3株茶蔗生柱锈重寄生木霉菌的形态鉴定及ITS序列分析

[目的]探讨更为客观的木霉菌鉴定手段.[方法]在形态分类的基础上结合分子鉴定手段(rDNA-ITS序列分析),对3株茶藨生柱锈重寄生木霉菌进行分类鉴定.[结果]依据TR1的培养性状和显微特征描述,初步鉴定该菌株为深绿木霉(T.atroviride);TR2、TR3的培养性状和显微特征在一定程度上相似,依据其形态特征,初步鉴定这2个菌株为绿色木霉(T.viride Pers.ex Fr.).从Genbank中深绿木霉和绿色木霉的6个菌株与TR1、TR2、TR3所作的系统发育树可知,TR1应该归为深绿木霉,TR2和TR3属同种真菌,应该归为绿色木霉,这与形态学观察结果一致.[结论]形态特征结合ITS序列分析可作为木霉菌分类鉴定的依据.     

木霉菌Tr10的鉴定及其对几种病原菌的抑制作用

[目的]鉴定木霉菌Tr10,并研究其对几种病原菌的抑制作用。[方法]在形态分类的基础上,结合分子鉴定手段（rDNA-ITS序列分析）,对木霉菌Tr10进行分类鉴定,并研究其对作物病原菌的拮抗作用。[结果]依据Tr10的培养性状和显微特征描述,初步鉴定该菌株为棘孢木霉。结合ITS序列分析可知,Tr10应该归为棘孢木霉。木霉菌Tr10对供试病原菌均有强烈的抑制作用。[结论]为今后在生产上应用木霉菌Tr10奠定基础。     

11种木霉菌对葡萄灰霉病菌的拮抗作用

对采自宁夏14个市县的170份土样及其它材料进行分离,得到96株木霉菌株,采用形态分类方法鉴定出9种木霉菌以及2种未知名菌种,它们分别为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、绿色木霉(T.viride)、长枝木霉(T.longibrachiatum)、康氏木霉(T.koningii)、拟康氏木霉(T.pseudokoningii)、顶孢木霉(T.fertile)、黄绿木霉(T.aureoviride)、深绿木霉(T.atroviride)、钩状木霉(T.hamatum)以及T.sp1和T.sp2。竞争及对峙培养结果表明:11种木霉菌种对葡萄灰霉病菌(BotrytiscinereaPers.)均有不同程度的拮抗作用,尤其前四种木霉菌表现出了很强的竞争优势,在对峙培养中对葡萄灰霉菌的拮抗系数为Ⅰ￣Ⅱ,抑菌率达61.8%￣77.6%。在光学显微镜下可观察到木霉菌或缠绕或穿入葡萄灰霉菌菌丝生长,并发生菌丝断裂、消解以及细胞原生质浓缩等现象。     

木霉菌对灰葡萄孢菌的拮抗作用

对采自宁夏14个市县的170份土样及其它材料进行分离,得到96个木霉菌株,采用形态分类方法鉴定出9种木霉菌以及2种未知名菌种．它们分别为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、绿色木霉（T．viride）、长枝木霉（T．longibrachiatum）、康氏木霉（T．koningii）、拟康氏木霉（T．pseudokoningii）、项孢木霉（T．fertile）、黄绿木霉（T．aureoviride）、深绿木霉（T．atroviride）、钩状木霉（T．hamatum）以及T．sp1和T．sp2。拮抗作用和抑菌活性测定结果表明：11种木霉菌对葡萄、番茄和黄瓜灰霉病的致病菌——灰葡萄孢菌（Botrytis cinema Petssp．）均有不同程度的拮抗作用,其中哈茨木霉、绿色木霉、黄绿木霉、钩状木霉和T．sp1对病原菌的拮抗作用及抑菌活性显著,其生长速度比病原菌平均快1．1～3．0倍：在对峙培养中拮抗系数达Ⅰ级或Ⅱ级．其抑菌率高迭98．78％。     

以G418抗性为筛选标记的深绿木霉遗传转化研究

【目的】探索建立以G418抗性为筛选标记的农杆菌介导的深绿木霉遗传转化方法,为木霉菌突变菌株的筛选和基因功能研究奠定基础。【方法】测试供试野生型深绿木霉菌菌株T23对G418的敏感性,构建以G418抗性为筛选标记的质粒载体p1300-neo,并将该质粒通过农杆菌导入深绿木霉T23菌株中,利用G418抗性平板筛选获得转化子,通过PCR对稳定转化子进行鉴定。【结果】T23菌株对G418具有高度敏感性,25μg/mL G418可完全抑制T23菌株的生长;构建的p1300-neo载体是可行的G418抗性标记,通过该载体获得了多株具有G418抗性的深绿木霉遗传转化子。【结论】G418抗性可以作为深绿木霉菌有效的遗传筛选标记,其在PDA培养基中的使用量为25μg/mL。     

高效拮抗链孢霉和绿色木霉海洋细菌的筛选及鉴定

[目的]筛选用于防治食用菌污染菌链孢霉(Neurosporacrasa sp.)和绿色木霉(Trichoderma viride)的拮抗菌株,为食用菌病害的生物防治提供优良生防资源.[方法]以分离自江苏连云港海域的92株海洋细菌菌株为研究对象,采用平板对峙法和打孔法测定供试菌株及其发酵液对链孢霉和绿色木霉的抑菌作用,测定抑菌作用较强菌株与杏鲍菇(Pleurotus eryngii)菌丝生长的相容性,筛选抑菌作用强且与杏鲍菇菌丝相容性好的优良拮抗菌株;通过形态特征观察、生理生化试验和16S rDNA、gyrB序列分析对优良拮抗菌株进行种类鉴定.[结果]从92株供试海洋细菌菌株中筛选出一株高效拮抗污染菌的BMY-2菌株,其对链孢霉的抑菌圈直径达25.33 mm,对绿色木霉的抑菌带宽度达30.00 mm,且与杏鲍菇的相容性好;分类鉴定结果表明,BMY-2菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).[结论]解淀粉芽孢杆菌BMY-2菌株对食用菌污染菌链孢霉和绿色木霉均具有较强的抑制作用,且与杏鲍菇生物相容性好,在食用菌生物防治上具有良好的潜在应用前景.     

香菇工厂化栽培中常见霉菌的分离鉴定及抑菌剂筛选

为了明确香菇工厂化栽培中污染霉菌的优势种,对分离的49株常见霉菌进行鉴定,并针对优势种进行抑菌剂试验,筛选出绿色高效的抑菌剂。显微形态鉴定和ITS序列分析的鉴定结果表明:香菇工厂化栽培培养料中的霉菌优势种有:哈茨木霉、侧耳木霉、深绿木霉、短密青霉和总状毛霉,其分离频率分别为57%、25%、4%、6%和8%。H_2O_2、中生菌素和克霉灵对除短密青霉外的4种霉菌的菌丝抑制效果由强到弱依次为:H_2O_2、中生菌素和克霉灵,对5种霉菌的孢子萌发抑制作用由强到弱依次为:H_2O_2、中生菌素和克霉灵;这些抑菌剂中,H_2O_2的安全性最高,中生菌素次之。为制定香菇工厂化污染霉菌优势种的控制方案提供参考。     

新疆番茄生长及其果实加工过程中霉菌污染的监测

[目的]确定新疆番茄果实生长及其加工过程中的霉菌组成,了解不同加工番茄产地所分离霉菌的差异与分布特征以及是否有产毒霉菌污染.[方法]对番茄生长与加工过程中不同环节进行样品采集与霉菌分离,并根据菌落形态特征、显微特征、生理生化和ITS序列分析等方法对分离获得的霉菌进行鉴定.[结果]共分离鉴定45株霉菌,曲霉为优势菌17株,其次为青霉9株,镰孢菌6株,赤霉菌4株,木霉2株,其它类型霉菌7株.[结论]番茄生长土壤与番茄果实中均分离鉴定出产毒真菌黄曲霉菌和木贼镰孢霉,从番茄叶片中分离到产毒真菌尖孢镰孢菌.     

5种木霉对番茄灰霉病拮抗作用的测定

2011年6月-8月在商丘菜区根际土壤中共分离到18个木霉菌株,根据培养性状和形态学特征鉴定出5种木霉,分别是哈茨木霉(T.harzianum Rifai)、绿色木霉(T.viride PerexFx)、康宁木霉(T.koningii Oudem)、拟康氏木霉(T.pseudokoningii Rifai)、长枝木霉(T.longibrachiatum Rifai).将上述木霉和番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)做对峙培养的试验,测定5种木霉种对番茄灰霉病都有不同程度的抑制作用.结果表明:5种木霉菌对病原菌抑菌强度不同,其中绿色木霉和哈茨木霉对番茄灰霉病菌都具有较好的拮抗作用.     

植物内生木霉的鉴定及其抑菌活性

对分离自健康植物的6种内生木霉菌进行活化,再观察菌落形态、颜色,测量生长速度,观察孢子形态,测量孢子直径范围,进而对供试菌株进行分类鉴定。结果初步鉴定,DBs0-13为多孢木霉(Trichoderma polysporum),DBs57为里氏木霉(T.reesei),DBs66为长孢木霉(T.longipile),40为绿色木霉(T.viride),171为康氏木霉(T.koningii),292为哈茨木霉(T.harizianum)。采用生长速率法测定供试真菌发酵液(相当于稀释10倍)对4种病原真菌的抑制效果。结果表明,6木霉菌对小麦赤霉菌、苹果轮纹菌、油菜菌核菌和可可球二孢菌都有不同程度的抑制作用,其中DBs0-13和171的抑菌率相对较高,并对4种病原真菌都具有抑制作用;6种木霉菌中抑菌率最高的是DBs0-13,其对油菜菌核病菌、可可球二孢的抑制率分别为62.89%、41.12%。     

从3种基质分离的木霉种类鉴定

从福建省的食用菌、植物线虫虫体和植物根际土壤中共分离到125个木霉(Trichoderma)菌株,根据形态学特征和培养性状,鉴定出5种木霉,分别是哈茨木霉(T.harzianum)、绿色木霉(T.viride)、康氏木霉(T.koningii)、拟康氏木霉(T.pseudokoningii)和长枝木霉(T.longibrachiatum).植物根际土壤中的优势种为哈茨木霉和绿色木霉;食用菌上的优势种为康氏木霉和拟康氏木霉;植物线虫虫体上的优势种为绿色木霉.     

产纤维素酶菌株的分离·筛选及酶活性测定

[目的]寻找更多高效降解纤维素的新菌种及其科学利用方法。[方法]利用“采样－培养－分离单菌落－初筛－复筛－测OD值”的方法筛选出分解纤维素能力较强的菌株。[结果]经反复培养和划线分离从80份样品中初选出35株具有分解纤维素能力的菌株。其中10株由白转绿,长势较好;6株深绿色,长势一般;4株绿色,长势较好。这20株都产孢子,被初步鉴定为绿色木霉。用刚果红培养基进行复筛选,得到9株透明圈较大的菌株。将这9株菌株再进行发酵培养,用DNS法进行酶活测定得到2株酶活较强的菌株。这2株菌株被鉴定为棘孢木霉。通过滤纸崩解测试筛选出20株降解纤维素能力较强的菌种。DNS法酶活测定结果表明采自甘蔗堆积处和甘蔗地的2个菌株的产酶活性最高。[结论]采自甘蔗堆积处和甘蔗地的2个菌株可以作为降解纤维素的新菌种。     

绿色木霉产纤维素酶的条件研究

[目的]优化绿色木霉产纤维素酶的条件,为其实际应用提供依据。[方法]采用液体发酵方法对绿色木霉产纤维素酶的条件进行研究,分别考察发酵时间、氮源、接种量和pH值对纤维素酶活力的影响。[结果]绿色木霉产不同酶组分的分泌高峰并不一致,FPA酶活在发酵2d后达到最高值,Cx酶活在发酵3d后达到最高值。发酵培养基以蛋白胨为唯一氮源时,纤维素酶活力最高。发酵培养的最佳接种量为5%,最适初始pH值为4.5。[结论]不同培养条件对绿色木霉产纤维素酶的活力影响各异。     

韩国平菇菇床上流行的木霉分离物的形态学和分子生物学分析

自韩国平菇生产地分离到26株木霉(Trichoderma),基于培养特性和菌落形态,这些菌株分为4组,鉴定为Trichoderma sp．K1、Trichoderma sp．K2、T．harizianum,和T．atroviride,其中优势种为Trichoderma sp．K2,其次是Trichoderma sp．K1和T．atroviride。K1和K2不仅在形态上与其它的组有区别,而且相互在生长温度(35℃),菌落形态,分生孢子的形态,分生孢子小梗及其分枝类型,分生孢子的形态等方面有显著差异。对这些菌的ITS、EF-1(和RPB2的序列比较显示出这2个待鉴定的种(K1和K2)不仅与早期报道的木霉种有差异,而且相互间也显著不同。同时发现,EF-1(和RPB2序列比ITS序列在木霉的系统分类上更加客观可靠。基于以上研究结果,我们认为K1和K2是木霉属中的新种,即将给予它们新的名称。     

Trichoderma species from China

Seventeen species of Trichoderma, isolated from soil or tree bark from Ch ina are identified based on morphological and physiological characters, and from their phylogenetic position inferred from parsimony analyses of nucleotide sequ ences of the internal transcribed spacer regions of the rDNA cluster (ITS1 and 2) and partial sequences of translation elongation factor 1-alpha (te f1) . There were T.citrinoviride, T.longibrachiatum, T.sinensis in section Long ibrachiatum, T.…     

Population dynamics of Trichoderma species in the rhizosphere of tobacco and four species form China

To study the effect of tobacco growth on Trichoderma population, we in vestigated the occurrence of Trichoderma species in the rhizosphere of tob acco plant during the period from transplanting (June) to harvesting (October) and measured relative environmental factors. Eleven species of Trichoderma we re isolated, among which T.harzianum, T.viride, T.hamatum, T.atroviride, T.lo ngibrachiatum, T.virens, T.koningii were identified, other four species Ty1, Ty2, Ty3, Ty4 are new s…     

华山松疱锈病的重寄生真菌(深绿木霉)中几丁质酶基因cDNA片段的克隆

[目的]分离深绿木霉S5003中的几丁质酶基因,为获得高抗病的转基因植株奠定基础。[方法]采用华山松疱锈病的锈孢子壁作为诱导物,诱导深绿木霉SS003中几丁质酶基因的表达,并通过lit—PER方法扩增得到几丁质酶基因片段。[结果]锈孢子壁可诱导出高活性（40．17μg／10min）的几丁质酶,PCR扩增得到了长度为834bp的特异片段,经序列测定及分析显示该片段为几丁质酶基因片段。[结论]深绿木霉SS003的几丁质酶基因片段的获得,为分离全长基因以及进一步利用该基因生产几丁质酶以及进行基因转化提供了可能。     

绿色木霉固态发酵产纤维素酶条件研究

[目的]为了优化绿色木霉固态发酵产纤维素酶的条件。[方法]采用固态发酵方法对绿色木霉产纤维素酶的条件进行了研究,分别考察培养时间、培养温度、接种量、含水量和麸皮含量对纤维素酶活力的影响。[结果]不同因素对固态发酵条件下纤维素酶活的影响有明显的变化趋势。通过正交试验,得出绿色木霉固态产酶发酵的最优条件是培养温度30℃,培养时间5 d,接种量5%,含水量250%。[结论]该研究为绿色木霉对秸秆的转化应用提供了理论依据。