述

家畜精液保存技术是２０世纪随着人工授精技术的广泛应用而产生的,原理是通过降低或抑制精子的新陈代谢强度从而达到延长精子体外寿命的目的。为此,研究者试验将精液放在低温液态（非结冰）或冷冻（结冰）状态下保存。有关精液冷冻保存方面的研究资料已经有很多,现就此综述如下：精液冷冻保存技术的历史精液零度以下保存的研究开始于意大利人Ｓｐａｌｌａｎｚａｎｉ（１７７６）。他试验把哺乳动物精液装在小瓶里,并放在雪里,然后放回气温下,观察精子的活动状态。制冷技术出现以后,研究者便在人工低温下试验保存精液。Ｍａｎｔｅｇ…     

蓝狐精子常温保存与低温保存的比较研究

为探讨行之有效的精液保存方法,提高狐人工授精技术的效率,对9只种公蓝狐的精液进行了常温保存与低温保存试验。结果表明,常温保存精液精子平均存活时间为26.2 h,平均生存指数为12.75;低温保存精液精子平均存活时间为40 h,平均生存指数为17.92。低温保存可以延长精子的体外存活时间。数据分析结果表明,低温保存生存指数与常温保存生存指数的比值与常温保存生存指数呈线性关系,即低温保存效果与精液品质呈正相关,精液品质越高,低温保存效果越好。     

山羊精液保存与人工授精

正精液保存与人工授精技术最大限度地提高了优秀种公畜的利用率,加速了品种改良。精液保存技术分为常温保存、低温保存和冷冻保存三种类型。常温保存因保存时间很短,在生产上意义不大,研究较少。目前对山羊精液保存技术的研究主要集中于低温保存(冷藏)和冷冻保存。精子代谢速率决定了精液低温保存时间,暂时抑制精子的代谢活动,可在不丧失受精能力的前提下延长精子的存活时间。抑制精子代谢率的方法主要有降低环境温度、降低稀释液p H及提高稀释液     

家畜精液保存技术的研究

简要综述哺乳动物精液新鲜保存和低温保存技术的发展。精液保存技术始于本世纪初的精液低温保存试验,以后的重要发展是基于发现甘油的低温保护作用,而建立的冷冻保存技术。以牛、猪、兔精子为主,讨论精子代谢、膜功能和细胞结构特性与保存效果间的关系。     

猪精液体外低温保存技术新进展

伴随猪联合育种的开展及人工输精技术的推广运用,猪精液低温保存技术已成为研究的热点。精液低温保存是通过降低或抑制精子新陈代谢、维持精子质膜及顶体结构完整性,延长精子体外存活时间。主要包括:液氮超低温(-196?℃)冷冻保存、4~5?℃低温"冷休克"保存以及15~17?℃鲜精体外保存。早期研究主要集中在低温保护剂和技术方法的筛选与优化,对猪精液低温保存进行了深入探索。近年来,有关猪精液低温保存过程中抑制猪精子低温损伤、延长精子的存活寿命及提高精子的受精能力等研究取得突破性进展。该文就近年来不同保存技术、保护剂及未来重点解决的问题进行简要概述,旨在为开展相关研究以及实际生产应用提供理论参考。     

采用环磷酸腺甙（cAMP）低温保存家兔精液的品质与受胎率

用假阴道采集１０只新西兰白兔的精液，经测定精子活力强，密度大，呈前进运动。然后用三羟甲基氨基甲烷缓冲液作抗冻保护，使精液在２小时内冷却至５℃，放置２天。低温保存时加入５毫克分子浓度的咖啡碱或茶碱，并在３７℃条件下持温２小时。在受胎率试验中，选用４３只新西兰白兔，每次用新鲜精液，低温冷藏精液或添加５毫克分子浓度茶碱于稀释低温保存精液输精０．５毫升（含精子１５ｘ１０~６）。结果表明，含５毫克分子浓度咖啡碱或茶碱稀释的低温保存精液，游动精子的比例增加（Ｐ＜０．０１），但持温保存时游动精子的比例降低（Ｐ＜０．０１），且精子顶体异常率增加（Ｐ＜０．０１），乳酸脱氢酶释放进入细胞间质。采用含５毫克分子浓度茶碱低温保存精液的配种效果与鲜精相同；但鲜精与冷藏精液相比，则差异显著（Ｐ＜０．０５）。采用鲜精，冷藏精液及含茶碱低温保存精液输精，母兔的产仔率分别为７０．６％，４１．７％和６４．３％．     

猪精液超低温保存技术及其对养猪业未来的重要作用

鉴于人工授精可以说是提高畜产动物生产性能最重要的工具,精液的长期保存可以给拥有优良畜产动物的生产者和人工授精行业带来许多额外的好处。精液的超低温保存技术可以大大地促进农业上优秀基因的扩散,快速地提高畜产动物的生产性能。就养猪行业来说,使用冷冻精液能有助于控制某些病原体的传播,因此可保护动物的健康。此外,备用的冷冻精液可以最大限度地减少突发性传染性疾病或自然灾害所产生的危害。再者,成功的超低温保存技术是精液的国际间销售所必需的。最后,基因库的影响力取决于是否有可供利用的实用的低温保存种质资源。尽管精液的长期保存具有这些潜在的优势,但是猪精子对低温非常敏感,且冷冻-冻融精液并没有被养猪行业普遍接受。笔者所在实验室的研究目标是利用超低温保存技术开发猪精液长期保存的有效操作规程。笔者猜测,既然精子质膜是低温诱导型损伤发生的主要部位,那么利用具有特殊特性的分子（如胆固醇）来增强精子细胞膜,将能够提高猪精子抵抗低温和超低温保存期间所产生不良作用的能力。根据笔者所在实验室的研究结果,这种方法应该有助于减缓精子冷却后功能上的下降,从而使其具有更好的存活力和运动能力和较低的不可调节精子获能和顶体反应发生率。     

还原型谷胱甘肽对西门塔尔牛精液低温保存效果的影响

本实验旨在探究还原型谷胱甘肽（GSH）对西门塔尔牛精液低温保存（0℃）的影响。在精液稀释液中分别添加0（对照组）、1、2、4、6 mmol/L的GSH,在0℃条件下保存24、72、120、168、216 h时检测精子活力、顶体完整率和质膜完整性等指标;保存72 h和168 h时检测精子的丙二醛（MDA）水平、三磷酸腺苷（ATP）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性。结果表明：在精液低温保存72 h时,4 mmol/L GSH添加组的精子活力、顶体完整率、质膜完整性、CAT活性、ATP含量和GSH-Px活性高于对照组（P<0.05）;在精液低温保存168 h时,4 mmol/L GSH添加组的精子活力、顶体完整率、质膜完整性、CAT活性、ATP含量和GSH-Px活性高于对照组与其他GSH添加组（P<0.05）,MDA水平低于其他组（P<0.05）。因此,在本实验条件下,在精液稀释液中添加4 mmol/L GSH可以有效提高精液品质和精子的抗氧化能力,延长精子的保存时间。     

四种抗氧化剂对猪精液冷冻保存影响研究进展

猪作为重要的畜牧产品正受到越来越多的关注。为了保证生产效率和生产质量，现在多采用人工授精进行大规模生产养殖。目前保存方法多采用常温下17℃保存、4℃的低温保存、超低温-79℃（干冰）或-196℃（液氮）三种保存方法。随着人工授精技术在养猪业的普及，对猪精液保存技术的研究正在逐步深入。猪精液可以在常温下短时间保存，并且精子活力和质量也受许多因素影响。与冷冻精液相比，常温保存的精液受孕率高、投资少、人工操作方便，可产生较大的经济效益。     

猪精液冷冻技术

<正>精液冷冻保存技术(Semen freezing)是将精液特殊处理后,通过液氮(-196℃)、干冰(-79℃)或其它冷源冷冻,超低温保存,使精液达到长期保存。精液冷冻保存技术的主要原理是精子在冷冻状态下,代谢几乎停止,生命保持相对静止状态,升温后又能复苏而不失去受精能力。     

木糖醇对猪精液低温保存的影响

<正>虽然猪精液保存技术的研究已有近50年的历史[1],但其保存效果很不理想。主要原因是低温保存和冷冻保存后精子活率、顶体完整率、受精能力等都比鲜精要差[2]。在精液低温保存的过程中,精子膜的完整性对复苏后精子的活力和受精能力是至关重要     

猪精液低温保存运输箱的研制

精液的保存有两种方法,固态保存和液态保存,在生产实践中,因为猪精液低温保存的技术不成熟,所以猪精液主要以常温保存为主。由于常温保存的有效存活时间短,不便于长时间和长距离的保存运输,因此大大限制了人工授精技术的推广。为了延长猪精液的存活时间,保证母猪的受孕率,提高优良种猪的利用率,推动人工授精技术的大力发展,减少本交疾病的发生,本试验对猪精液的低温保存、低温保存稀释液的选择和猪精液低温保存运输箱进行研究。试验结果表明,猪精液低温保存的稀释液以Tris-乳糖稀释液(Tris 3.04g、柠檬酸1.3g、乳糖2.375g、青霉素0.06g、链霉素0.1g、双蒸水100mL、脱脂奶粉)的保存效果最佳(P0.05)。猪精液在低温保存运输箱的有效存活时间为(50.4±2.4)h,精液在冰箱冷藏室的有效存活时间为(59.3±15.1)h,低温保存运输箱与冰箱冷藏室之间差异不显著(P0.05)。猪精液低温保存运输箱中精液低温保存效果基本上与冰箱冷藏室中精子低温保存效果达到了一致水平。     

鸡精液稀释配方对低温保存精子活力和输精效果的影响

为了完善中国南方地区鸡场公鸡精液的保存技术、提高精液的利用率，本试验研究了在低温（4 ℃）保存的条件下，不同的保存时间（0、4、8、24 h）、不同的稀释液配方（原精液、配方Ⅰ和配方Ⅱ）对精液的精子活力变化以及人工输精繁殖效果的影响。选用33周龄黄鸡母鸡192只、公鸡42只，192只母鸡依笼号分为12组（3种处理精液×4个保存时间），每组16只母鸡，公鸡不分组。统一采精后用两种不同稀释液稀释、低温（4 ℃）保存至0、4、8、24 h后观察精子活力，并对母鸡输精，分组收集鸡蛋，对各组受精率、出雏率、健雏率进行比较分析，以原精液低温保存作为对照。结果显示，两种稀释液组的精子低温（4 ℃）保存4、8、24 h，其精子活力极显著高于原精液组（P<0.01），配方Ⅱ组精子的活力高于配方Ⅰ组（P>0.05）；两种配方稀释液组的精液低温（4 ℃）保存4 h，输精受精率高于原精液组（P<0.05）；两种配方稀释液组的精液在低温（4 ℃）保存8 h，输精受精率极显著高于原精液组（P<0.01）。表明这两种精液稀释液更有利于精液保存，经稀释后的精液可以显著提高受精率，可为中国南方鸡场种公鸡精液保存技术的完善提供有力的数据支撑。     

家畜精液的低温保存

家畜精液的低温保存是人工授精技术的新发展。精液保存在干冰(-79℃)或液氮(-196℃)中,精子可以长期存活。牛冷冻精液的最长保存时间已长达25年以上,这对于提高优良种畜的利用率,改良畜群品质有很大意义。精液冷冻保存的原理并不完全清楚。1938年Luyet氏提出了冷冻过程中的玻璃化学说,至今仍然是解释精子在低温中存活的主要学说。     

不同稀释液对蓝狐精子低温保存的影响

为探讨行之有效的精液保存方法,提高狐人工授精技术的效率,用4种稀释液对4只公蓝狐精液进行体外低温保存,采用伊红-苯胺黑法检测精子活率,低渗肿胀法检测精子质膜的完整性,考马斯亮蓝染色法检测精子的顶体状态。结果表明:低温保存时精子的活率、质膜的完整性、顶体的完整性明显比常温保存时比率高;氨基乙酸稀释液对精子的保存效果优于其他3种稀释液,精子活率为(63.62±2.47)%,质膜完整性为(57.00±3.17)%,顶体完整性为(65.30±2.48)%。     

甘油和海藻糖对低温保存精液品质的影响

为了研究低温保存下海藻糖和甘油对牛精液品质的影响,本试验选取了宁夏四正生物技术公司的健康荷斯坦种公牛的精液,在低温保存液里分别添加5%的甘油以及0.028mol/L、0.014mol/L、0.0416mol/L的精液保护剂海藻糖为试验组,以不添加试剂的低温保存精液为对照组,对保存不同时间的精液品质进行测定。结果显示添加甘油的试验组精子活力低于对照组,但差异不显著（P〉0.05）。海藻糖浓度为0.0416mol/L组的精子畸形率低于对照组及其他海藻糖组,并且差异显著（P〈0.05）;海藻糖组与对照组精子活力相比,在24h、48h、72h时差异不显著（P〉0.05）;在96h、216h、240h时差异显著（P〈0.05）,其活力下降明显。     

原花青素对吐鲁番黑羊精液低温保存效果的影响

为研究原花青素（PC）对吐鲁番黑羊精液低温保存效果的影响,本实验采用假阴道法采集5只2岁成年吐鲁番黑羊公羊精液,在精液基础稀释液中添加不同浓度（0、10、20、30、40μg/mL）的PC进行低温保存,每隔24 h检测精子活率、活力、曲线速率（VCL）、直线速率（VSL）、畸形率、质膜完整率等指标,在保存24、72、120 h时检测总抗氧化能力（T-AOC）活性和过氧化氢酶（CAT）活性。结果表明：各PC添加组的精子活率、活力、VCL、VSL、质膜完整率、T-AOC和CAT活性均高于对照组（P<0.05）,畸形率低于对照组（P<0.05）,其中20μg/mL PC添加组的精子质量高于其他各组（P<0.05）。综上所述,在基础稀释液中添加PC可以显著提高精液品质,且PC添加浓度为20μg/mL时对吐鲁番黑羊精液低温保存效果最佳。     

水蛭素对猪精液低温保存的影响

为了改善猪精液低温保存方法,通过在改进的猪精液低温稀释液中添加不同浓度(0,0.50,1.00,1.50,2.00 mg/mL)的水蛭素,研究在4℃低温保存条件下其对猪精液品质的影响。试验采用PI荧光染色检测精子活率,利用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活力,Diff-Quik染色检测精子畸形率,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整率及采用低渗肿胀法(HOST)检测质膜完整率。猪精液保存7 d,每天检测上述指标,试验重复5次。结果表明:稀释液中添加一定浓度的水蛭素在一定时间内有利于维持精子的活率、活力,降低精子的畸形率,提高精子的顶体完整率和质膜完整率,并且水蛭素浓度越高,保存效果越好。因此,在本试验条件下,2.00 mg/mL是水蛭素在猪精液低温保存时的最佳添加浓度。     

影响猪精液保存时间的因素

猪的人工授精是各种家畜人工授精技术程序中最简单的，但猪的精液不能长时间保存成为制约猪人工授精广泛开展的主要因素。猪精子的生理特点，使猪的精液在保存方法上受到限制，即只能采用常温保存。另外，还有许多因素，会使猪的精子的保存时间受到影响。本文重点探讨影响猪精液保存时间的因素，以供从事猪人工授精的人员参考。1 保存温度1.1 低温保存猪的精子大约在12～13℃为低温极限温度。猪的精液加入除糖类外，再加入卵黄液，即使在12℃的温度下保存效果也不理想。目前猪的精子不能耐受低温的原因尚不清楚。浓缩精液(分离出大部分的精…     

葡萄籽原花青素对山羊精液低温保存效果的影响

为提高精液低温保存质量,在山羊精液低温保存基础稀释液中分别添加浓度为0、10、30、50、70 mg/L葡萄籽原花青素,检测精液保存过程中各组之间的精子活率、顶体完整性、质膜完整性、线粒体活性、T-AOC、MDA等精子质量评定指标,探讨葡萄籽原花青素对山羊精液低温保存效果的影响及最适添加浓度。结果表明:一定浓度葡萄籽原花青素可提高精液保存质量,且最适添加浓度30 mg/L。在30 mg/L处理组中,精液各项指标(MDA除外)在保存期间均最高,且5 d时精子活率、顶体完整率.、线粒体活性、T-AOC显著高于其他组(P0.05),其精子活率为51.46%,顶体完整率为67.55%,质膜完整率为50.97%,线粒体活性为50.78%。