血清1型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制

为研究血清1型鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer,RA)的灭活油乳剂疫苗,本研究将10株血清1型RA的临床分离株经腿部肌肉注射7日龄雏鸭进行动物体内复壮,结果表明所有被测菌株均具有较强的毒力,易感雏鸭致死率100％.对其中3株RA分离株CH3、WJ4和YL4的毒力测定结果表明其半数致死量(LD50)分别为2×108 cfu、3.25×108 cfu和2.37×106 cfu.选取5株RA分离株分别制备灭活油乳剂疫苗,分别于5日龄和18日龄对樱桃谷鸭进行两次免疫后,免疫鸭能够产生高水平的RA特异性抗体,对2 LD50 WJ4或CH3攻毒产生很好的保护效果,其中由CH3、CQ3和YXb12制备的灭活油乳剂疫苗对攻毒的保护率高达100％.     

血清2型鸭疫里默氏杆菌制苗用菌株的筛选及灭活油乳剂疫苗的研制

血清2型鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)分离株经雏鸭体内复壮、回收、鉴定后,选取其中2株细菌NJ3和Yb2进行毒力测定,结果表明其半数致死量分别为5.62×107CFU和1.07×105CFU。选取5株细菌制备灭活油乳剂疫苗后免疫鸭,并进行攻毒保护试验。结果表明不同菌株制备的疫苗均可使免疫鸭产生高水平的RA特异性ELISA抗体和攻毒保护力,但是攻毒保护性差异较大,NJ3免疫后的攻毒保护性最好。抗体检测及攻毒保护实验表明NJ-3是较理想的制苗用菌株。     

血清10型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制

鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染是主要危害2~8周龄雏鸭的高致病性细菌性传染病。为研制血清10型RA灭活油乳剂疫苗,选取10株血清10型RA分离株进行动物体复壮、分离和鉴定后,分别对部分毒株进行了毒力测定和灭活油乳剂疫苗的研制。结果表明,所有试验用分离株对7日龄雏鸭均具有较强的致病力。分离株YXL1和HXb2的半数致死量分别为2.8×108 cfu和82 cfu,不同菌株之间的毒力差异很大。用研制的灭活油乳剂疫苗对雏鸭进行2次免疫后,免疫鸭可获得高水平的特异性抗体,并可抵抗强毒RA的攻击,以HXb2免疫后的攻毒保护性最好。抗体水平检测和攻毒保护试验结果表明,用血清10型RA分离株HXb2制备的油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫保护作用。     

鸭疫里氏杆菌二价灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】根据鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)血清1型、2型贵州流行株制备二价灭活疫苗,为鸭疫里氏杆菌病的防控及疫苗研制提供研究资料。【方法】以血清1型RA(RA-G06株)、血清2型RA(RA-HS01株)地方流行株为菌种,通过涂板法测定菌株生长曲线,利用改良寇氏法计算菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀),将2株菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后等比例混合,以卡波姆为佐剂制备二价灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行雏鸭免疫试验;通过检测免疫鸭血清中特异性抗体水平和攻毒保护试验评价疫苗的保护率,对攻毒试验鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织进行组织病理学观察。【结果】RA-G06株和RA-HS01株均在培养12 h时到达峰值,活菌数分别为2.1×10¹¹和3.3×10¹¹ CFU/mL,LD₅₀分别为1.44×10¹⁰和2.63×10⁸ CFU/mL;制备的疫苗安全性良...     

一株大肠杆菌分离株和质控菌株25922对商品肉鸭的致病性试验

通过对商品肉鸭肌肉注射大肠杆菌分离株和质控菌株对攻毒菌株、攻毒剂量以及呈现相应症状的筛选,为下一步进行兽药临床药效评估试验建立攻毒模型提供依据。结果显示:血清型为肠产毒性大肠杆菌O78∶K80(B)的大肠杆菌分离株对肉鸭的半数致死量为5.98×10~6cfu/mL;大肠杆菌质控菌株25922对肉鸭的半数致死量为1.6×10~(10)cfu/mL。     

2种猪源链球菌对猪、兔的致病性试验

检测了4株猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)和2株马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equisubsp.zooepidem icus,SEZ)对猪、兔的致病性。SS2-1、SS2-H及SS2-006444株均分离自发病猪内脏,前2株毒力因子表现型为MRP+EF+SLY+,后者为MRP-EF-SLY-;SS2-D株为国外引进的SS2人源株,作为对照,其毒力因子的表现型为MRP+EF*SLY+;SEZ-CY和SEZ-CN株均分离自发病猪并经鉴定。SS2-1、SS2-H、SEZ-CY和SEZ-CN株对猪(2~3头/组)的最小致死量分别为106、107、104和108cfu;对兔(2~3只/组)的最小致死量分别为100~1 000、1 000、100和105cfu;SS2-D株108cfu对猪不致死,对兔的最小致死量为108cfu,而SS2-006444对猪、兔无致病性。显示SS2毒力因子与其对猪、兔的致病性有关;SS2与SEZ菌株对兔或猪的致病性一致,可用兔取代猪做试验;SS2和SEZ菌株通过腹腔、皮下、肌肉或静脉注射均可感染兔(2~4只/组),并致死,SEZ还可经口、鼻感染;SEZ与SS2静脉感染猪后10 m in即可检出细菌,此后2~4 h为无菌血症阶段,之后重新出现。     

血清15型鹅源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及交叉免疫保护研究

本研究对安徽省某鹅场急性死亡的雏鹅进行了细菌分离鉴定,无菌采集病死鹅肝脏、脑和心包液,经过培养特性观察、染色镜检、生化特性检测以及16S rRNA和血清学检测,鉴定病原菌为血清15型鸭疫里默氏杆菌,命名为LAG1株。该分离菌株对四环素类药物敏感,而对卡那霉素等耐药;对雏鸭的致病性强,半数致死量(LD50)测定为7.75×103CFU/只;交叉免疫保护试验结果显示LAG1灭活油乳剂疫苗对自身菌株攻毒的免疫保护率可达80%以上,对血清10型鸭疫里默氏杆菌HXb2攻毒的保护率可达70%,对血清1型鸭疫里默氏杆菌WJ4和血清2型鸭疫里默氏杆菌Yb2攻毒的保护率低于20%。本研究结果可为安徽省养鹅业鸭疫里默氏杆菌病的防治工作提供参考。     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其二价灭活疫苗的研制

从云南昆明、山东青岛死亡率高的鸭场的病死鸭中各分离到一株细菌,分别命名为YB080510株和YB080512株.细菌鉴定和血清定型结果表明:YB080510株、YB080512株分别为血清Ⅰ型和血清Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌,为国内目前主要流行型菌株,与其他鸭疫里默氏杆菌流行株的同源性为99.2％ ～ 100％;分离菌的致病性试验结果表明:两株鸭疫里默氏杆菌均为强致病菌,活菌量为1×109 CFU的YB080510株、2×108 CFU的YB080512株均可使1月龄健康樱桃谷鸭全部致死.以此YB080510株、YB080512株鸭疫里默氏杆菌制备二价灭活疫苗,每型菌含量为9×109CFU/mL,将此疫苗用5日龄樱桃谷鸭分别进行安全性和效力试验,结果显示疫苗安全、有效,攻毒保护率可达90％ ～ 100％(9/10 ～ 10/10).     

鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及药敏试验

从云南、山东16个鸭场有典型浆膜炎临床症状的病(死)鸭中分离到14株细菌,经形态、培养特性、生化特性、PCR等生物学特性鉴定,上述菌株均为鸭疫里默氏杆菌,型鉴定试验表明其中2株为RA-1型、4株为RA-2型,药敏试验表明山东分离株对头孢氨苄、痢特灵、链霉素、庆大霉素较敏感,云南分离株对氨苄青霉素、痢特灵、头孢氨苄较敏感。动物致病性试验显示RA-1、RA-1型分离菌株均可使健康鸭发病或死亡。     

猪链球菌4型分离株生物学特性研究

为分析猪链球菌4型(Streptococcus suis type 4,SS4)分离株的病原生物学特性,试验对来自中国不同地区的10株猪链球菌4型进行了多位点序列分型,通过PCR方法对猪链球菌7个保守管家基因aroA、gki、dpr、mutS、recA、thrA、cpn60进行扩增,测序后将结果上传至MLST数据库查找序列型,然后制作聚类分析图来阐明菌株之间的亲缘关系;采用PCR方法对7种主要的毒力基因gdh、mrp、epf、sly、fbps、gapdh与orf2进行鉴定,通过毒力因子谱来分析猪链球菌4型毒力因子的分布;以纯化的10株细菌对BALB/c小鼠进行动物致病性试验,根据小鼠致死数量筛选出最强毒株,并进行新西兰兔致病性试验。结果显示,10株猪链球菌4型经多位点序列分型,6株为ST850型,3株为ST1006型,1株为ST94型;结合菌株分离地区分析发现,广东和江苏地区菌株有较高的同源性,江沪地区菌株出现分化现象,表现为遗传多样性;10株菌株均检测到了gdh、gapdh和orf2毒力基因,7株检测到sly基因,4株检测到fbps基因,根据毒力因子谱发现共有3个毒力基因型,gdh+sly+gapdh+orf2+型有6株,gdh+fbps+gapdh+orf2+型有3株,gdh+sly+fbps+gapdh+orf2+型仅有1株。动物致病性试验表明,10株细菌均能使BALB/c小鼠死亡,其中SH1510的半数致死量低至1×108 CFU,对小鼠的致病性最强,将纯化的SH1510菌液接种新西兰兔,可使新西兰兔出现典型的神经症状并死亡。以上结果为猪链球菌的遗传进化、毒力研究提供了新的数据,丰富了猪链球菌病的研究。     

选定的外界因素对兔子精液质量的影响

本文研究的目的是测定重金属以及高温环境对兔精液质量的影响,本试验选择31只新西兰白色雄兔,饲喂混有不同剂量镍和锌的混合饲料,(P1组:17.5mg NiCl2/kg;P2组:35.0mg NiCl2/kg;P3组:17.5mg NiCl2/kg+30.0mgZnCl2/kg和P4组:35.0mg NiCl2/kg+30.0mgZnCl2/kg;试验1),以及将雄兔处于高温环境中(36±3℃;试验2),然后将其与对照组进行比较。利用CASA系统对所收集到的雄兔精液进行精子活力和浓度的分析。在第1个试验中,P3和P1,P4组与对照组相比较精子活力差异显著(P<0.01),并且P3组与P1组,P4组和对照组相比表现为最低的精子前进动力(P<0.01)。在第2个试验中,与第1次采精相比,最后1次采精的精子活力最低(P<0.01),然而与对照组和第3次采精实验相比,第1组试验的精子活力表现为最高(P<0.05)。结论:饲喂含有重金属饲料和身处高温环境时,雄兔精液的质量以及接下来的受精能力可能会受到负面的影响。     

提高甘草原生质体游离产量及分裂频率的研究

为探讨影响胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Batal.)原生质体游离的因素,提高原生质体游离产量和分裂频率,试验采用纤维素酶、果胶酶、离析酶不同浓度组合的酶解液,在3种酶解方式下对甘草叶片、下胚轴、愈伤组织进行了原生质体游离。结果表明:苗龄11 d的甘草叶片、下胚轴及继代5次的愈伤组织是原生质体游离的良好材料,三者均在2.0%纤维素酶+0.5%果胶酶和2.0%纤维素酶+0.25%离析酶+0.5%果胶酶的酶解液中原生质体游离频率最高,其产量和活力分别为1.25×10⁵~1.26×10⁵个·g^-1,65.7%~70.5%;1.43×10⁵~1.44×10⁵个·g^-1,69.5%~72.8%;1.10×10⁵~1.16×10⁵个·g^-1,61.9%~69.4%;纵向切割的下胚轴平均原生质体产量和活力高于叶片和愈伤组织,分别为1.19×10⁵个·g^-1,65.2%。此外,在40 r·min^-1摇床上处理7 h的酶解混合物中原生质体产量最高;而先静置后缓慢震荡(40 r·min^-1)的酶解方式可得到最佳原生质体产量和活力。将原生质体密度调整到1×10⁵个·g^-1并培养于KM8P培养基中,能获得最高频率的原生质体分裂频率(2.34%)。试验获得了较好的甘草原生质体游离及分裂体系。     

恩诺沙星完全抗原的合成及兔源多抗血清的制备

为了合成恩诺沙星（enrofloxacin,EFLX）完全抗原,制备兔源多克隆抗体血清,试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA为免疫原免疫兔,以EFLX-OVA为检测原通过ELISA方法检测兔血清效价。结果表明,免疫兔血清效价都在1∶51200以上,其中2号兔效价最高,达到1∶204800,敏感性好,半数抑制浓度IC₅₀为169.91 ng/mL,检测范围为37.52～302.31 ng/mL。本试验成功制备了EFLX完全抗原,获得了敏感的兔源多克隆抗体血清,为以后ELISA试剂盒和胶体金试纸条的研发奠定了基础。     

鸡大肠杆菌异型外膜蛋白原生质体融合菌株的构建

以鸡大肠杆菌Ww1株(O78,OMP-3,AmpR,KS)和WD2株(O2,OMP-1,AmpS,KR)作为亲本菌株,采用溶菌酶-EDTA法制备原生质体,以PEG作为助溶剂,进行原生质体融合,得到4株双耐药融合菌株,融合菌株的形态、染色特性和生化特性均符合大肠杆菌的特性,且均能同时表达两个亲本菌株的外膜蛋白(OMP)抗原(OMP-3,OMP-1)和O抗原(O78,O2),表明两个亲本菌株发生了融合和染色体重组。经多次传代证明融合菌株是稳定的。     

饲粮蛋氨酸添加水平对断奶至3月龄獭兔生长性能、免疫功能及血清生化指标的影响

本文旨在探讨饲粮蛋氨酸添加水平对断奶至3月龄獭兔生长性能、免疫功能及血清生化指标的影响。选用30日龄断奶生长獭兔200只,随机分成5组,每组40个重复,每个重复1只兔。各组分别饲喂在基础饲粮中添加不同水平(0、0.15%、0.30%、0.45%、0.60%)蛋氨酸的试验饲粮。预试期7 d,正试期53 d。结果表明:1)饲粮蛋氨酸添加水平对平均日采食量影响不显著(P>0.05);对平均日增重影响显著(P<0.05),在0.45%添加组时达到最大值16.76 g/d;对料重比影响极显著(P<0.01),在0.45%添加组时达到最小值3.55。2)饲粮蛋氨酸添加水平对摄入氮、粪氮、尿氮、可消化氮、沉积氮、氮表观消化率、氮利用率和氮生物利用率均无显著影响(P>0.05)。3)饲粮蛋氨酸添加水平对血清免疫球蛋白A、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M含量均无显著影响(P>0.05)。4)饲粮蛋氨酸添加水平对血清总蛋白、白蛋白、甘油三酯含量及碱性磷酸酶活性均无显著影响(P>0.05),但极显著影响血清尿素氮含量(P<0.01),其中0.30%和0.45%添加组极显著低于0和0.15%添加组(P<0.01),在0.45%添加组时达到最小值5.70 mmol/L。综合考虑本试验所测指标,断奶至3月龄獭兔的蛋氨酸适宜添加水平为0.45%(饲粮总蛋氨酸水平为0.68%)。     

以重组mE2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法的研究

以在Ｅ．ｃｏｌｉ高效表达的猪瘟病毒Ｅ２基因主要抗原编码区（ｍＥ２）为抗原,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的兔抗猪ＩｇＧ为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经检测筛选出最佳反应条件为：１２μｇ／孔纯化的Ｅ．ｃｏｌｉ表达的ｍＥ２重组蛋白包被酶标板,用１０％的兔血清或马血清进行封闭,以正常Ｅ．ｃｏｌｉ裂解上清液稀释待检血清。试验表明应用重组ｍＥ２蛋白作为诊断ＨＣＶ抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

黄秋葵对肉兔生产性能、肉品质和血清生化指标的影响

为研究在饲料中添加不同量的黄秋葵对肉兔生产性能、脏器指数和血清生化指标的影响,试验选用35日龄健康新西兰肉兔120只,随机分成5组,每组3个重复,每个重复8只,预试期7 d,正试期28 d,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮中添加1%、2%、3%和4%黄秋葵粉。结果表明：与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组滴水损失率分别降低16.83%、15.63%和20.19%,差异显著（P < 0.05）|试验Ⅱ、Ⅲ组肉兔的期末重分别增加6.91%、8.81%,平均日增重分别增加16.91%、20.61%,肉品质的红度分别升高50%、56.74%,血清总蛋白分别升高12.44%、23.69%,白蛋白分别升高9.39%、22.91%,均差异显著（P < 0.05）|与对照组相比,试验Ⅱ、Ⅲ组料重比分别下降12.57%、15.64%,肉品的黄度分别降低20.22%、27.22%,血清甘油三脂分别降低9.87%、17.11%,均差异显著（P < 0.05）|与对照组相比,试验Ⅲ组兔肉的剪切力降低16.06%,熟肉率提高12.14%,血清尿素氮下降9.50%,均差异显著（P < 0.05）|各组肉兔的平均采食量、兔肉的亮度、血清葡萄糖、总胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶及碱性磷酸酶活性均无显著差异（P > 0.05）。因此,肉兔饲料中黄秋葵的适宜添加量为3%。 [关键词] 黄秋葵|肉兔|生产性能|肉品质|血清生化指标     

早期断奶对仔猪血清肿瘤坏死因子和白细胞介素-2含量的影响

本文旨在研究仔猪血清肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素-2(IL-2)含量的变化规律,以及早期断奶、免疫球蛋白和乳铁蛋白对TNF和IL-2含量的影响。试验选用约克夏仔猪,试验1分别在1、7、14、21和28日龄选取2头仔猪;试验2仔猪分别在14、18和35日龄断奶;试验3选取16头仔猪,分为4个处理,每个处理4个重复;试验4选取32头仔猪,分为4个处理,每个处理8个重复。结果表明:(1)血清TNF(P<0.01)、IL-2(P<0.05)含量从1日龄到7日龄显著降低,14日龄又上升,并维持一定水平。(2)与35日龄断奶仔猪相比,早期断奶仔猪断奶14和35 d血清IL-2含量显著降低(P<0.05),14日龄断奶仔猪血清TNF含量也表现出降低的趋势。(3)饲喂血浆蛋白粉和特异性免疫卵黄日粮仔猪血清TNF含量显著提高(P<0.05)。(4)饲喂2、10和20 mg/kg乳铁蛋白仔猪血清TNF、IL-2含量均表现出提高的趋势。由此得出结论,早期断奶降低了仔猪血清IL-2含量,饲喂血浆蛋白粉和特异性免疫卵黄日粮可以提高血清TNF含量。     

Partial purification of somatic and excretory-secretory products of adult Fasciola hepatica and their application for the serodiagnosis of experimental and natural fascioliasis using an ELISA

Six partially purified antigen fractions from adult Fasciola hepatica (three somatic tissues [Fhs] and three excretory products [Fhm]) were used in a micro-ELISA to monitor the serum antibody levels of an experimental rabbit F hepatica infection. Fhs 1 detected infection after 19 to 26 days and the titre remained significantly higher than that of the controls until day 103 of infection (end of experiment). Using Fhm 1 and Fhm 2, antibodies were detected between 12 and 19 days after infection. Fhm 2 distinguished infected from uninfected rabbits during the entire experimental period, whereas Fhm 1 did not. Excretory-secretory products of a low molecular weight were also antigenic and could differentiate between infected animals and controls. One hundred and nine sera from naturally infected cattle and uninfected controls were tested with the same antigens. Although antibody was detected, the results were inconsistent and further purification of the antigens may eventually improve the sensitivity of the method.     

5个家兔群体白细胞介素10基因外显子的遗传多样性分析

本研究旨在分析家兔IL-10基因外显子的多态性,以期为进一步研究家兔IL-10与疾病抗性的相关性提供理论依据。根据GenBank上收录的IL-10基因序列设计5对特异性引物,采用PCR-SSCP方法对海狸色獭兔、白色獭兔、皖系长毛兔、闽西南黑兔、九疑山兔这5个家兔群体IL-10基因的5个外显子序列进行多态性分析。结果表明:在IL-10基因外显子3上检测到4种等位基因,10种基因型,存在3个SNPs位点;在外显子4上检测到2种等位基因,3种基因型,存在1个SNP位点。而外显子1、2、5对于实验群体未发现有遗传多态性。在外显子3中,D等位基因只在闽西南黑兔和九疑山兔中检测到,除海狸色獭兔和闽西南黑兔外其余群体均处于哈代-温伯格平衡,各群体不同基因型分布存在极显著差异(P<0.01)。在外显子4中,A1B1基因型在獭兔群体中没有检测到;除海狸色獭兔外其余各群体均处于哈代-温伯格平衡,海狸色獭兔跟白兔獭兔不同基因型分布差异不显著(P>0.05),而其余群体彼此不同基因型分布存在显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结果提示:5个家兔群体在IL-10基因外显子3和4中存在遗传多态性,不同家兔群体在遗传基础上存在着一定的差异。