金铁锁SSR-PCR反应体系的建立与优化

【目的】建立和优化金铁锁SSR-PCR反应体系。【方法】以金铁锁嫩叶为试验材料,采用Ezup柱式植物基因组DNA抽提试剂盒、SDS法和CTAB法提取金铁锁DNA,并对提取结果进行比较。利用初筛并合成的20对金铁锁EST-SSR引物,对影响SSR-PCR体系的模板DNA、引物、Taq DNA聚合酶和dNTP用量这4个因素进行L16(44)正交实验,从而建立较为稳定的金铁锁SSR-PCR反应体系。【结果】试剂盒法提取得到的金铁锁DNA质量最好且符合SSR分子标记试验;在20对金铁锁EST-SSR引物中,有2对可用于SSR多态性分析;各因素对PCR扩增效果的影响程度为引物Taq DNA聚合酶模板DNAdNTP。试验最终确定的金铁锁SSR-PCR最佳反应体系(20μL):1.0 mL模板DNA(40 ng/μL)、1.5μL引物(10μmol/L)、0.3μL dNTP(10 mmol/L)、0.3μL Taq DNA聚合酶(5U/μL)以及2.0μL 10×PCR Buffer(含Mg2+15 mmol/L),用ddH2O补足至总体积20μL。【结论】所建立的金铁锁SSR反应体系可为金铁锁不同种群的遗传变异研究及杂交育种时亲缘关系的分子鉴定提供前期研究基础。     

高山被孢霉DNA提取方法的比较与改进

利用CTAB法、SDS裂解法、氯化苄法和溶菌酶消化法提取高山被孢霉菌团的DNA.结果表明,CTAB法提取的DNA收率与纯度均较高,收率在700μg·g-1菌团以上,蛋白质污染少;SDS裂解法提取的DNA收率和纯度均较低,蛋白质污染严重;氯化苄法提取的DNA纯度较高,且无需苯酚纯化,但其易降解成DNA片段,质量稳定性较差;溶菌酶消化法无需采用液氮研磨,提取的DNA能达到分子生物学分析的要求,但收率较低,且步骤烦琐,成本较高.用改进的CTAB法可得到高纯度、高收率的被孢霉DNA,并可用于酶切或PCR扩增.     

黄瓜白粉菌基因组DNA 提取方法比较

以黄瓜白粉病菌为试验材料,比较分析了改良CTAB法、SDS法和真菌试剂盒法对黄瓜白粉病菌基因组DNA提取的效果。结果表明,CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA在纯度(R=A_(260 nm)/A_(280 nm))和产量上均优于SDS法和真菌试剂盒法,且杂质少。CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA产率为204.3μg/g,而SDS法和真菌试剂盒法分别为147.7、117.7μg/g,且方法产率之间差异极显著。采用CTAB法提取的DNA纯度较高,为1.969 6;SDS法和真菌试剂盒法提取的DND纯度较低,分别为1.832 2和1.507 9。     

3种试剂盒提取烤后烟叶DNA的效果比较

【目的】筛选出简单、快速及高效的烤后烟叶DNA提取试剂盒。【方法】选用3种不同的DNA提取试剂盒提取烤后烟叶DNA,通过比较DNA的纯度和浓度、实时荧光定量PCR扩增Ct值以及凝胶电泳图谱分析的方法,综合评价DNA提取效果。【结果】AxyPrep基因组DNA小量试剂盒所提取的DNA,其纯度和浓度较高,用时短,DNA质量好,适用于小量DNA的提取;磁珠法植物基因组DNA试剂盒提取DNA,其浓度和纯度虽然略高于前者,但用时很长,比较适用于批量DNA的提取;Gene Pure新型植物基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA,其纯度高、但浓度低。【结论】烤后烟叶DNA的提取推荐使用AxyPrep基因组DNA小量试剂盒。     

油梨果肉DNA提取方法的比较

为了获取高质量的油梨果肉DNA,以油梨果肉为试材,比较改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法对油梨果肉DNA的提取效果。结果表明:上述3种方法均可从油梨果肉中提取DNA,但改良SDS法与改良CTAB法所获得的DNA浓度都在600μg/m L以上,纯度(OD260nm/OD280nm)均在1.8左右,纯度高且完整性较好,可用于未来分子标记分析。     

牡丹根系RNA提取方法的比较研究

【目的】探索牡丹根系RNA提取的最佳方法。【方法】以牡丹(Paeonia suffruticosa)'凤丹'5a生实生苗的根系为材料,首次比较研究了改良Trizol法、改良CTAB法、改良异硫氰酸胍法及Column Plant RNAout试剂盒法提取RNA的效果。【结果】改良Trizol法及改良异硫氰酸胍法均不能从牡丹根系中提取出高质量RNA。而改良CTAB法及试剂盒法提取RNA的电泳结果可见清晰完整的28S rRNA1、8S rRNA及5S rRNA条带,其中28S rRNA与18S rRNA的亮度比约为2∶1;浓度及纯度检测表明这2种方法提取的RNA纯度较高,且改良CTAB法提取的RNA浓度(269.50μg.g-1)是试剂盒法(82.14μg.g-1)的3倍。【结论】结合RNA的提取质量和成本,改良CTAB法更适宜于牡丹根系RNA的提取。     

马褂木ISSR-PCR扩增体系的优化

【目的】建立稳定的马褂木ISSR-PCR扩增体系,为马褂木种群ISSR多样性分析提供技术支持。【方法】采用单因素试验对ISSR-PCR扩增体系中的MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、DNA模板用量和退火温度等主要因素进行筛选优化。【结果】采用试剂盒方法提取马褂木叶片DNA的效果优于改良CTAB法,最优PCR反应体系为：总体积20.0μL中含有10×Buffer2.0μL、MgCl21.8mmol/L、dNTPs0.2mmol/L、引物0.5μmol/L、TaqDNA聚合酶1.00U、DNA模板60ng、退火温度59.1℃。【结论】优化后的马褂木ISSR-PCR扩增体系能够扩增获得清晰、稳定的条带,可满足马褂木种群ISSR多样性分析的要求。     

大果油茶基因组DNA提取及ISSR反应体系建立

【目的】建立大果油茶的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序,为其深入研究奠定基础。【方法】以大果油茶嫩叶片为供试材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。【结果】提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280值在1.8～2.0之间,DNA无降解现象,完全可以满足ISSR-PCR扩增要求。在25.0μLISSR-PCR反应体系中,各组分的适宜浓度配比为：40ng/μL模板DNA1.0μL、2.5mmol/LdNTPs2.0μL、5U/μLTaqDNA聚合酶0.2μL、10μmol/L引物1.0μL、10×PCR Buffer2.5μL（含有Mg2＋）,加ddH2O至25.0μL。PCR反应程序为：94℃预变性5min;94℃变性40s,52℃和53℃退火40s,72℃延伸90s,40个循环;最后72℃延伸7min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。【结论】建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究大果油茶遗传变异和多样性。     

一种改良的旱地土壤微生物DNA提取方法

为了寻求一种快速、简便、经济且高效的旱地土壤微生物DNA提取方法,在QIN等的稻田土壤DNA提取方法基础上,进行改良试验:(1)称0.3 g干土加入300μL无菌水,于-80℃过夜;(2)研究加入CTAB和SDS的最适配比,CTAB、SDS的总体积为500μL,并设置加玻璃珠和不加玻璃珠试验,最后将改良方法与试剂盒法进行土壤微生物DNA提取效果对比分析。结果表明,将称取的0.3 g干土中加入300μL无菌水于-80℃过夜,并调整CTAB与SDS的体积配比为100∶400,所提取的红壤旱地土微生物DNA含量最高达到6.29μg/g(略低于试剂盒法的7.46μg/g),纯度较试剂盒法高,PCR扩增效果良好,此法相对于试剂盒提取法更经济、高效。因此,该改良QIN法适合于红壤旱地土壤微生物DNA的提取。     

西南地区榧树属植物3种不同总DNA提取方法的比较分析

以西南地区榧树属植物叶片为材料,利用改良CTAB法,改良SDS法和试剂盒法提取其总DNA,采用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳方法检测所得总DNA的得率和纯度,用PCR扩增的方法检测所得总DNA的质量,并对3种不同提取方法的结果进行比较分析。结果表明,3种不同提取方法提取到的总DNA都能满足后期分子标记的要求,其中,改良CTAB法得率最高但纯度稍差,改良SDS法次之,试剂盒法得率最低但纯度高。为了更好的进行后期的分子试验,选择试剂盒法提取纯度较高的DNA。     

甘薯薯块DNA提取方法研究

甘薯薯块富含淀粉、酚类等物质,不利于DNA提取。为了研究甘薯薯块DNA提取的最佳方法,采用经典CTAB法、改良CTAB法一、改良CTAB法二和SDS提取法,对甘薯薯块总DNA提取效果进行比较,以试剂盒法提取结果作对照。结果表明:采用经典CTAB提取法和SDS提取法获得的薯块DNA含有较多杂质,且降解严重,样品质量低;CTAB改良法一能降低DNA样品中多糖等物质的含量,但DNA存在一定程度降解,且耗时较长;CTAB改良法二提取效果最佳,杂质含量低且DNA降解少,与试剂盒提取效果最接近,是一种较为理想的甘薯薯块DNA提取方法。     

不同方法提取雪莲果多糖工艺的优化研究

为确定雪莲果多糖提取的最佳条件,研究了热水提取、微波提取和超声波提取3种方法从雪莲果干粉中提取多糖的最佳工艺条件。结果表明:3种方法在最佳条件下雪莲果多糖得率高低顺序为:超声波法微波法热水法。影响微波法提取的各因素作用高低顺序为:料液比提取温度提取时间,提取多糖的最佳条件为料液比1∶25、温度90℃、时间35min,多糖得率为3.24%。超声波法提取多糖的各因素顺序为:提取时间料液比提取温度,提取多糖的最佳条件为料液比1∶25、温度75℃、时间50min,多糖得率为3.42%。通过紫外吸收光谱分析可知,所得粗多糖产品的纯度较高。     

土壤中联苯菊酯样品不同制备方法比较研究

[目的]研究土壤中联苯菊酯样品索氏提取法与震荡提取法之间的差异。[方法]在白蚁预防施工过程中,随机抽取8个样品。分别用索氏提取法和震荡提取法进行样品的提取,再用气相色谱检测。[结果]试验提供8个样品进行对比试验,其中6个样品经索氏提取后检测浓度明显高于震荡提取后检测浓度,只有2个样品前者浓度低于后者。[结论]索氏提取法可以用于土壤中联苯菊酯样品的提取。     

人心果胶实验室提取方法的研究

以人心果果实为材料,用溶剂法提取人心果胶,通过比较不同含量NaOH溶液(ω=5%, 10%, 15% )、不同温度、不同溶剂(甲醇、乙醚、石油醚)、不同抽提次数、不同提取时间、不同颗粒大小的原料对提胶效果的影响。结果表明,粉碎的细粒( <1mm)以ω=5% NaOH溶液在45℃下煮3h,再用浓HCl处理2h,用石油醚回流抽提3次,回流温度80℃,抽提时间为5h,效果较好。     

大豆异黄酮提取方法的研究进展

文章综述了大豆异黄酮的各种提取方法,列出溶剂萃取法、超临界流体提取法、超声波和微波提取法的原理及目前应用状况,并对各种提取方法的特点给出了评价。     

不同提取方法获得的海藻活性物质对大豆生长的影响

海藻活性物质是指含有植物生长所必需营养成分,如胺类、细胞色素C、吲哚类化合物等植物生长物质,作为肥料、农药、植物生长调节剂等越来越多地应用于农业领域。该试验以马尾藻为研究对象,通过物理、化学、生物等不同提取方法获得其活性物质,以天然海藻植物激素总量作为评价指标,并施用于大豆的整个生长周期。经田间试验证明,不同提取方法获得的海藻活性物质对大豆生长有显著性差异。     

杜仲胶实验室提取方法的研究

提取杜仲药用成分后的叶渣,分别用发酵法、甲苯浸提和碱浸３种方法提取杜仲胶,并对碱浸法碱的浓度、浸提温度和浸提次数进行了比较试验。结果以碱浸法用１０％碱液在９０℃温度下,连续提取２次,浸提物再用浓盐酸处理２ｈ,分解除去粗胶中的非胶部分,效果较好。     

野外长期污染土壤中残留多环芳烃的提取

[目的]准确定量野外污染土壤中残留的PAHs,为PAHs污染土壤的修复提供依据。[方法]针对长期石油污水灌溉农田土壤,对比了常用PAHs提取方法（索氏、震荡和超声提取方法）的提取效率差异。[结果]索氏提取法对土壤中总PAHs的可提取量最高（6873.7μg/kg）,其次为往复震荡提取法（6698.8μg/kg）,超声提取法最低（5737.6μg/kg）,约为前2种提取方法的84%左右;相对于其他提取方法,索氏提取对4环和6环PAHs的提取效率最高,震荡提取对2环和5环PAHs的提取效率最高,超声萃取仅对3环PAHs提取效率最高。[结论]该研究为野外污染土壤中残留PAHs定量评价方法的选择提供了技术支持。     

微波萃取-气相色谱法测定土壤中9种有机氯农药

[目的]建立测定土壤中9种有机氯农药的微波萃取-气相色谱法,为有机氯农药检测提供参考。[方法]微波萃取-氟罗里硅土固相小柱净化同时提取土壤中9种有机氯农药污染物,利用气相色谱电子捕获检测器(ECD)检测样品。[结果]9种有机氯污染物平均回收率为78.9%~114.1%;方法检出限为0.27~0.56μg/kg,精密度(RSD)为2.48%~4.75%。[结论]利用微波法提取不仅可节省时间、提高效率,而且能获得较高的回收率。     

高山绿茶茶多酚提取工艺研究

[目的]研究高山绿茶茶多酚的提取工艺,并优选其提取工艺。[方法]以高山绿茶为原料,通过单因素试验和正交试验,对茶多酚进行乙醇溶液提取和超声波辅助提取。[结果]高山绿茶茶多酚的醇提最佳条件为乙醇浓度50%,浸提温度为60℃,浸提30 min,料液比为1∶20,此时茶多酚的提取率为24.72%。超声波辅助提取最佳条件为乙醇浓度40%,浸提温度为60℃,浸提30 min,浸提1次,此时茶多酚的提取率为25.36%。[结论]高山绿茶茶多酚的超声波辅助提取率稍高于醇提,但差别不大。