生物制品厂内用屏障系统饲养SPF鸡

ＳＰＦ即ｓｐｅｃｉｆｉｃｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｅｅ的缩写，意即：无特定病原体。ＳＰＦ鸡即无特定病原及相应抗体的具有一定生产能力和遗传繁殖结构的鸡群。饲养ＳＰＦ鸡的关键在于微生物的控制。用隔离器系统饲养ＳＰＦ鸡相对来说比屏障系统饲养微生物容易控制一些。但...     

禽用SPF疫苗的特点及其应用

疫苗接种是防制家禽传染病的主要手段之一。目前我国禽用疫苗大部分是用普通鸡胚或清洁鸡胚制造的,尽管这种普通疫苗对家禽疫病的防制起到一定作用,但仍然存在许多不足之处,而ＳＰＦ疫苗正好弥补了普通疫苗的缺陷,对控制和消灭某些传染病具有积极意义。１ＳＰＦ鸡群的要求１．１ＳＰＦ是ＳｐｅｃｉｆｉｃＰａｔｈｏｇｅｎＦｒｅｅ（无特定病原体）的缩写,是指一个畜、禽群中不患有某些指定的特定病原微生物和寄生虫病,家畜和家禽呈明显的健康状态。ＳＰＦ疫苗是利用ＳＰＦ种鸡所产种蛋通过一系列生物技术制成的禽用生物制品。１．２ＳＰＦ鸡…     

SPF猪及其展望

ＳＰＦ猪及其展望王秀利北京农业大学动物科技学院（１０００９４）一、ＳＰＦ猪的含义及其生产的意义ＳＰＦ猪（ＳｐｅｃｉｆｉｃＰａｔｈｏｇｅｎＦｒｅｅＰｉｇｓ）为无特定病原猪的简称，在丹麦一般是指无猪喘气病、胸膜肺炎。萎缩性鼻炎、猪痢疾、伪狂犬病、疥癣和虱...     

山东省禽病诊断与免疫重点实验室

山东省禽病诊断与免疫重点实验室由山东省农业科学院家禽科学研究所承担并向社会开放 ,该实验室有一批禽病理论和社会实践专家。以家禽病原学与流行病学调查、家禽主要传染病的诊断与免疫预防、无特定病原（ＳＰＦ）鸡群病原监测标准化和禽用生物制品的开发应用为研究方向 ,已取得“无特定病原（ＳＰＦ）鸡群建立与维持的研究”、“ＳＰＦ鸡新城疫油乳剂灭活苗应用技术”、“ＩＬＴＶ分离鉴定及其分子生物学诊断技术研究”、“ＳＰＦ鸡新城疫油乳剂灭活疫苗研究”、“ＮＤ -ＩＢ -ＥＤＳ三联油乳剂灭活疫苗研究”、“鸡传染性脑脊髓炎诊断与…     

无特定病原猪场综合防制措施的体会

无特定病原 (ＳｐｅｃｉｆｉｃＰａｔｈｏｇｅｎＦｒｅｅ ,简称ＳＰＦ)是指一个畜群中不患有某些指定的特定病原微生物和寄生虫病 ,家畜和家禽呈明显的健康状态。自 2 0世纪 5 0年代美国兽医提出应用ＳＰＦ猪以建立无特定病原猪群后 ,发现可广泛应用于养猪生产和猪病研究工作。目前 ,一般认为 ,在猪群中不存在有气喘病、传染性萎缩性鼻炎、猪痢疾、猪丹毒和猪弓形体病等传染性疾病 ,即认为成功地建成了无特定病原的猪群。苏州市太湖猪育种中心实验猪场抓住 1995年猪场搬迁机遇 ,通过无菌剖腹取胎和人工哺乳等方法成功地育成ＳＰＦ猪群。建立…     

无特定病原（SPF）猪群体安全控制

无特定病原（ＳＰＦ）猪群体安全控制李明侯书江何成柱刘志南（北京市ＳＰＦ猪育种管理中心，海淀１０００９５）我国是养猪生产大国，养猪数量居世界前列。但因来自多方面的困扰，养猪业经济效益不高，波动较大。制约养猪生产的因素很多，其中猪病是诸多因素中较为严重的...     

利用胚胎移植技术建立SPF小鼠群

无特异病原体（ＳｐｅｃｉｆｉｃＰａｔｈｏｇｅｎＦｒｅｅ，ＳＰＦ）动物指体内外无特定微生物和寄生虫的动物，因为它排除了实验动物本身的传染病原及寄生虫，实验结果准确、可靠，在生物医学各个领域研究中得到广泛的应用，是现代实验动物科学的标志。通过剖腹产或药物净化可获得ＳＰＦ小鼠，但这两种方法有很多缺陷：剖腹产准确手术时间难以掌握，而且所得到的乳鼠要经代乳饲喂，成活率低，一些病毒（如淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒）可通过胎盘传给仔鼠，达不到净化效果。药物净化法一般很难达到ＳＰＦ级。本研究建立了一种通过胚胎移植技术获得ＳＰＦ小鼠的方法。具体是在无菌条件下，将普通级Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ近交系小鼠胚胎冲取出来，移植给ＳＰＦ级ＮＩＨ封闭群雌鼠，这样ＳＰＦ级受体鼠ＮＩＨ可出生ＳＰＦ级Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ仔鼠，通过这一方法可将普通级Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠直接净化达到ＳＰＦ级。在无菌条件获得普通级近交系Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠胚胎７５枚，分别移植给同期假孕ＳＰＦ级ＮＩＨ小鼠，共生产２８只Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，胚胎移植成活率３７．３％。乳鼠在隔离器内饲养，后经微生物及遗传检测，普通级Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠经胚胎移植后达到ＳＰＦ级。     

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒犊睾细胞苗的初步试验

现在国内外只有少数几家兽医生物药品厂采用ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞 (ＳＰＦ＿ＣＥＦ)来生产鸡马立克氏病疫苗。目前国内只有几家ＳＰＦ种蛋鸡群 ,而ＳＰＦ种蛋数量少 ,成本高 ,满足不了广大兽医生物制品厂的大量需求 ,所以大多数兽医生物制品厂都采用普通的鸡胚成纤维细胞 (ｃｏｍｍｏｎ＿ＣＥＦ)来生产疫苗 ,而普通种蛋常受禽源致病微生物的污染 ,使其疫苗质量不高 ,免疫效果不好 ,给养鸡业带来很大的经济损失。犊牛睾丸细胞已用来生产猪瘟、狂犬病等家畜疫苗 ,此种细胞来源广泛 ,生产性能良好 ,且不受禽源致病微生物的污染 ,能否替代ＳＰＦ…     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的表达

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒），对病毒进行纯化，抽提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆入ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株Ｆｃ基因克隆ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ双酶切法、ＰｓｔⅠ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，获得重组子ｐＢＶＬａＦｃ。ＰＣＲ和内切酶酶切法鉴定表明，Ｆｃ插入的位置和方向都正确无误。用Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α通过热诱导法进行了表达。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法检测了表达产物。结果表明，有１条能够与ＮＤＶ多抗反应的特异条带，分子量约１５７００，与预期大小一致，说明是Ｆｃ基因的表达产物     

不同开产日龄对SPF鸡产蛋性能影响的观察

ＳＰＦ鸡蛋按个销售，而不按斤销售。为了增加鸡蛋的个数，究竟什么时候开产最好？本文通过对ＳＰＦ鸡场最初的３批鸡的产蛋性能进行比较，并参考美国ＳＰＡＦＡＳ公司Ｍ１３８Ｄ鸡舍的有关数据，加以探讨，以期对同行有所帮助。１　方法南京药械厂鸡场共有３栋完全一样的鸡舍，分别饲养不同日龄的鸡群，出雏时间分别是１９９７年５月２３日、８月２８日、１１月２０日，鸡群分别编号为Ｃ１、Ａ２、Ｂ３。由于Ｃ４鸡群的出雏时间是１９９８年７月９日，因此我们只能提供３批鸡群的产蛋数据。鸡场是１９９６年新建的，到目前为止仅饲养了４批…     

鸡马立克氏病Ⅰ型弱毒株的选育

本研究利用从国外引进的鸡马立克氏病Ⅰ型弱毒疫苗株，采取回归无特定病原（ＳＰＦ）雏鸡和在细胞培养物上交替接种的方法，连续传代５次后，进行免疫效力试验的结果表明，本研究选育的ＭＤＶ－Ｇ１毒株含１０，０００和２，０００独斑形成单位（ＰＦＵ）／只鸡剂量试验组对ＭＤ的保护率均达１００％；未经选育的进口ＭＤＩ型弱毒商品疫苗２，０００ＰＦＵ／只鸡剂量试验组，对ＭＤ的保护率为８６．７％；而常规使用的ＨＶＴ商品疫苗     

鸡马立克氏病Z4＋Fc126双价活疫苗配比试验

本研究用不同剂量的Ｚ４和Ｆｃ１２６配制成鸡马立克氏病双价活疫苗做配比试验。２个试验８种配比的Ｚ４和Ｆｃ１２６双介活疫苗免疫易感鸡，攻毒保护试验结果表明，Ｚ４无论与Ｆｃ１２６细胞结合毒还是与Ｆｃ１２６冻干毒配成双价活疫苗，均能给免疫鸡群提供坚强的免疫保护力，Ｚ４与Ｆｃ１２６间存在很强的免疫协同作用，即使Ｚ４剂量小至仅占疫苗病毒ＰＦＵ总数的１０％，这种协同作用仍能使免疫鸡群产生较强的免疫保护力。     

卵泡抑素的生物学作用及其机制的研究

卵泡抑素又名ＦＳＨ抑制蛋白（ＦＳＨ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＦＳＰ）,是一种单链糖蛋白,有多种形式。作为Ａｃｔｉｖｉｎ的结合蛋白,它可以通过Ａｃｔｉｖｉｎ／ＦＳＰ系统来调节动物的生殖活动。近年来的实验表明,ＦＳＰ可以通过其作用系统,在生殖系统以外的器官例如肝、肾、胰、骨骼、皮肤等器官和组织中起作用。ＦＳＰ在细胞表面有肝素结合区,这有利于发挥其生物学作用。ＦＳＰ更可能是通过旁分泌或自     

NDV融合蛋白裂解位点基因的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建…

将新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株和ＬａＳｏｔａＥ４株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因从本实验室构建的重组质粒ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ中用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ切出。将这２个毒株的Ｆｃ基因定向克隆入昆杆状病毒表达载体ｐＳＸＩＶＶＩＸ３的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ位点之间，获得２个毒株的Ｆｃ基因克隆ｐＸ３Ｆ４６Ｆｃ和ｐＸ３ＬａＦｃ。重组质粒用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌＩ，ＰｓｔＩ酶切法，ＰＣＲ和核酸探针法进行     

一次试验中出现的问题及对特异性PCR反应条件的探讨(简报)

本试验根据Ｌａｍｂ等［１］报道的鸡生长激素基因序列，设计合成２对特异性引物ＰＭ３和ＰＭＰＳ１，它们的碱基序列分别是ＰＭ３ＦＯＲ５′－ａｔｃｃｃｃａｇｇｃａａａｃａｔｃｃｔｃ－３′ＲＥＶ５′－ｃｃｔｃｇａｃａｔｃｃａｇｃｔｃａｃａｔ－３′ＰＭＰＳ１ＦＯＲ５′－ｃｔａａａｇｇａｃｃｔｇｇａａｇａａｇｇｇ－３′ＲＥＶ５′－ａａｃｔｔｇｔｃｇｔａｇｇｔｇｇｇｔｃｔｇ－３′。通过ＰＣＲ反应从鸡基因组中扩增出含有ＧＨ基因内含子１和４的片段，再用ＭＳＰ１内切酶对产物做ＲＦＬＰｓ分析。由于特异性ＰＣＲ的条件要…     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的…

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒）、对病毒进行纯一提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆人ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／Ｓａｌ Ｉ双酶切法、ＰｓｔＩ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，ａｑｔ     

光生物素标记DNA探针检测传染性喉气管炎病毒感染

用光生物素标记４．３ｋｂ的传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）ＤＮＡ片段作为探针，检测５只人工接种ＩＬＴＶ的ＳＰＦ鸡在不同时期采集的喉拭子样品或血清，并检测采自自然发病鸡群的喉试子样品。结果表明，用核酸探针点杂交方法在人工感染鸡喉气管中检出ＩＬＴＶ的时间为接种后６～１０天；该法敏感，特异，对诊断ＩＬＴＶ感染有实用价值，特别适用于进出口检疫和ＳＰＦ鸡群的监测。     

禽脑脊髓炎油乳剂灭活苗的田间免疫试验

以禽脑脊髓炎（ＡＥ）ＶＲ株病毒接种ＳＰＦ鸡胚，取发病胚病料经福尔马林灭活制成油乳剂灭活苗，用实验室制品４批，分别在济宁、章丘、茌平、禹城四个种鸡场共３７３００只种鸡进行田间免疫试验。结果表明，疫苗对鸡群无不良反应，鸡群于免疫后３周ＡＧＰ检出率１００％，鸡群开产后产蛋性能良好，产蛋量与蛋壳质量正常，免疫鸡的后代均被有效保护不发生ＡＥ。     

NDV融合蛋白裂解位点基因的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建与鉴定

将新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株和ＬａＳｏｔａＥ４株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因从本实验室构建的重组质粒ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ中用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ切出。将这２个毒株的Ｆｃ基因定向克隆入昆虫杆状病毒表达载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株的Ｆｃ基因克隆ｐＸ３Ｆ４６Ｆｃ和ｐＸ３ＬａＦｃ。重组质粒用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ酶切法、ＰＣＲ和核酸探针法进行了鉴定，证明插入的基因来自ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵ－ＣＬａＦｃ，插入的位置和方向都正确。这２个载体的构建为Ｆｃ基因在昆虫细胞系统的表达创造了条件。     

ELISA检测鸡传染性贫血病病毒抗体中的非特异性反应问题

为了监测ＣＳＩＲＯＳＰＦ鸡群，经常用商业ＥＬＩＳＡ试剂盒检测鸡群的抗鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）抗体。近来发现个别鸡群的阳性率达１８．２％，占总数的２．７％。但后来采血发现大部分可疑鸡都为阴性，可见前面的结果存在假阳性。