一种毛尖茶叶多糖MTP06的提取分离及其活性测定

本研究对一种毛尖茶叶多糖的结构与活性开展了研究。采用水提醇沉法提取毛尖茶叶粗多糖,经除蛋白后得到精制多糖(MP),以不同的柱层析方法对MP进行多次分离纯化,得到1个均一组分的毛尖茶叶多糖(Maojian Tea Polysaccharides No.06,MTP06)。采用1,1–二苯基–2–三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH)自由基清除、小鼠免疫细胞RAW264.7增殖、吞噬能力和产生NO等试验方法对MTP06的活性进行研究。结果显示MTP06对0.1 mmol·L~(-1) DPPH溶液的自由基清除率为30.85%,对小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖、吞噬能力和产生NO的能力均有促进作用,与空白对照组间有显著差异(P0.01),且质量浓度为500 mg·L~(-1)时,活性最大。     

春石斛品种Dendrobium Second Love‘Tokimeki’与金钗石斛多糖免疫活性的比较研究

为比较春石斛栽培品种Dendrobium Second Love‘Tokimeki’与金钗石斛的粗多糖、精多糖(除蛋白多糖)和多糖水洗组分(过层析柱分离的水洗组分)的免疫活性差异,分别对昆明小鼠灌胃上述6种不同纯度的多糖,观察其对小鼠脏体指数、迟发性变态反应、抗体积数和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分比与吞噬指数等免疫学指标的影响。结果表明:2种石斛的免疫活性随多糖纯度的提高而增强,纯度最高的多糖水洗组分免疫活性最强,且各指标均显著高于对照。D.Second Love‘Tokimeki’和金钗石斛同等纯度的多糖在胸腺指数、脾脏指数、小鼠耳肿胀率及小鼠抗体积数上均无显著差异,而D.Second Love‘Tokimeki’的3种不同纯度多糖的吞噬指数均达到了与金钗石斛多糖水洗组分无显著差异的水平。综合来看,栽培品种D.Second Love‘Tokimeki’的多糖免疫活性与金钗石斛多糖相近,具有良好的药用开发价值。     

苦丁茶冬青多糖乙醇分级纯化及其理化性质研究

为了研究苦丁茶冬青多糖醇沉规律及产物理化性质。通过热水浸提和不同浓度乙醇分级沉淀,得到乙醇终浓度为20%、40%、60%和80%的4种苦丁茶冬青多糖组分,即ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4。比色法检测各多糖组分总糖、糖醛酸、蛋白质和总酚含量;高效凝胶渗透色谱法进行相对分子质量的测定;紫外和红外光谱扫描考察各组分的光谱性质。结果表明：ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4总糖含量分别为19.21%、34.91%、37.70%和30.21%,糖醛酸含量分别为5.04%、44.90%、24.20%和5.84%;凝胶渗透色谱图表明：ICP-2和ICP-3为高纯度均一组分,分子量为440.440与348.279 ku;4种多糖组分在280 nm处均有吸收峰,说明均为糖蛋白质化合物。红外结果显示,各组分均为吡喃糖环构型。以上结果表明,乙醇分级沉淀的方法可用于分级纯化制备组分均一、纯度较高的苦丁茶冬青多糖组分。     

酶法修饰绿茶多糖对免疫低下模型小鼠免疫活性的影响

以糖苷酶溶液为工具酶,研究酶法修饰茶多糖对环磷酰胺抑制的免疫低下模型小鼠的免疫功能的影响。结果表明,原多糖TPS与改性后的茶多糖ETPS在免疫低下模型小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能和NK细胞活性4个方面的实验中,结果均呈阳性,说明它们均具有明显的增强免疫功能的作用,酶法修饰改性能显著提高绿茶多糖的免疫活性。在同等剂量下,ETPS与TPS相比能提高脾指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数,能显著提高DTH试验耳肿程度、血清HC50、NK细胞活性。绿茶多糖通过酶法修饰免疫活性得到增强。     

安吉白茶多糖抗肿瘤及免疫调节研究

选用MTT法研究了安吉白茶多糖的体外抗肿瘤活性;采用建立小鼠移植瘤模型,通过测定安吉白茶多糖对荷瘤小鼠抑瘤率和腹腔巨噬细胞吞噬能力,研究其体内抗肿瘤活性和免疫调节作用。结果表明,安吉白茶多糖体外能显著抑制S180细胞的生长,且具有剂量依赖关系。体内试验表明,与模型对照组相比,安吉白茶多糖对小鼠S180实体瘤和H22腹水型肝癌移植瘤的生长均有显著抑制作用(P<0.05),对荷瘤小鼠脾指数和胸腺指数也有较强增高作用。体内免疫调节试验结果显示,安吉白茶多糖可使荷S180实体瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力显著升高(P<0.05)。     

车前草多糖的结构和性质初探

从车前草中提取、分离纯化得到多糖组分PPII-a,并对其组成结构和性质进行分析。车前草经热水提取、DEAE-Sepharose F.F柱层析、Superdex-200柱层析得到车前草多糖PPII-a,经HPLC、UV、IR、比色、β-消去等方法对其组成结构及理化性质进行测定。结果表明:PPII-a为均一组分,相对分子质量为4.6×105Da,其总糖含量、蛋白含量、糖醛酸含量分别为90.5%、9.7%、20.9%,单糖组成及摩尔比为阿拉伯糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=7.6∶1∶1.8∶1.9;呈现多糖特征吸收峰,含有β-吡喃糖苷键。β-消去实验结果表明,糖链与结合蛋白之间是通过O-型糖肽键相连。因此,PPII-a是一种均一的具有O-糖肽键的酸性杂多糖。     

大粒车前子多糖的分离纯化及理化性质测定

沸水法提取得到的大粒车前子粗多糖经Sevag法脱蛋白后,再经葡聚糖凝胶层析柱反复纯化得到3个均一组分,即PLP-1、PLP-2、PLP-3,并对3个组分进行分子量及理化性质的测定。结果表明：PLP-1的相对分子量为3 292 494 u,PLP-2的相对分子量为1 725 889 u,PLP-3的相对分子量为1 286 790 u;糖含量分别为82.08 %、87.32 %和79.18 %;蛋白含量分别为0.54 %、1.16 %和0.72 %;糖醛酸含量分别为17.46 %、14.66 %和20.13 %。3个组分进行紫外光谱和红外光谱扫描结果显示,3个组分中均有蛋白质存在。     

茶多糖的化学修饰及体外抗凝血作用研究

采用DEAE-52纤维素柱层析的方法,分离纯化乌龙茶中的多糖成分;选用硫酸化、乙酰化和羧甲基化分别对纯化后的茶多糖进行化学修饰,研究了其修饰前后的体外抗凝血作用。结果表示:茶多糖具有抗凝血作用,能显著延长人体血浆的APTT值,而对TT和PT值无明显影响。茶多糖经柱层析后分离出四个多糖组分,其中组分Ⅱ为茶多糖总量的57.36%,抗凝血活性也相对较强。茶多糖组分Ⅱ经硫酸化、乙酰化和羧甲基化修饰后,抗凝血活性进一步增强,化学修饰试剂与多糖的比例以及修饰反应时间在一定的范围内,影响茶多糖分子结构的变化程度,相应改变抗凝血活性。     

槟榔籽提取物抗炎作用及化学成分研究

槟榔是我国四大南药之首,然而目前关于海南槟榔抗炎活性的研究甚少。本文制备了海南槟榔籽75%乙醇提取物(EA-ANE),并依次得到石油醚部位(PE-ANE)、乙酸乙酯部位(EAC-ANE)、正丁醇部位(BU-ANE)和水相(W-ANE),考察了不同萃取部位对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)产生一氧化氮(NO)、细胞因子和活性氧(ROS)的抑制作用,且测定了不同萃取部位的总多酚、总黄酮和原花青素含量,并采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱技术(UHPLC-QTOF-MS/MS)对抗炎活性较好的萃取部位进行了类黄酮组分的定性鉴定。结果表明,在浓度为0～200μg/mL,EAC-ANE对LPS诱导RAW264.7细胞分泌NO、小鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素2(PGE2)和ROS具有抑制作用,且具有浓度依赖性;EAC-ANE中,总多酚、总黄酮和原花青素的含量分别为(517.18±21.81)、(406.40±8.16)、(91.23±5.01)mg/g;从EAC-ANE中鉴定出76种类黄酮化合物,其中,儿茶素的相对含量最高(58.35%),其次为L-表儿茶素、原花青素B1、原花青素B2、原儿茶酸、桔皮素、原儿茶醛等。     

六堡茶多糖理化性质、体外抗氧化及其对人脐静脉血管内皮细胞的保护作用

以六堡茶为原料,利用水提醇沉法制得茶多糖粗品,经脱蛋白纯化后用30%、50%、70%的乙醇溶液进行分段,得到3种六堡茶多糖LTPS-30、LTPS-50和LTPS-70,并分析了其化学组成、分子量分布等理化性质;以自由基清除法(ABTS)和铁离子还原法(FRAP)评价其抗氧化活性;并以Na2S2O3损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为模型,探讨了它们对HUVEC氧化损伤的保护作用。结果表明,3种六堡茶多糖样品均为主要含有2个组分的非均一酸性多糖,平均分子量和总糖含量均为LTPS-70LTPS-50LTPS-30;而在蛋白质和总酚含量及两种抗氧化体系下的抗氧化活力均为LTPS-70LTPS-50LTPS-30,且LTPS-70表现出最强的细胞保护作用。说明茶多糖粗品经70%乙醇纯化后具有较强的生物活性,具有良好的应用前景。     

中低档绿茶中茶多糖的提取及降血糖作用

从中低档绿茶中提取茶多糖，分离提取和精制纯化的方法对其含量及生理活性有一定影响。理化处理和分析结果表明，茶多糖是一类与蛋白质结合在一起的酸性多糖或一种酸性糖蛋白，以丙酮为溶剂沉淀分离得到的茶多糖生理活性最高，降血糖作用最佳，而且方法操作简便，易于工业化生产。茶多糖对正常和实验性高血糖模型小白鼠的血糖均有显著的降低作用。茶多糖在降低四氧嘧啶高血糖小鼠血糖浓度的同时，使肝糖原大量增加，表明茶多糖在对糖代谢方面具有与胰岛素相类似的作用。     

绿茶多糖抗血浆脂蛋白脂质过氧化作用的研究

研究绿茶多糖体外清除氧自由基与抗脂蛋白氧化作用。采用化学发光法测定绿茶多糖对ROO·、O₂^-·及OH·的清除作用,采用比色法测定对H₂O₂的清除作用。给20名健康受试者空腹食用绿茶多糖前和2βh后抽取静脉血,采用序列超速离心法分离血浆极低密度脂蛋白（VLDL）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）,并观察各血浆脂蛋白过氧化程度以及氧化易感性的变化。结果表明,绿茶多糖对ROO·、O₂^-·、OH·及H₂O₂均有清除作用;食用绿茶多糖后受试者血浆及VLDL、LDL和HDL过氧化脂质水平明显降低;在体外进行氧化修饰时,LDL氧化延滞时间明显延长,提示LDL氧化易感性下降。研究结果提示,绿茶多糖可增强血浆及脂蛋白抗氧化能力,能够起到预防心血管疾病和延缓衰老的积极作用。     

不同酶法提取工艺对茶多糖组成的影响

采用果胶酶、胰蛋白酶以及复合酶等3种提取法和不加酶水浸提法为对照,提取崂山粗老绿茶中的茶多糖(TPS)。结果表明,复合酶提取法的提取率最高,达到5.17±0.17%。对4种工艺获得的TPS用SepharoseFF阴离子交换柱进行分离纯化,收集主要的含糖组分,分别测定其多糖含量、单糖组成、氨基酸组成。结果表明4种工艺对提取的TPS的单糖组成种类影响不大,但对各单糖组分之间的比例稍有影响。4种工艺获得的TPS的总糖含量由高到低依次为果胶酶法、复合酶法、胰蛋白酶法以及不加酶水浸提法,其中果胶酶法获得的TPS总糖含量高达95.26±4.09%,但其糖醛酸含量比其他3种工艺显著降低。4种工艺对提取的TPS的氨基酸组成种类影响亦不大,但对各氨基酸的含量有较大的影响。果胶酶法、胰蛋白酶法提取的TPS的各氨基酸含量与不加酶水浸提法的相比有较大的减少。     

从湖北青砖茶渥堆过程中分离真菌总状枝毛霉菌的鉴定与模拟发酵研究

对从青砖茶发酵堆中纯化分离的主要微生物进行鉴定。采用平板梯度稀释法对发酵茶渥堆中的微生物进行纯化分离;选取1株菌株LC-2利用分子生物学手段结合形态学鉴定等方法进行分类鉴定;并用高浓度冷冻菌粉对小鼠进行灌胃试验,检测急性毒理效果;最后对菌株LC-2进行青砖茶固态模拟发酵效果验证。结果表明,真菌LC-2菌落形态与显微形态与总状枝毛霉菌（Mucor racemosus Fres）相似,分子鉴定结果与总状枝毛霉菌（Mucor racemosus Fres）同源性最近,因此确定为总状枝毛霉菌（Mucor racemosus Fres）。菌粉灌胃未见对动物造成急性毒理损害。利用该菌株发酵生产的青砖茶汤色红黄,香气甜香略青,滋味绵软略甜,与传统工艺生产的青砖茶品质无大差异。由此证明该菌株确实是参与青砖茶渥堆发酵过程的重要菌株,并可以利用于未来青砖茶自动化发酵过程。     

茶树花多糖的修正系数蒽酮-硫酸检测新方法研究

建立一种茶树花多糖含量的修正系数蒽酮-硫酸检测方法。根据质量守恒定律,在普通蒽酮-硫酸检测多糖方法基础上,通过联用离子色谱检测技术,构建蒽酮-硫酸检测新方法的修正系数（f）,实现茶树花多糖检测技术的快捷、准确和客观。研究表明,以半乳糖为标准对照品时修正系数f_半乳糖=2.84,以葡萄糖为标准对照品时修正系数f_葡萄糖=4.49。该方法稳定性好（RSD_葡萄糖=1.7%,RSD_半乳糖=1.0%）、精密度高（RSD_葡萄糖=1.4%,RSD_半乳糖=2.0%）、重复性强（RSD_葡萄糖=3.2%,RSD_半乳糖=2.5%）及加标回收率佳（回收率_葡萄糖=91.3%~104.1%,回收率_半乳糖=95.9%~104.4%）。用新方法测得3产地茶树花多糖含量分别为10.30%、10.07%及9.99%,高于常规蒽酮-硫酸法检测茶树花多糖值。茶树花多糖中单糖组分分析表明,以半乳糖为标准对照品检测茶树花多糖较好。     

几种茶多糖降血糖活性的研究

研究和对比白茶多糖（White tea polysaccharide,WTP）、绿茶多糖（Green tea polysaccharide,GTP）和红茶多糖（Black tea polysaccharide,BTP）的成分、降血糖效果及机理。分别选取寿眉、龙井、白琳工夫作为白茶、绿茶和红茶的代表,测定分析茶多糖提取物的成分和分子量。以链脲佐菌素诱导小鼠糖尿病模型,二甲双胍作为阳性对照,研究茶多糖降血糖效果,qPCR测定小鼠肝脏中相关基因表达水平。结果表明,所选白茶、绿茶和红茶多糖的绝对重均分子量分别为18 180、19 470、8 745 Da。所选茶多糖提取物均具有降血糖功效,白茶、绿茶和红茶多糖干预组小鼠的血糖下降率分别为53.2%、52.8%及61.6%。茶多糖均可改善小鼠葡萄糖耐量,调节糖代谢相关基因表达,并且存在一定差异。     

云南晒青绿毛茶的微生物固态发酵及成分变化研究

研究了添加外源优势菌种固态发酵云南晒青绿茶过程中主要成分的变化规律。结果表明,随着发酵时间的延长,主要的化学品质成分含量均发生了明显变化,以多酚类、儿茶素、茶红素、茶褐素、寡糖和多糖的变化最明显。发酵40天后,多酚类物质下降了约60%,儿茶素类下降了80%,黄酮类下降了55%,茶红素下降了90%,水溶性寡糖下降了65%,水浸出物下降了25%,而茶黄素、水溶性总糖和灰分的变化不大。但茶褐素类物质增加了4.5倍,水溶性多糖也增加了5.7倍。这说明多酚类物质、儿茶素、茶红素、茶褐素类、寡糖及多糖类物质可作为云南普洱茶的特征成分用于品质判定。实验结果还表明,利用优势菌种发酵晒青绿茶可以在短时间内生产熟普洱茶,其理化成分含量可达到陈年普洱茶的水平。实验结果同时还表明,离开了微生物和湿热作用,晒青绿茶是难以形成普洱茶特有品质风格的。