奶牛隐孢子虫病流行病学调查及初生犊牛感染试验

应用饱和糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法调查郑州、商丘和洛阳3个地区的5个奶牛场、2个专业村的582份粪样，查出阳性样品64份，隐孢子虫总阳性率11％（64／582），发现两种不同形态的卵囊，根据其形态结构等特点鉴定为小球隐孢子虫（C．parvum）和安氏隐孢子虫（C．andersoni）。其中2个场奶牛感染安氏隐孢子虫，有1个场的奶牛感染小球隐孢子虫，且感染强度较小。犊牛感染率较育成牛、成年牛高。并进行小球隐孢子虫分离株对初生犊牛的致病性试验，其结果为潜隐期7天，排卵囊高峰出现在感染后第16天，高峰期5天。剖检后消化道黏膜经抗酸染色鉴定，仅在回肠中段发现卵囊。     

南京地区犊牛隐孢子虫感染情况调查

以南京地区３个奶牛场的５５头６月龄以内的犊牛为调查对象，在１６头犊牛的粪便中查到隐孢子虫卵囊，平均感染率为２９．１％（１６／５５）。Ａ、Ｂ２个奶牛场犊牛的感染率（分别是４０．０％和３５．７％）高于Ｃ场犊牛的感染率（１９．２％），但３个奶牛场感染率的统计学差异不显著（Ｐ〉０．０５）。各奶牛场１～３月龄犊牛隐孢子虫的感染强度和感染率均比４～６月龄犊牛高（Ｐ〈０．０５）。     

河南省山羊隐孢子虫流行病学调查

对河南省4个山羊场进行了隐孢子虫病流行病学调查.采集山羊粪样1 017份,以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查,结果共检出隐孢子虫卵囊阳性山羊粪样28份,平均感染率为2.75%;有2个山羊场检出隐孢子虫卵囊,场感染率为50%;中牟某羊场阳性率最高,达4.95%;在各年龄段中,2～4月龄山羊隐孢子虫感染率最高,达5.43%;山羊隐孢子虫感染可能与季节有关;所检出的隐孢子虫卵囊经形态学观察,初步鉴定为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum).     

重庆市部分种羊场山羊隐孢子虫感染情况调查

调查了重庆市山羊隐孢子虫感染情况,应用饱和蔗糖溶液漂浮法对重庆市武陵山区和山峡库区6个种羊场共301份粪样进行了检测(其中每个羊场抽检率大于10％).结果检出隐孢子虫阳性样品16份,平均感染率为5.32％,场感染率为50％,均在山峡库区,种羊场阳性率最高为21.1％;不同年龄阶段感染情况为:以2～3月龄羔羊、产后1月和怀孕2月左右母羊的感染率较高,分别为9.68％、10.5％和6.67％.所检出的隐孢子虫卵囊经形态学观察,初步鉴定为微小隐孢子虫(C.Parvum).     

奶牛源微小隐孢子虫的分子鉴定及动物感染试验

采用饱和蔗糖溶液漂浮法检查商丘市某奶牛场牛新鲜粪便样本的隐孢子虫卵囊,用18SrRNA基因对隐孢子虫进行PCR扩增和限制性片段长度多态性分析;基于GP60基因位点对微小隐孢子虫进行基因亚型鉴定。结果显示:103份样本中有50份为隐孢子虫阳性,42份经形态学鉴定为安氏隐孢子虫,8份形态学未能鉴定到种。经限制性片段长度多态性分析,7个分离株为微小隐孢子虫,1个分离株为牛隐孢子虫;序列比对分析,7个微小隐孢子虫均为人兽共患基因亚型IIdA19G1。接种1头3日龄犊牛1×106个卵囊,潜隐期为3d,显露期为14d,于感染后第7天和第10天出现2个排卵囊高峰期,收集到大量纯卵囊。     

河南省奶牛安氏隐孢子虫感染的流行病学调查

为了解河南省奶牛安氏隐孢子虫病流行情况,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对河南省12个规模化奶牛场和7个奶牛养殖小区共计2 268份粪便样本进行检查,发现109份为阳性粪便样本,感染率为4.8%。卵囊呈长椭圆形,平均大小为7.8μm×6.4μm,卵囊指数为1.22;12个养殖场中10个为阳性场,7个养殖小区中4个为阳性小区,不同地区奶牛安氏隐孢子虫感染率统计学差异显著(P0.05);不同年龄段奶牛安氏隐孢子虫感染率统计学差异极显著(P0.01);不同养殖方式奶牛隐孢子虫感染率统计学差异不显著(P0.05)。结果表明:奶牛隐孢子虫感染流行范围较广,存在一定人兽共患风险。     

安徽省凤台县猪隐孢子虫病流行病学调查

调查了安徽凤台县猪隐孢子虫感染情况。在162头猪的粪样中检出92头有隐孢子虫卵囊，其感染率为56.8％（92/162）。经鉴定，所获虫体为小隐孢子虫。调查结果表明，猪的隐孢子虫感染存在年龄和地区性差异。     

河南省绵羊隐孢子虫病的流行病学调查

为获得河南省绵羊隐孢子虫的流行病学资料,应用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对河南省4个地区的5个羊场共1701份绵羊粪样进行了检测,并对绵羊隐孢子虫感染的风险因素进行了评估。结果表明,查出隐孢子虫阳性样品80份,总阳性率为4．70％,3周龄羔羊和产后3周母羊的感染率最高,分别为41.18%和6．29％。根据隐孢子虫卵囊的形态学数值分析结果,将发现于绵羊的隐孢子虫卵囊初步鉴定为微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫。同时发现绵羊隐孢子虫感染存在年龄差异,但未见明显的季节性变化。     

安徽淮北地区黄牛隐孢子虫病流行病学调查

调查了安徽淮北地区黄牛的隐孢子虫感染情况。在１２４头黄牛的粪样中检出了隐孢子虫卵囊,感染率为６０．１９％（１２４／２０６）。经鉴定,所获虫体为小隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ）。调查数据处理结果表明,黄牛的隐孢子虫感染存在年龄和地区性差异,但与性别无关。     

河南省部分地区乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

为进一步掌握乳牛隐孢子虫病在河南省的流行动态,从河南省郑州、开封、济源和鹤壁4个地区9个奶牛场采集12月龄以内的乳牛粪便样品582份,用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行检测。结果显示,隐孢子虫总感染率为26．12％（152／582）。其中,断乳前犊牛（5日龄至2月龄）隐孢子虫感染率为30．91％（51／165）,断乳后犊牛（3～12月龄）感染率为24．22％（101／417）。依据形态数值初步鉴定为2种隐孢子虫,即微小隐孢子虫和安氏隐孢子虫。微小隐孢子虫在断乳前犊牛阳性样品中的比率为50．98％（26／51）,在断乳后乳牛阳性样品中的比率为9．90％（10／101）。另外,饲养方式（断乳前犊牛单独隔离饲养和未隔离饲养）对断乳前犊牛2种隐孢子虫的感染率有显著影响。     

湖南省牛的隐孢子虫病调查及小鼠感染试验

对湖南省８个县（市）的２９６头奶牛、１７７头水牛及１２头黄牛进行了隐孢子虫病的调查。发现６个县（市）的牛有隐孢子虫的感染。奶牛感染率为５．３％～２８．８％，其中某牧场１岁以下犊牛的感染率（４６．７％）高于１岁以上牛（２３．９％），３、４月龄犊牛的感染率（分别为１００％和６０％）高于４月龄以上的犊牛；水牛感染率６．６％～４０％；黄牛中未发现隐孢子虫感染。以牛粪中分离出的隐孢子虫卵囊人工感染小鼠成功，     

安徽省奶牛隐孢子虫感染情况及分布特点

为查明安徽省奶牛隐孢子虫感染与地理分布情况,选取该地区１０个奶牛场进行了奶牛隐孢子虫感染情况的调研,在５２头奶牛的粪样中查到了隐孢子虫卵囊,其感染率为６．３９％（５２／８１４）;经鉴定,所获虫体为小隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ）和鼠隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｍｕｒｉｓ）;奶牛的隐孢子虫感染存在年龄和地区性差异。     

鸭隐孢子虫病调查及雏鸡感染试验

河南省郑州、尉氏、信阳三个地区２１个鸭场２３群共３４４００多只家鸭隐孢子虫感染情况调查结果：２３群家鸭共有１６群感染有隐孢子虫，群体感染率为６９．５７％；不同月龄的家鸭均有感染，１～８月龄鸭感染率（８７．５％）明显高于８月龄以上鸭的感染率（６０％）。所有阳性鸭群中粪便卵囊数均较少。所查卵囊均呈卵圆形、淡红色、卵囊壁单层、光滑无色。测得１００个卵囊大小为３．９～５．７×５．０～６．１（微米），平均为４．７６微米×５．７５微米，卵囊形状指数为１．０５４～１．４３９，平均为１．２２１。鸭源隐孢子虫卵囊感染１日龄海兰雏鸡后，潜隐期４天、显露期１３天。涂片检查发现喉头、气管、肺脏、十二指肠、法氏囊有大量虫体寄生     

应用PCR诊断隐孢子虫病

应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）建立了一种诊断人及牛等哺乳动物隐孢子虫病的方法。试验采用甘油漂浮 Ｇ３ 耐酸漏斗过滤法纯化隐孢子虫卵囊，以液氮冻融法制备模板 Ｄ Ｎ Ａ，根据隐孢子虫 １８ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 序列设计 Ｐ Ｃ Ｒ 引物建立其诊断方法。该方法特异性强，可检出鼠隐孢子虫（ Ｃｒｙｐｔｏｓｐ ｏｒｉｄｉｕｍ ｍ ｕｒｉｓ）和小球隐孢子虫（ Ｃ．ｐａｒｖｕｍ ）卵囊；敏感性高，每克粪便可检出 ４００ 个卵囊。初步应用结果表明，所建立的 Ｐ Ｃ Ｒ 方法适合于人、牛等哺乳动物隐孢子虫病的临床诊断和流行病学调查。     

上海地区鸡鸭隐孢子虫病调查及人工感染试验

１９９２－１９９４年对上海地区５个鸡场，２个鸭场分别检查粪样７００份和４５０份、隐孢子虫阳性率鸡为２７％，鸭为５８％，不同日龄和不同季节其感染率存在着明显差异。经观察和测定，隐孢子虫卵囊多呈椭圆形成圆形，囊壁光滑，无微孔和极粒；内有４个月牙形子孢子，呈纵向排列；残体呈圆形且大小不等。     

牛新孢子虫病和弓形虫病的流行病学调查

为了调查我国牛新孢子虫和弓形虫的感染情况，应用新孢子虫酶联免疫吸附试验（ELISA）和弓形虫间接血凝试验（IAT）分别检测了来自国内10个省（市、自治区）的262份乳牛、10份肉牛和40份水牛血清。结果显示，乳牛新孢子虫的抗体阳性率为17．2％，弓形虫的抗体阳性率为2．3％，没有检测到既有新抱子虫抗体又有弓形虫抗体的乳牛血清。各牛场所检乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率在0～34．4％之间。在水牛和肉牛血清中未检测到新孢子虫抗体和弓形虫抗体。流产乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率为20．2％，未流产乳牛为16．1％，其中血清抗体阳性乳牛主要在妊娠中晚期流产。各个年龄段乳牛血清的抗体阳性率差异不显著（P〉0．05）。不同妊娠胎次的乳牛血清抗体阳性率差异不显著（P〉0．05）。确认新孢子虫病在国内大部分牛场存在。     

合肥市奶牛隐孢子虫病流行病学调查

为查明合肥市某奶牛场奶牛隐孢子虫感染情况,采用饱和白糖溶液漂浮法对该场381头奶牛的粪样进行检查,在52头奶牛的粪样中查到了隐孢子虫卵囊,其感染率为13.62%(52/381)。经鉴定,所获虫体为鼠隐孢子虫Crtptosporidium.muris。     

双抗夹心─ELISA诊断兔隐孢子虫病初步研究

本文报道了应用双抗夹心─ＥＬＩＳＡ检测兔粪便中隐孢子虫卵囊抗原方法的建立。试验所用抗体为抗小球隐孢子虫（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）卵囊壁的单克隆抗体，经对２０头份兔粪便样本分别进行抗酸染色和双抗夹心─ＥＬＩＳＡ试验．结果抗酸染色法检出８份有隐孢子虫卵囊，而ＥＬＩＳＡ法除对抗酸染色阳性的８份粪样判为阳性外，还对抗酸染色阴性的１份粪样判为阳性；并不与兔球虫粪便发生类属反应。此外，本试验还在稀释液中加入ＥＤＴＡ，并增加了反应温度，使得试验在抗体包被反应板并封闭完成后３０分钟结束整个检测过程。     

西宁奶牛场奶牛隐孢子虫病调查

1989年4月,用蔗糖液漂浮法(或饱和盐水漂浮法)对西宁奶牛场的奶牛隐孢子虫病进行了调查。在调查的两个队中都有隐孢子虫感染(12.7％),其中1—3月龄的犊牛感染率最高(26.3％),4—5月龄的犊牛感染率逐步下降(10.5％);6—7月龄的犊牛则没有发现。经在光镜下观察其卵囊的形态有小球形和卵圆形两种,两种卵囊均为无色.囊壁光滑,无微孔和极粒。孢子化的卵囊内有弯舌状的子孢子。     

套式PCR检测奶牛粪便中隐孢子虫

为了检测样品中的微量隐孢子虫，从含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA用作初始PCR（Initial-PCR）模板，以稀释的初始PCR的产物为模板进行套式PCR（Nested-PCR），用两对人工合成寡核苷酸分别作为两PCR的引物，扩增大小分别为540pb、258pb的特异片段。PCR产物经电泳鉴定，可从阳性粪便标本DNA抽提物中扩增出目的片段，而阴性对照不能扩增目的片段；初始PCR、套式PCR的敏感小生最低可分别检测到含卵囊100、5个／g粪便。初步应用结果表明某奶牛场的奶牛自然感染率为16.4％。试验表明套式PCR的敏感性比普通PCR约高100倍，能用于奶牛隐孢子虫感染情况的调查。