黄绿木霉T1010对日光温室耕层土壤酶活性的调控效应

采用黄绿木霉T1010(Trichoderma aureoviride 1010)制剂处理日光温室番茄连作土壤,以常规生产区为对照,设黄绿木霉T1010和1/2黄绿木霉T1010两个处理,通过对土壤酶活性比色法测定,研究其对耕层土壤酶活性的影响,为应用黄绿木霉T1010改善土壤生态环境,促进番茄生长发育提供理论依据和技术支持。结果表明,不同处理条件下土壤酶活性不同,其中纤维素酶、几丁质酶、脲酶、蛋白酶、磷酸酶、多酚氧化酶活性大小顺序为:黄绿木霉T1010〉1/2黄绿木霉T1010〉CK;蔗糖酶、淀粉酶、过氧化氢酶、过氧化物酶活性最高的处理是1/2黄绿木霉T1010;对照处理的土壤中葡聚糖酶活性最高。ANOVA分析,除葡聚糖酶和蛋白酶,其他各处理酶活性差异显著。可见,黄绿木霉T1010对土壤中酶活性有一定调节作用,改善土壤生态环境,有效促进番茄根系的发育,进而促进番茄产量的形成。     

黄绿木霉T1010对日光温室土壤微生物群落的影响

在土壤中施用黄绿木霉T1010,于樱桃番茄生长过程中定期取土样测定微生物数量。结果表明,黄绿木霉T1010能促进土壤中其它有益微生物的生长。在樱桃番茄盛果期,黄绿木霉T1010制剂处理组土壤细菌群落数量比初始值提高3．27倍,比常规肥料处理组提高76％;在盛果期,黄绿木霉T1010制剂处理组放线菌数量比常规肥料处理组提高1．32倍;黄绿木霉T1010制剂施人土壤后有些种类真菌数量有所下降;黄绿木霉T1010在土壤中生长,也促进了固氮菌的繁殖,与土壤处理前相比,在樱桃番茄苗期、盛花期、盛果期固氮菌数量分别提高0．91、4．19、6．98倍,盛果期比常规化肥处理组提高65％。应用黄绿木霉T1010制剂后,樱桃番茄花期、果期提前,果实整齐均匀,立枯病感病指数降低36．36％,侧根数比常规化肥处理组增加1．44倍,产量明显提高。     

黄绿木霉T1010定殖动态及其对日光温室耕层土壤结构性状的影响

本研究采用黄绿木霉T1010(Trichoderma aureoviride1010)制剂处理日光温室番茄连作土壤,探索其在耕层土壤中的定殖动态,进而研究其对日光温室耕层土壤容重和水稳性团聚体等重要结构性状的影响,为应用黄绿木霉T1010改善土壤生态环境,促进番茄生长发育提供理论依据和技术支持.试验于2007年8月至12月安排在山东省寿光市多年连作种植番茄的日光温室中进行,以常规生产区为对照,设黄绿木霉T1010和1/2黄绿木霉T1010两个处理,对照和处理各重复4次.结果显示:随着检测时期的推移,黄绿木霉T1010处理的日光温室耕层土壤黄绿木霉T1010定殖指标存在明显的上升趋势,2007年9月1日、10月1日、11月15日和12月27日四个检测时期分别比对照提高106.6%、232.71%、279.4%、300.8%;水稳性团聚体(＞0.25 mm)数量指标也存在明显上升趋势,四个检测时期分别比对照提高36.5%、44.8%、51.4%、63.7%;容重检测指标则存在下降趋势,四个检测时期分别比对照降低2.5%、7.7%、8.3%、11.5%.进一步进行相关分析,土壤水穗性团聚体数量与黄绿木霉T1010定殖指标之间存在显著正相关,相关系数为0.95905,土壤容重与黄绿木霉T1010定殖指标之间存在显著负相关,相关系数为-0.96160.可见,黄绿木霉T1010可在日光温室耕层土壤中长期存活,有效降低土壤容重,增加土壤水稳性团聚体,改善土壤生态环境,有效促进番茄根系的发育,进而促进番茄产量的形成.     

黄绿木霉T1010对不同土壤层微生物群落的影响

通过在土壤中施用土壤生态改良剂黄绿木霉T1010,在樱桃番茄生长过程中定期定点取土样测定微生物数量,结果表明,黄绿木霉T1010能促进土壤中其他有益微生物的生长。在20～30cm土壤层,樱桃番茄生长盛果期,黄绿木霉T1010制剂处理组土壤细菌、放线菌、固氮菌群落数量分别比初始值提高2.00,1.61,7.14倍,比对照处理组提高0.80,0.88,1.63倍。黄绿木霉T1010是真菌,施入土壤后其他真菌不再增加。樱桃番茄后期,20～30cm土壤层真菌数量比初始值下降4.78%,比对照下降66.85%。应用黄绿木霉T1010制剂后,樱桃番茄花期、果期提前,果实整齐均匀,感病指数降低36.36%,侧根数比常规化肥处理组增加144%,产量明显提高。     

黄绿木霉T1010适宜的发酵条件分析

木霉广泛存在于土壤、根际及其它基质中,木霉对植物土传病具有拮抗作用.优化生防因子黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)突变体T1010发酵条件是扩大生产、大面积应用的前提.试验通过测定黄绿木霉T1010的菌丝生长和分生孢子生长,优化了培养条件,确定最适宜种子培养用PD培养基,摇瓶培养,生长时间为3天,此时菌丝生长量为5.75 g/ml;最经济适宜扩大培养基为玉米15 g/L,豆粉5 g/L,摇瓶培养时间为3天,此时菌丝生长量为5.83 g/ml,发酵罐培养时间2.5天为宜;最适宜经济的固体发酵培养基为麦麸:醋渣∶水=2∶1∶3.3,尿素为0.3%,发酵温度为(26±2)℃,发酵产物孢子量为2.46×1010cfu/g.通过该研究确定的发酵工艺参数为高效率、低成本、标准化生产黄绿木霉制剂提供了科学依据.     

木霉菌对杨树生长量及土壤水解氮含量的影响

为了促进木霉免疫诱导剂类生物肥料及土壤改良剂在木本植物生长中的应用,采用盆栽试验方法,以T1(5×102 cfu·cm-3)、T2(5×103 cfu·cm-3)和T3(5×104 cfu·cm-3)3个水平的木霉分生孢子诱导杨树苗60d,研究根施棘孢木霉ACCC30536分生孢子悬液后山新杨的生长量及土壤中水解氮含量变化规律。结果表明:T2水平诱导的效果最佳,杨树苗在15d内的株高和茎基生长量的最大值分别为7.01cm和0.15cm,是对照CON4(不施木霉)的5.12和2.14倍;单株杨树苗根的平均干重为7.38g,较CON4增加50.92%;单株杨树苗茎的平均干重为4.24g,较CON4、T1和T3分别增加了16.48%、49.82%和7.34%。同时,以T2水平木霉诱导杨树苗30d,种植杨树苗的盆土中水解氮含量较CON(不施用木霉且不栽培杨树苗的盆土)、CON2(施用T2水平的木霉但不栽培杨树苗的盆土)及CON4分别提高16.81%、9.5%和20.26%。说明棘孢木霉具有极显著促进杨树苗生长和改善土壤中水解氮含量的作用,最佳诱导量为5×103 cfu·cm-3。     

哈茨木霉NBL-Z1定殖动态及对草莓根腐病防治效果

本研究测定哈茨木霉NBL-Z1菌株无菌发酵滤液对5种病原菌的拮抗活性,并检测该菌的定殖能力及对草莓根腐病的防治效果,以期筛选出对病原真菌具有良好拮抗效果、安全、高效的生防菌.结果表明,哈茨木霉NBL-Z1菌株无菌发酵滤液对5种供试病原真菌有较强的拮抗作用,处理96、144 h,NBL-Z1菌株对尖孢镰刀菌菌丝生长的抑菌率均为100.00％;接种后28 d,菌株NBL-Z在草莓根表定殖数量达到最大,为8.10×107 CFU/g;NBL-Z1菌株对盆栽草莓根腐病的防效为65.6％,同时可促进盆栽草莓植株生长,提高果实产量.研究表明,NBL-Z1菌株能有效防治草莓根腐病并促进草莓植株生长,具有较高的潜在应用价值.     

内生真菌对连作花生土壤尖孢镰刀菌的拮抗作用

在实验室条件下研究3种内生真菌对连作花生土壤尖孢镰刀菌的拮抗作用。结果表明:拟茎点霉NJ4.1菌株、拟茎点霉B3菌株和角担子菌B6菌株对花生根腐病病原菌尖孢镰刀菌均有拮抗作用,其中拟茎点霉NJ4.1菌株对尖孢镰刀菌抑制作用明显,抑菌率为38.93%,与尖孢镰刀菌生态位重叠指数为1/3;拟茎点霉NJ4.1菌株生长过程中产生的挥发物对尖孢镰刀菌抑菌率为18.15%,拟茎点霉NJ4.1菌株发酵液对尖孢镰刀菌也有一定的抑制作用,但明显小于挥发物对尖孢镰刀菌的影响。     

三七根际耐皂苷木霉菌的分离鉴定及其拮抗促生活性评价

为筛选出三七根际具有拮抗促生活性的耐皂苷木霉菌,通过收集一年生健康三七根际土壤进行木霉菌株的分离,并测定三七根系分泌物对木霉菌孢子萌发的影响以及皂苷对木霉菌菌丝生长的抑制效果,筛选获得耐皂苷的菌株,进一步对其分类鉴定后进行拮抗根腐病病原菌活性测定以及盆栽促生效果、根际定殖能力及其对连作障碍缓解效果的评价。结果表明:试验共分离到6株木霉菌株,其中2株对三七根系分泌物敏感性较低,经过形态学特征和ITS序列比对鉴定为绿色木霉(Trichoderma viride)T3和渐绿木霉(T. viridescens)T20。T3和T20菌株对三七主要根腐病病原菌恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)、茄腐镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(F. oxysporum)和雪腐镰刀菌(Monographella cucumerina)均具有较强的拮抗效果,对恶疫霉菌抑制率分别可达到61.76%和70.59%;T3和T20菌株能促进三七植株的生长,将其接种于三七连作土中,在接种20 d后能够在根际较好的定殖,增加三七植株的存苗率,降低根腐病发病率。该研究结果为缓解三七连作障碍提供了重要的生防菌资源。     

微生物土壤调理剂对辣椒生长及产量的影响

通过室内盆栽试验,研究土壤调理剂中添加不同比例微生物菌剂(棘孢木霉和芽孢杆菌)对辣椒(Capsicum annuum L.)生长及产量的影响。结果表明,与单施复合肥处理相比,施用土壤调理剂处理的辣椒株高、茎粗、叶片SPAD、辣椒产量及生物量明显提高;增施菌剂(棘孢木霉和芽孢杆菌)处理能进一步提高辣椒株高、叶片SPAD、坐果率和产量,且处理活菌数为每克2亿~3亿时,辣椒的产量明显提高,说明微生物土壤调理剂对促进辣椒生长及提高产量效果明显,具有推广应用价值。     

可可毛色二孢拮抗菌的鉴定及发酵条件优化

【目的】筛选对可可毛色二孢菌（Lasiodiplodia theobromae）具有拮抗作用的生防菌株,为由可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病的生物防治提供菌种资源及指导。【方法】以海南发病槟榔园健康槟榔根组织及根际土壤为试验材料,采用组织匀浆法和平板稀释梯度培养法分别分离槟榔根内生细菌及根际土壤中的细菌,应用平板对峙法筛选出对可可毛色二孢菌具有拮抗作用的菌株;通过平板对峙法测定拮抗菌株菌液对3种槟榔根部病害病原真菌尖孢镰刀菌 （Fusarium oxysporum）、奇异根串珠霉菌 （Thielaviopsis paradoxa）和可可毛色二孢菌的抑制作用;通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析对拮抗菌株进行鉴定;采用盆栽试验初步验证拮抗菌株对由可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病的防治效果;采用单因素变化试验等筛选拮抗菌株的最佳发酵条件。【结果】经平板对峙法筛选出5株拮抗作用较强的菌株,其中菌株wrj-2-5的抑菌率最高,为74.07%;菌株wrj-2-5菌液对可可毛色二孢菌、尖刀镰刀菌和奇异根串珠霉菌菌丝生长均有较强的抑制作用,抑制率均在70.00%以上。综合菌株形态学观察、生理生化测定和16S rDNA分析结果,将菌株wrj-2-5鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。室内盆栽试验结果表明,菌株wrj-2-5对可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病具有较好的防病作用,对照组发病率为60.00%,试验组长势正常未发病。拮抗菌wrj-2-5最佳培养基配方为酵母浸粉1.5 g、葡萄糖1.5 g、 MgSO₄·7H₂O 0.2 g、水100 mL;最佳发酵条件为转速240 r/min、培养温度28 ℃、培养时间36 h、初始培养基pH 6、初始接种量8%。【结论】菌株wrj-2-5为铜绿假单胞菌,其对可可毛色二孢菌、尖孢镰刀菌和奇异根串珠霉菌均有较好的抑制作用,对由可可毛色二孢菌引起的槟榔根腐病有较好的防治效果,可作为研制槟榔根腐病生防菌剂的候选菌株资源。     

草莓根腐病拮抗真菌筛选鉴定及其防病促生作用

【目的】探索利用植物病、健株根域土壤微生物区系比较法快速筛选高效、广谱且有实际防病促生作用生防真菌的可行性。【方法】根据菌落培养与扫描电镜形态特征及rDNA-ITS序列对拮抗真菌进行鉴定;生长速率法测定菌株无菌发酵滤液的拮抗活性,盖玻片对峙培养法观察拮抗真菌对草莓根腐病原菌菌丝形态的影响;室内发芽试验法测定真菌无菌发酵滤液促种子萌发活性;采用盆栽试验研究拮抗真菌对草莓根腐病的防病促生作用;土壤稀释平皿分离法测定拮抗真菌的定殖能力及对草莓根域微生物区系的影响。【结果】经鉴定,2株拮抗真菌HF3和HF7分别为灰黄青霉（Penicillium griseofulvum）和土曲霉（Aspergillus terreus）,其无菌发酵滤液对7种供试病原真菌有较强的拮抗作用,培养96 h时,HF3对立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）和大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）菌丝生长抑菌率均为100.0%。HF3菌丝对大双孢柱孢（Cylindrocarpon macrodidyma CF9）菌丝具有溶解作用,使病菌菌丝出现扭曲、变细、断裂及原生质浓缩等畸变现象;HF3和HF7 103和104倍稀释无菌发酵滤液可促进甜瓜种子萌发及胚根、胚芽生长。HF7 104倍稀释液对西瓜种子萌发及胚芽、胚根生长具有促进作用;HF3和HF7对盆栽草莓根腐病的防效分别达53.0%和46.9%,同时可促进盆栽草莓植株生长,提高果实产量;菌株HF3和HF7在草莓根表定殖数量分别为2.23×105、1.02×105 CFU•g-1干土,同时减少了大双孢柱孢数量;接种HF3和HF7可有效调整草莓根域微生物区系,促进土壤微生态恢复平衡。【结论】通过植物病、健株根区土壤微生物区系比较可以快速筛选到高效广谱且有实际防病促生作用的生防真菌;HF3和HF7对草莓根腐病防治具有较高的潜在应用价值。     

多功能根际生防促生放线菌的分离鉴定及其对辣椒的益生效果

从健康辣椒根际土壤筛选具防病促生功能的菌种并应用于生物障碍土壤,可为辣椒提质增产和根腐病的防治提供优质的菌剂资源。本研究以辣椒根腐病的病原菌——腐皮镰孢菌（Fusarium solani）为靶标菌,采用平板对峙法筛选优良生防菌株,对其固氮、溶磷、解钾、分泌3-吲哚乙酸（3-indole acetic acid,IAA）、产铁载体、产纤维素酶和蛋白酶、利用酚酸类连作障碍物质等能力进行定性和定量测定。采用形态学、生理生化及16S rRNA基因序列对分离菌株进行鉴定,并采用田间原位栽培试验检测其生防和促生效果。结果表明,从设施连作抗病辣椒根际土中获得6株具有抑菌作用的放线菌,通过定性、定量测试发现菌株G-1拮抗效果最强,其对设施蔬菜5种常见病原菌均具有较好的抑制效果,抗菌谱广,且具有分泌IAA、产铁载体、产纤维素酶和蛋白酶、溶解有机磷、利用酚酸类化感物质等特性。结合形态学、生理生化及16S rRNA进化树分析结果,将其鉴定为弗氏链霉菌（Streptomyces fradiae）。田间原位栽培试验显示,G-1菌剂对辣椒根腐病具有较好的防病作用,可显著降低根腐病的病情指数,促进辣椒根系生长,且可使辣椒增产31.04%。研究表明,弗氏链霉菌G-1具有优良的防病促生功能,其固体菌剂的田间应用对辣椒根腐病具有较好的防治效果,且对辣椒具有明显的促生增产作用,可作为辣椒益生菌剂的候选菌株资源。     

木霉生防菌对大豆幼苗的促生作用及对根腐病的防治效果

[目的]研究木霉菌对大豆幼苗的促生作用及对根腐病的防治效果。[方法]用6株木霉菌剂处理土壤进行盆栽试验,测定大豆植株的形态指标及根腐病的发生情况。[结果]供试木霉菌株均能促进大豆植株生长,其株高、茎粗、根长、干物质积累均比对照增加。木霉菌株制剂均可减轻根腐病的发生,当浓度为5×108个/g时,防效均在70%以上。不同菌株对大豆植株的促生和对根腐病的防治效果不同。[结论]木霉菌能促进大豆的生长和降低根腐病的发生。     

三七种植土壤微生物类群动态与根腐病的关系

通过对三七免耕种植定位研究,找出了三七根腐病高发期与土壤微生物类群变化特征的差异,鉴定出了主要病原微生物类群。结果表明：三七根腐病的发生,除已报道的细菌中的假单胞细菌有关外,还与霉菌、放线菌及厌氧生长菌有密切关联,这3类菌群在不同季节存活量的高峰期与三七病害高发期相吻合,并且根腐病株土壤中的霉菌、放线菌及厌氧菌数高于健康植株土壤,分别增加3．89E4．cfu／g,0.94E4,cfu／g,85.10E6.cfu／g,说明这3种细菌也是导致三七根腐病的主要病原菌。