ND-EDS-76异源二联油苗的研制

将鸭源鸡新城疫 (ND)病毒 D1 0 株和鸡减蛋综合症 (EDS- 76 )病毒 GC2 株同时接种于同一鸭胚内复制 ,增殖 96 h收取尿囊液 ,用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ND- EDS- 76异源二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗生产工艺简单 ,成本低 ,经试用表明可有效地预防 ND和 EDS- 76的发生。     

双夹心ELISA检测鸡EDS-76病毒抗原的研究

应用鸡抗EDS-76病毒、兔抗EDS-76病毒抗体和羊抗兔抗体,建立了检测EDS-76的双夹心ELISA方法,本试验确定的鸡抗EDS-76病毒抗体、兔抗EDS-76病毒抗体和HRP-羊抗兔抗体的最佳工作浓度分别为1∶160、1∶300和1∶1000。本法对纯化EDS-76病毒的最低检出量约为5 ng/孔。通过对EDS-76病毒试验感染鸡脏器带毒、排毒情况和临床样本的检测,表明双夹心ELISA方法对EDS-76病毒的检测特异性强、敏感度高、适合于成批样本的检测。     

新型聚维酮碘对牛传染性鼻气管炎病毒灭活效果试验

甲醛是广泛应用的病毒灭活剂,但其缺点也很明显,如刺激性强、破坏免疫原性、灭活不彻底等,因此需要寻找一种可以替代传统灭活剂甲醛的新型灭活剂。通过细胞盲传三代、无菌检验和台盼蓝染色等方法,结合不同灭活浓度与灭活时间双因素来筛选聚维酮碘与甲醛灭活牛传染性鼻气管炎病毒的最优条件,同时,向MDBK细胞中接种不同浓度的聚维酮碘和甲醛观察是否对MDBK细胞具有毒性和刺激性。结果表明10%的聚维酮碘24 h时可彻底灭活传染性鼻气管炎病毒,0.3%的甲醛48 h时可彻底灭活牛传染性鼻气管炎病毒,0.5%的甲醛对细胞具有强烈刺激导致绝大多数细胞死亡,而浓度为15%的聚维酮碘对MDBK细胞仍无刺激,直到浓度高达20%时才对细胞有了较大刺激,说明聚维酮碘无刺激性和毒性、安全性更高。为病毒灭活疫苗的理想灭活剂提供了新的方向,并为新型灭活剂的研发奠定基础。     

PCR方法检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征(Egg drop syndrome 1976 EDS-76)病毒DNA序列,设计合成了1对能扩增300 bp DNA片段的引物,建立了EDS-76病毒的聚合酶链式反应(PCR)诊断方法。该方法对EDS-76病毒标准株AV-127扩增结果为阳性;对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的扩增结果均为阴性。结果表明该方法特异且敏感,检测的最低病毒DNA含量达到2.5×10-2pg,PCR检测表明,从试验感染鸡的心脏中不能检测出病毒,肝脏和肾脏只有在感染后7~15 d检出,在试验感染后4~21 d的子宫、血液和4~17 d的脾中均能检测到病毒。     

鸭源H9亚型禽流感病毒NJ01株的灭活动力学研究

以甲醛为灭活剂,研究在不同温度条件(37.4、25℃)下,不同甲醛浓度(0.1%、0.2%、0.3%、0.4%)对含鸭源H9亚型禽流感病毒NJ01株的尿囊液完全灭活所需时间的变化,为规模化生产疫苗提供可靠的灭活动力学试验依据。     

鸡产蛋下降综合症(EDS—76)灭活油乳剂苗的研究 Ⅰ.灭活油乳剂苗的制备

在本试验中,司本-80和硬脂酸铝加入油相,吐温-80加入灭活的EDS-76尿囊毒为水相制备成油乳剂苗。福尔马林灭活病毒制备的疫苗其免疫效果高于热灭活病毒制备的疫苗,免疫后三周,前者的HI抗体水平达9.5log_2,而后者仅为4.0log_2.福尔马林灭活病毒制备的疫苗于腹腔、皮下注射小白鼠、豚鼠、兔子和10倍剂量接种产蛋鸡,结果均无不良反应;该疫苗为完全油包水剂型、不导电,滴于冷水表面不扩散,亲水亲油平衡值(HLB)为6.67;镜下所见疫苗颗粒为0.5μ直径大小。4℃存放6个月稳定,有效期至少6个月。     

禽传染性支气管炎病毒分离株理化特性的研究

[目的]探讨禽传染性支气管炎病毒河南分离株IBV-HN05对各种理化因素的敏感性。[方法]IBV-HN05经过热、酸碱、胰蛋白酶、乙醚、氯仿、甲醛等理化因素处理后接种10日龄非免疫鸡胚,以EID50或鸡胚矮化为判断指标,确定各种理化因素对IBV-HN05的敏感性。[结果]IBV-HN05在56℃温度条件下45 min可被灭活,耐酸碱,pH值2.5和10.5的环境能存活3 h,对浓度1%胰蛋白酶有一定的耐受性,浓度20%乙醚作用24 h能部分被灭活,浓度5%氯仿和浓度1%甲醛作用30 min即可灭活该病毒。[结论]IBV的理化特性因毒株的不同而异。     

鸡产蛋下降综合症(EDS—76)灭活油乳剂苗的研究 Ⅲ.疫苗的免疫保护性试验

应用本课题研制的疫苗、国内某兽医研究单位试制的疫苗、Intervet公司和TAD公司生产的EDS-76灭活油乳剂菌。分别接种20周龄的EDS-76抗体阴性伊莎商品蛋鸡,在28周龄时用野毒静脉接种攻毒,结果四组免疫鸡均未见发病,而未免疫对照组鸡产蛋率急剧从91.7％下降到60.7％,同时伴有大量软壳蛋,整个发病持续四周。进一步免疫接种五个鸡场的十批商品蛋鸡共85916羽,HI抗体效价抽测结果均达9.01og_2以上,无一群鸡有副反应,产蛋率均在90％以上,有效地控制了该病(EDS-76)在这些场的流行。     

ND—EDS—76异源二联油苗的研制

将鸭源鸡新城疫（ND）病毒D10株和鸡减蛋综合症（EDS－76）病毒GC2株同时接种于同一鸭胚内复制，增殖96h收取尿囊液，用甲醛灭活后加白油佐剂制成ND－EDS－76异源二联油乳剂灭尖疫苗，该疫苗生产工艺简单，成本低，经试用表明可有效地预防ND产EDS－76的发生。     

二乙烯亚胺在猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株灭活疫苗中的应用

[目的]通过甲醛和二乙烯亚胺对猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株的灭活效果比较,获得一种适合猪流行性腹泻病毒疫苗灭活的生产工艺.[方法]将二乙烯亚胺接种小白鼠观察二乙烯亚胺的毒性.分别使用甲醛和二乙烯亚胺,在室温条件下灭活PEDV-WN株病毒液8、12、16、20和24 h,取灭活后的病毒液接种生长良好的单层Vero细胞,进行灭活效果的检验;同时,取灭活检验合格的病毒液进行无菌检验.灭活合格的病毒液乳化配苗,进行安全性和效力试验.[结果]接种二乙烯亚胺的小白鼠28 d均健活,状态良好;甲醛体积分数为0.3％,灭活16 h可使病毒液完全灭活;二乙烯亚胺浓度为0.010 mol/L,灭活12 h可使病毒液完全灭活;灭活合格的病毒液无菌;将不同方法灭活后的病毒液乳化配苗,接种3～5日龄的仔猪,安全性较好,未观察到不良反应,然后用PEDV-WN毒株攻毒,二乙烯亚胺灭活制备的疫苗比甲醛灭活制备的疫苗保护率高.[结论]在猪流行性腹泻病毒PEDV-WN株病毒液中加入浓度为0.010 mol/L的二乙烯亚胺,在室温灭活12 h,可使病毒完全灭活,且制备的疫苗安全性好,保护率高.     

灭活后无血凝价的禽流感H_5亚型病毒的免疫原性研究

0. 4 %甲醛灭活后血凝价为 0的 2株禽流感H5亚型病毒制备的油乳剂疫苗免疫 14 0日龄蛋鸡 ,疫苗免疫 10天后HI抗体水平分别升到 8. 0Log2、6 . 2Log2以上 ,免疫后 17～ 2 4天HI抗体水平升到高峰 (8. 8Log2、7. 8Log2 ) ,免疫 38天后能抵御剂量为 4ELD50 的同种强毒的攻击。结果表明 ,灭活后血凝价为 0的禽流感H5亚型病毒与灭活后血凝价为 5的病毒抗原的免疫原性无显著差异     

二乙烯亚胺对水貂肠炎细小病毒灭活效果的研究

为研究二乙烯亚胺(BEI)对水貂肠炎细小病毒的灭活效果,采用BEI终浓度为0.003mol/L、0.002mol/L、0.001mol/L、0.0005mol/L,灭活温度为30℃,灭活时间为24h、48h、72h条件下,对水貂肠炎细小病毒进行灭活试验。通过F81细胞传代观察细胞病变和血凝试验检测灭活效果;用水貂检验BEI灭活水貂肠炎细小病毒所制疫苗的安全性,通过检测接种水貂的血凝抑制抗体,评价BEI灭活细小病毒所制疫苗的免疫效果,同时与甲醛灭活的疫苗进行免疫效果比较。结果表明,BEI终浓度0.002mol/L、30℃24h是灭活水貂肠炎细小病毒的适宜参数,BEI灭活工艺制备的水貂肠炎细小病毒灭活疫苗具有良好的安全性,BEI灭活工艺与甲醛灭活工艺的免疫抗体水平差异不显著(P0.05)。本研究为水貂肠炎细小病毒灭活工艺的研究提供了理论依据。     

应用竞争性酶联免疫吸附试验检测鸡产蛋下降综合症抗体

用鸡产蛋下降综合症(Egg Drop Syndrome-76,EDS-76)灭活油佐剂苗,免疫30周龄产蛋鸡,获取高免血清。提取特异性免疫球蛋白后,用辣根过氧化酶标记,制备成酶标抗体,建立了竞争性酶联免疫吸附试验。该法与血凝抑制试验的平行测定的比较结果为,前者的阳性检出率为71.8%,而后者为59.0%,所以前者明显地优于后者。而且该试验敏感性高,特异性强,具有快速、准确的优点,适用于大规模的检测和检疫。     

鸡减蛋综合征油佐剂灭活苗的制备及安全性和免疫效力试验

将吐温-80加入灭活的EDS-76尿囊毒中作水相，司本-80和硬脂酸铝加入10号白油中为油相，两相混合后经胶体磨乳化制成油剂苗。检验结果表明，油剂苗的物理性状合格；无菌检验合格；安全性良好；免疫接种20周龄鸡，8周后攻毒，试验组鸡产蛋率未见明显变化（88%～90%），空白对照组鸡产蛋率下降42%。     

鸡减蛋综合征病毒的分离与鉴定

从产蛋率下降．出现软壳蛋、薄壳蛋等畸形蛋的鸡场采集病料，接种鸭胚后分离到1株病毒，经过电镜观察，脂溶剂敏感性试验、HA试验、HI试验、AGP试验，分离病毒被鉴定为EDS-76病毒。     

牛传染性鼻气管炎的分离鉴定和灭活条件的优化

从疑似牛传染性鼻气管炎病毒感染的牛鼻腔中分离出1株病毒,通过PCR方法和MDBK细胞病变观察对其进行鉴定,确定该分离株为牛传染性鼻气管炎毒株。通过对该毒株的增殖条件和甲醛灭活条件的优化研究,为制备牛传染性鼻气管炎细胞源灭活疫苗提供参考依据。结果表明该毒株接毒18h后病变细胞达70％开始收毒,病毒液在0．2％的甲醛37℃灭活36h灭活效果最好。     

减蛋综合症病毒（EDS76V）VSH—23株灭活试验研究

对EDS76病毒HSH－23株进行了灭活试验研究，采用最终浓度为0．1％福尔马林在不同时间及温度条件下灭活HSH－23株病毒液，将灭活病毒液接种鸭胚以检查其灭活效果。结果表明：在37℃条件下，经过10h可将病毒完全灭活；该毒株具有较强的热稳定性，在37℃下，放置35天其HA价保持不变，灭活检验中发现，必须将灭活病毒液进行连续2次鸭胚接种。方可作出病毒是否完全灭活的判定。     

动物血清病毒灭活研究进展

本文主要介绍了加热法、有机溶剂/表面活性剂(S/D法)、甲醛灭活法、亚甲蓝光化学(MB)法、β-丙内酯法等五种动物血清病毒灭活技术及目前国内外最新研究进展,旨在进一步寻找出一种更为安全,可靠、省时,效果又好,又可应用到具体生产过程中去的新型灭活方法,从而为动物血清中各种病毒的灭活开辟一务全新的途径.     

荧光假单胞菌灭活疫苗对草鱼的免疫保护效应

从患病草鱼分离出荧光假单胞菌,制备甲醛灭活全菌苗、高温灭活全菌苗、可溶性蛋白及外膜蛋白疫苗。经腹腔注射草鱼后,研究这些疫苗的免疫保护作用。免疫后于不同时间采集血液,用试管凝集法测定血清抗体滴度。实验结果表明,上述疫苗均诱导较强的免疫应答。抗体峰值出现的先后顺序依次为可溶性蛋白组、外膜蛋白组、甲醛灭活全菌苗组及高温灭活全菌苗组;而抗体峰值从高到低依次为甲醛灭活全菌苗组、高温灭活全菌苗组、可溶性蛋白组及外膜蛋白组。细菌攻毒实验显示,4种疫苗免疫后均产生明显的保护效应。其中,高温灭活全菌苗相对保护率最高,达到75%,甲醛灭活全菌苗、外膜蛋白以及可溶性蛋白的相对保护率分别为70%,70%和65%,说明这些疫苗均可用于预防草鱼赤皮病。此外,实验亦显示血清抗体水平与疫苗保护效应并不完全一致。     

荧光假单胞菌灭活疫苗对草鱼的免疫保护效应

从患病草鱼分离出荧光假单胞菌,制备甲醛灭活全菌苗、高温灭活全菌苗、可溶性蛋白及外膜蛋白疫苗.经腹腔注射草鱼后,研究这些疫苗的免疫保护作用.免疫后于不同时间采集血液,用试管凝集法测定血清抗体滴度.实验结果表明,上述疫苗均诱导较强的免疫应答.抗体峰值出现的先后顺序依次为可溶性蛋白组、外膜蛋白组、甲醛灭活全菌苗组及高温灭活全菌苗组;而抗体峰值从高到低依次为甲醛灭活全菌苗组、高温灭活全菌苗组、可溶性蛋白组及外膜蛋白组.细菌攻毒实验显示,4种疫苗免疫后均产生明显的保护效应.其中,高温灭活全菌苗相对保护率最高,达到75%,甲醛灭活全菌苗、外膜蛋白以及可溶性蛋白的相对保护率分别为70%,70%和65%,说明这些疫苗均可用于预防草鱼赤皮病.此外,实验亦显示血清抗体水平与疫苗保护效应并不完全一致.