美新型流感检测器可快速确定病毒毒株

据《新华网》5月30日报道，美国研究人员新研制出一种流感病毒检测仪器，可快速检测出多达92种不同的流感病毒毒株，其中包括H5N1型禽流感病毒的几种不同毒株。该仪器仅需4小时就可鉴定出流感病毒的具体毒株，准确率高达97％。     

应用新城疫病毒强弱毒株RT-PCR鉴别诊断技术检测多种禽类副黏病毒

应用已建立的新城疫病毒(NDV)强、弱毒株RT-PCR快速鉴别诊断技术，对来自广西各地疑为禽副黏病毒血清1型(APMV-1)感染的144份不同禽类的病料进行了检测，并用常规方法对RT-PCR检测为阳性的部分病料进行了病毒的分离和鉴定。结果，从鸡、鸽、鹅、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、孔雀、鸵鸟和画眉鸟9种禽的病料样品中检测到A19MV-1，阳性检出率为64．58％(93／144)；从7种禽病料中分离到29株APMV-1地方野毒株。部分分离株用NDV强、弱毒株快速鉴别技术鉴定属中、强毒株。     

2新出现的猪流感病毒株携带有禽流感基因

研究人员最近发现了一种新的猪流感病毒毒株-H2N3亚型流感病毒,该毒株属于H2亚型流感病毒。H2亚型流感病毒最近一次引起人流感犬爆发是在1957年。这一新毒株已发生了分子变异,它由禽流感和猪流感两种病毒的基因共同组成。     

猪流感的危害及防治措施

2009年发生于北美,流行于世界的流感疫情为A型流感病毒,H1N1亚型猪流感病毒毒株。该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片断,是一种可以人传染人的新型猪流感病毒,这种新型病毒由猪流感病毒演变而成。     

鉴别H7N9流感病毒强毒和弱毒实时荧光RT-PCR方法的建立

为建立可以区分H7N9流感病毒强毒株和弱毒株的方法,通过比对Gen Bank和GISAID中H7N9流感病毒的HA基因序列以及本实验室保存的病毒序列,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H7N9流感病毒强弱毒株的实时荧光RT-PCR方法,同时对该方法的反应体系和反应参数进行优化,并开展特异性和敏感性试验以及临床应用试验。特异性试验显示,该方法具有良好的特异性,对其他常见亚型的禽流感病毒和其他禽病病毒检测均为阴性。敏感性试验显示,该方法对H7N9流感强毒和弱毒HA基因的检测下限分别为0.004 fg和0.1 fg RNA模板,高于两种商品化试剂盒的灵敏度。利用该方法对40株经实验室分离鉴定的H7N9流感病毒进行对比验证,发现检出率和符合率均为100%。结果表明,该方法具有特异、敏感、准确的优点,可用于H7N9流感病毒的快速检测,同时还可区分强弱毒株,对H7N9流感病毒,尤其是高致病性流感病毒的早期诊断和有效防控具有重要意义。     

应用RT—PCR方法检测鸭病毒性肝炎新型和I型病毒

鸭病毒性肝炎病毒是危害养鸭业的重要病毒性传染病,主要感染低日龄雏鸭,临床上分离到的病原主要为鸭病毒性肝炎I型病毒和鸭病毒性肝炎新型病毒,为了加快本病的检测速度,尽快确诊病原,根据GeneBank上两种毒株的基因组序列,选择两种毒株的差异基因序列分别设计了一对特异性的检测引物,将两对引物放在一个PCR反应体系中,两种毒株分别进行特异性扩增,根据扩增片段的大小进行鉴别,建立了可以同时检测鸭病毒性肝炎病毒I型和新型毒株的复合RT—PCR方法,该检测方法快速,特异性强,灵敏性高,可以用于鸭病毒性肝炎病毒的分型鉴别检测。     

浅谈如何做好禽流感的检测工作

已知的流感病毒分A、B、C3个血清型.A型的为人畜(禽)共患,B、C型仅对人致病.禽流感则是由A型禽流感病毒引起的传染病,又称真性鸡瘟(欧洲鸡瘟).按流感病毒的致病性不同分为3类:高致病性毒株如H5N1、中弱毒株如H9N2和无毒株.虽然禽流感病毒血清型很多,分离毒株上千株,但有致病性的毒株占极少数,大多数为无毒株,只有高致病性禽流感病毒才对养禽业造成毁灭性的损失.     

传染性法氏囊病病毒检测系统的建立

为了建立传染性法氏囊病病毒(IBDV)检测系统,本试验在同一个试验技术平台上对9种IBDV检测方法进行了比较分析.IBDV野毒株盲传4～5代可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞,死亡胚体水肿、出血,病变细胞圆缩、脱落.4个血清Ⅰ型1BDV毒株,用交叉中和试验可进一步分为3个血清亚型.用RT-PCR/SSCP技术分析4个毒株,扩增产物的电泳迁移率有差异.AGP、间接ELISA、夹心抑制ELISA以及中和试验等4种方法同时检测不同来源血清样品中的IBDV抗体,其他3种方法比AGP具有更高的敏感性,敏感度相差104倍.用AGP检测法氏囊组织样品,抗原效价可达到1:10,而细胞培养物和病鸡粪便则没有出现沉淀线;3种样品用夹心ELISA、RT-PCR、cDNA探针斑点杂交、RT-PCR/SSCP检测以及病毒分离等5种方法检测,均为阳性.     

禽流感病毒的研究进展

禽流感是由正粘病毒科、流感病毒属Ａ型流感病毒（ＡＩＶ）引起的禽类疾病综合征。该病毒广泛存在于多种家禽和野生禽类中，由于ＡＩＶ抗原性和致病力的易变性及各血清型毒株间缺乏交叉保护性，所以，ＡＩ已成为我国养禽业面临的重要问题，并在养鸡业中造成了很大的经济损失［１～８］。近年来，我国在其分子生物学研究方面开展了卓有成效的工作。本文对该病毒的研究现状作综述如下。１ＡＩＶ毒株的分离与分型１．１ＡＩＶ毒株分离　　世界各地都有特定的毒株引起ＡＩ的暴发和流行，引起禽的大量死亡和生产性能的急剧下降［１］。１９７８年…     

一步法RT-PCR快速检测鸡新城疫病毒强毒株

本文参照NDV融合蛋白(F)基因序列设计引物，通过一步法RT-PCR扩增到NDV强毒株的170bp大小的特异条带。试验中未检出NDV弱毒株、IBV、AIV、IBDV的RNA，能够检出NDV尿囊液毒的最低滴度为10^-5稀释度(相当于10^3.7EID50病毒量)。对山东省不同地区于1997至2003年所分离的21个NDV强毒株检测全为阳性，而6个NDV弱毒株全为阴性。整个实验操作从病毒核酸提取到判定结果，在5h内即可完成。实验结果表明，该方法特异、敏感，适用于NDV强毒感染鸡群的快速检测。     

“基因芯片”速测禽流感

美国研究人员研发出了一种“基因芯片”，以流感病毒基因为模板，可快速检测各种流感病毒，其中包括H5N型高致病性禽流感病毒。     

PEDV经典毒株与变异毒株套式RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

我国当前猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株与经典毒株相比,在S基因上存在多处变异,其中在58aa处有4个氨基酸QGVN的插入。为快速鉴别经典毒株与变异毒株,本试验根据Gen Bank中当前流行毒株S基因序列设计合成2对特异性扩增引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立一套区分PEDV变异毒株与经典毒株的套式RT-PCR检测方法,并完成特异性、敏感性试验及对临床送检样品检测试验。结果表明:该套式PCR检测方法可以分别鉴定PEDV经典毒株和变异毒株,PEDV经典毒株仅在PCR外套产物有749 bp的条带,内套产物没有条带;而PEDV变异毒株在PCR外套产物中有760 bp的条带,而在内套产物中出现510 bp的条带。该检测方法特异性强、灵敏度高、操作简单,为猪流行性腹泻的快速诊断提供了一种较为方便的技术手段。     

美研制出对付多种禽流感病毒的“DNA疫苗”

新华网7月1日消息一种流感疫苗通常只对某一特定的流感病毒毒株发挥免疫效应,但美国研究人员开发出的新型“DNA疫苗”成功地使实验动物同时对多种禽流感病毒毒株产生免疫反应。     

猪流行性腹泻病毒变异毒株一步法RT-PCR鉴别检测方法的建立及临床应用

为了建立一种快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株的病原学方法和掌握洛阳市PEDV变异毒株的流行规律,试验根据GenBank中PEDV变异毒株的特异性序列设计引物,通过优化退火温度、模板添加量、引物添加量建立PEDV变异毒株一步法RT-PCR鉴别检测方法,并分析了该方法的特异性、敏感性和重复性;同时应用该方法检测采集自洛阳市的251份临床样品,并对不同地区、不同年份、不同养殖模式的检测结果进行比较分析。结果表明：优化后的退火温度为51℃,模板添加量为5μL,引物添加量为0.5μL;该方法对PEDV变异毒株能够扩增出550 bp特异性条带,而检测的PEDV经典毒株、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)均为阴性;对PEDV变异毒株RNA的最低检测限达到0.74 ng,对3份PEDV变异毒株阳性病料和3份PEDV变异毒株阴性病料重复检测3次的结果完全一致;检测采集于洛阳市251份临床样品的平均阳性率为29.48%,其中不同地区阳性率...     

美研制出对付多种禽流感病毒的“DNA疫苗”

新华网华盛顿7月1日电（记者张忠霞）一种流感疫苗通常只对某一特定的流感病毒毒株发挥免疫效应,但美国研究人员开发出的新型“DNA疫苗”成功地使实验动物同时对多种禽流感病毒毒株产生免疫反应。     

PCR技术检测猪伪狂犬病毒及其潜伏感染部位的研究

本研究合成了伪狂犬毒糖蛋白ｇｐ５０基因引笺，该引物能够扩增糖蛋白ｇｐ５０基因中４３４－６５１之间的２１７ｂｐＤＮＡ片段，该片段含 ＳａｌＩ酶切位点，应用引物对几种不同的伪狂犬病毒株多聚酶链式反应扩增结果全为阳性。     

猪流行性感冒(Swine Influenza,SI)

<正>2009年3月底至4月中旬,墨西哥、美国等地接连暴发甲型H1N1流感(或称H1N1亚型猪流感),此病毒为甲型H1N1流感病毒,携带有H1N1亚型猪流感病毒毒株,包含有禽流感、猪流感和人流感3种流感病毒的DNA基因片断,同时拥有亚     

广西本地土鸡两种不同禽流感疫苗免疫效果初探

禽流感（Avian influenza,AI）是由A型流感病毒（Avian influenzavirus,AIV）引起的严重危害养禽业的一种烈性传染病。禽流感病毒属正粘病毒科流感病毒属,病毒基因组为分节段的单股负链RNA,包含8个基因。AIV变异频繁,血清亚型众多,根据表面结构蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性不同,分为不同血清亚型。H9N2亚型为中低致病力毒株,其特点是分布广泛,能造成宿主的免疫抑制,并且可与其它病原微生物通过协同作用引起禽类发病。H9N2虽然为中低致病力毒株,但它对养禽业的危害同样不容忽视。     

牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法。通过对该方法的特异性、敏感性和重复性进行试验,结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出471 bp的特异性片段,而对猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒、MDBK正常细胞的扩增结果均为阴性。经对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达10^-1 TCID₅₀/mL。应用该方法对临床腹泻病牛各脏器样品进行检测,结果比病毒分离方法更为敏感,操作简便。表明建立的RT-PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的临床检测及流行病学监测。     

猪繁殖与呼吸综合征3种毒株多重PCR检测方法的建立

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列设计2对特异性引物,第1对通用引物扩增美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因(466bp/376bp),第2对引物特异性扩增欧洲型毒株ORF7基因(580bp)。反应条件优化后,建立了能够同时检测美洲型经典毒株、美洲型变异毒株和欧洲型毒株的多重PCR检测方法。该方法可以特异性扩增3种毒株的基因,目的基因片段大小差异在90bp以上便于电泳观察,重组质粒标准品检测下限为1.93×103拷贝。应用该方法检测183份临床疑似病例,结果 PRRSV阳性35份,其中美洲型经典株2份,美洲型变异株31份,欧洲型毒株3份,美洲型变异株和欧洲型毒株混合感染1份。表明建立的多重PCR检测方法具有快速、准确、敏感等优点,对PRRSV 3种毒株的快速诊断有十分重要的意义。