四川地区猪场中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型与耐药性分析

为研究四川猪场分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药现状及其SCCmec基因型情况,讨论猪源MRSA对公共卫生带来的隐患。于2013年3-12月在四川地区12个规模化猪场采集的120份样品中分离金黄色葡萄球菌(SA),对PCR初步鉴定出SA,再鉴定mec A、fem A耐药基因,阳性菌株判定为MRSA。对鉴定出的猪源MRSA进行SCCmec分型与耐药性试验及分析。共分离出60株金黄色葡萄球菌,其中22株MRSA,检出率18.3%(22/120),饲养员手棉拭子、猪鼻捻子、猪场水样中均分离出MRSA。药敏试验结果表明,22株MRSA菌株的多重耐药性明显,耐药性主要表现为4、6耐,其中SCCmecⅣa型17株、SCCmecⅠ型5株。目前四川地区猪源MRSA不仅对猪场人员存在感染隐患,同时也对公共卫生安全存在一定的威胁。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a蛋白转肽酶区的原核表达及鉴定

本研究对编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）非青霉素结合蛋白2a（PBP2a）的转肽酶区（TPase）原核表达并进行Western blot鉴定。首先通过PCR方法由MRSA基因组中扩增转肽酶区基因片段,并构建pGEX-6p-1-TPase重组质粒,转化BL-21,诱导目的蛋白表达,然后进行Western blot鉴定。结果表明,成功构建出pGEX-6p-1-TPase原核表达载体,并成功表达出PBP2a的转肽酶区蛋白（TPase）,为其进一步的研究和应用奠定了基础。     

MRSA-PBP2a转肽酶区的原核表达及鉴定

为了对编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的转肽酶区(TPase)原核表达并进行Western blot鉴定。通过PCR方法由MRSA基因组中扩增转肽酶区基因片段,并构建pGEX-6p-1-TPase重组质粒,经酶切鉴定、测序正确后,转化BL-21,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行Western blot鉴定。结果表明,构建的pGEX-6p-1-TPase原核表达载体可表达PBP2a的转肽酶区蛋白,为其进一步的研究和应用奠定了基础。     

鸡源沙门氏菌多重耐药和Ⅰ型整合子的流行调查

为了研究沙门氏菌多重耐药性与Ⅰ型整合子的流行情况,本研究从山东省鸡场分离沙门氏菌,根据Kauffmann-White方法测定其血清型,采用微量稀释法测定了沙门氏菌对19种常用抗菌药物的MIC值,并且采用PCR技术测定了Ⅰ型整合子及其携带的耐药基因盒。结果显示：本次分离得到311株沙门氏菌,包括印地安纳沙门氏菌（133株）和肠炎沙门氏菌（178株）2种血清型;药物敏感性试验表明：分离菌株对磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、萘啶酸、氨苄西林、四环素、多西环素和甲氧苄啶普遍耐药,菌株多重耐药率为91.0 %(283/311),99%的分离株对阿米卡星、多黏菌素敏感;PCR测定Ⅰ型整合子结果：Ⅰ型整合子的检出率为65.0%(202/311),其中多重耐药表型菌株Ⅰ型整合子阳性率为92.6%,202株整合子阳性菌株中有6株的携带基因盒dfr17-aadA5。上述结果表明,Ⅰ型整合子普遍存在于沙门氏菌中,并且与沙门氏菌的多重耐药性密切相关。     

新疆牛羊源耐药大肠杆菌β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因检测

摘要：【目的】了解新疆某羊场、牛场耐药大肠杆菌携带 β-内酰胺酶和/或 16S rRNA 甲基化酶基因及其共存情况。【方法】通过 PCR 方法对 168 株羊源和32株牛源耐β-内酰胺类药物大肠杆菌进行 β-内酰胺酶及 16S rRNA 甲基化酶基因检测,并对检出基因的 PCR 产物测序。【结果】检测结果为：羊源大肠杆菌携带的 -内酰胺酶基因为blaTEM（42.26%,71/168）和blaCTX-M（2.98%,5/168）;牛源大肠杆菌携带的-内酰胺酶基因为blaTEM（15.63%,5/32）基因,未检出blaCTX-M;两个养殖场均未检出其他被检基因。羊源、牛源大肠杆菌携带的16S rRNA甲基化酶基因为rmtB基因,其检出率分别为4.17%（7/168）和50.00%（16/32）,均未检出armA基因。基因共存情况：3（1.79%）株羊源菌同时携带blaTEM和blaCTX-M基因,7（4.17%）株羊源菌同时携带blaTEM 和rmtB 基因;2（6.25% ）株牛源菌同时携带blaTEM 和rmtB基因。【结论】羊源和牛源分离的大肠杆菌中存在-内酰胺酶和16S rRNA甲基化酶基因介导的细菌耐药,均以blaTEM和rmtB基因为主。此外,存在不同类型耐药基因共存于同一株耐药菌的现象。     

山东地区乳房炎和非乳房炎牛奶中金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药分析

为了解山东地区不同类型牛奶中金黄色葡萄球菌流行情况和耐药特征,对37个牧场的乳房炎和非乳房炎奶样进行细菌分离鉴定及MIC测定试验。采用常规方法与PCR技术进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,微量肉汤稀释法进行MIC测定,卡方检验进行数据差异显著性分析。①共分离到150株金黄色葡萄球菌,检出率为11.26%(150/1332),且乳房炎奶样显著高于非乳房炎(P=0.009);②12种药物的MIC与EUCAST分布趋势大致相同;③分离菌株对青霉素(91.38%)耐药最严重,且乳房炎/非乳房炎奶样差异显著(P=0.047);④116株分离菌株中多重耐药(≥3)菌株为34(29.31%)株,乳房炎/非乳房炎奶样差异不显著(P=0.611);⑤威海对6种药物的耐药率在60%以上,其他地区仅对1~2种药物的耐药率在50%以上。乳房炎奶样的金黄色葡萄球菌检出率显著高于非乳房炎;分离菌株对青霉素严重耐药且乳房炎奶样多重耐药问题突出;不同地区均呈现不同程度的耐药。     

转基因耐除草剂大豆ZH10-6实时荧光定量PCR检测方法的建立

转基因耐除草剂大豆ZH10-6是含有G2-EPSPS基因和GAT基因耐除草剂大豆新品系,对广谱型除草剂草甘膦具有耐受性,在中国具有重要产业化应用前景。本研究以其转化体特异性序列为靶标,建立了基于Taqman水解探针的实时荧光定量PCR检测方法。该方法能特异、定量检测出转基因耐除草剂大豆ZH10-6转化体成分,线性度大于0.995,RSD为0.17%～2.07%,定量限达0.16%,检测限达到0.032%。该方法为转基因耐除草剂大豆ZH10-6的精准定量检测提供了一种新的技术手段,为农业转基因监管提供技术支撑。     

市售草鱼鳃中细菌的分离鉴定及耐药性分析

对徐州市售草鱼细菌带染状况及耐药性分析,结果表明从其鳃中分离到4 株革兰氏阴性短杆菌,暂时编号为ZYF-1、ZYF-2、ZYF-3 和ZYF-4,查阅数值编码鉴定ZYF-1 菌株为志贺（Shigella sp.）,ZYF-2、ZYF-3 菌株为大肠埃希菌（Escherichia coli）,ZYF-4 菌株为泉居沙雷菌（Serratia fonticola）。药敏试验结果表明,4 株分离菌的耐药率分别为75.8%、72.4%、65.5%和82.8%,均对氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明、磺胺异恶唑和甲氧苄啶等11 种抗生素耐药。本研究显示市售草鱼存在志贺菌、大肠埃希菌带染现象,对多种抗生素耐药,这为食源性细菌鉴定及鱼病防治提供参考。     

鸡源性大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶基因型分布

摘要: 检测鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型并了解辽宁省鸡源性大肠杆菌产ESBLs基因型分布。对大连4个地区不同鸡场临床分离32株产ESBLs鸡大肠杆菌分别用TEM、OXA、CTX-M和SHV等4种通用引物进行PCR扩增确定其基因型。结果显示32株鸡大肠杆菌均检出TEM型基因、12株检出CTX-M型基因、2株检出OXA型、未检出SHV型;TEM+CTX-M双阳性检出11株、TEM+OXA双阳性检出2株。TEM基因亚型占检出比例最高（100％）。结论：目前辽宁省产ESBLs鸡大肠杆菌基因亚型以TEM为主,其次为CTX-M型,未发现SHV型;以TEM+CTX-M双阳性检出率最高（34.4％）。     

大肠杆菌生物膜毒力基因的检测

通过确定大肠杆菌形成生物膜毒力基因的分布情况,为大肠杆菌生物膜的形成机理提供理论依据。本实验利用PCR聚合酶链式反应,对25株大肠杆菌阳性菌株菌进行了相关毒力因子fimH,Kp sMTII,chuA,fliC,yja和PapC的检测筛选。其结果显示：KpsMTII在所检测25株菌中出现的频率最高,占40%;其次是fliC,占32.5%,fimH占20%,合计占52.5%;chuA占7.5%,yja和PapC均未检出。结果表明：细菌粘附结构fimH基因和fliC基因是影响大肠杆菌形成生物膜的主要粘附结构毒力基因,其次是大肠杆菌毒力因子KpsMTII基因,最后是外膜蛋白血红素chuA基因。     

中国畜禽粪尿资源及其替代化肥潜力分析

基于我国养殖业发展现状,以种植业化肥用量为参照,统计分析了包括固体和液体粪便在内的畜禽粪尿资源总量及其替代化肥潜力。结果显示；2015年我国畜禽粪尿排放总量为23.99亿t,养分总量2573.10万t,其中氮(N)、磷(P2O5)、钾(K2O)养分总量分别为1278.50万t、366.16万t、928.44万t,可替代同年种植业化肥施用总量(6022.70万t)的42.73%；我国不同地区畜禽粪尿替代化肥潜力差异较大,其中华东、东北和西南地区等地畜禽粪尿养分总量最高,达1369.52万t,占全国畜禽粪尿养分总量的67.15%,可替代全国当年化肥用总量22.74%。经过堆肥和沼液发酵处理的畜禽粪尿,养分综合损失比例为19.43%,养分理论剩余总量为2055.11万t。研究结果可为我国畜禽粪尿资源化利用及化肥减施提供数据支撑和决策支持。     

烟草青枯病和黑胫病拮抗细菌的筛选、鉴定及防效研究

筛选对烟草青枯病和黑胫病具有良好防效的生防菌株,为烟草根茎类病害的有效防控提供生防资源。从发病烟株根际土壤中分离细菌,采用平板对峙法和滤纸片法测定分离菌株对烟草青枯病菌和黑胫病菌的抑制活性,基于盆栽验证法检测高活性菌株对烟草青枯病和黑胫病的防治效果,通过16S rDNA通用引物对高活性拮抗菌株进行分子生物学鉴定,同时选用9对特异性引物对高活性菌株的促生长和抑菌活性进行PCR检测。共筛选出2株对烟草青枯病和黑胫病均有防治效果的拮抗菌株LF-1和LF-2,经分子生物学鉴定LF-1为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,LF-2为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。室内活性试验结果表明,菌株LF-1、LF-2对烟草青枯病菌抑制率分别为31.16%、56.98%,对烟草黑胫病菌抑制率分别为64.44%、72.44%;盆栽试验结果表明,菌株LF-1对烟草青枯病和黑胫病的防效分别为69.54%和65.49%,菌株LF-2对烟草青枯病和黑胫病的防效分别为72.49%和68.32%。菌株LF-1和LF-2对烟草根茎类病害具有较好的生防效果,在烟草根茎类病害防控中应用前景广阔。     

Agricultural Non-point Source Pollution in Drinking Water Conservation Area of the Hongfeng Lake in Guiyang City

On the basis of investigating rural population, land types, livestock and poultry breeding scale in drinking water conservation area of the Hongfeng Lake in Guiyang City, as well as the urban domestic pol utant discharge coefficient, livestock and poultry excretion coefficient, nitrogen fertilizer and phosphate fertilizer loss rate in the first national pollution source survey, this paper tried to explore current situation of agricultural non-point source pollution, and provide scientific support for the pollution control. The results showed that in the drinking water conservation area of the Hongfeng lake in 2013, contribution rate of pollution sources to the water pollution in the Hongfeng Lake followed the sequence "livestock and poultry breeding > rural life > farmland fertilizer". Among all agricultural non-point source pollutants, livestock and poultry breeding pollutants were major pollution sources, with a contribution rate to CODCr, TP and NH3-N in water above 50%; rural domestic pollutants were also important pollution sources, its contribution rate to CODCr and NH3-N was 43.49% and 46.69%, respectively; contribution rate of farmland fertilizer pollutants to TN and TP was 33.76% and 27.71%, respectively, higher than that of rural domestic pollutants(25.87% and 6.75%). Therefore, the control of non-point source pollution within the drinking water conservation area should be enhanced, so as to control the pollution from the source.     

义乌市畜禽养殖粪便污染风险评价

为了了解和掌握义乌市畜禽养殖业现状及其污染情况,提出相应的污染防治措施及办法,通过义乌市畜禽养殖业污染源的普查结果,根据国内畜禽粪尿产排污系数估算了义乌市2007年主要畜禽粪便排放总量及其氮、磷养分含量。结果表明,2007年义乌市主要畜禽粪便排放总量为16.6万t,尿排放总量为48.5万t,折算成总氮0.18万t,总磷348.59 t,COD 3.16万t,铜1.10万t,锌2.07万t。不同畜禽中,猪的畜禽排放量最高,占义乌市排放总量的78.3%;尿的排放总量构成中,生猪的排放量最高,占总量的99.8%。不同镇街中以义亭镇的畜禽粪便排放总量最高,占全市排放总量的39.4%。     

中国畜禽粪便磷的农田消纳量及承载负荷研究

为给农业种养结合与控制畜禽粪便污染提供科学依据,计算中国不同省（市或区）主要畜禽类型粪便产生总磷(TP)、单位面积畜禽粪便TP的容纳量以及单位面积畜禽粪便TP的承载负荷。结果表明：全国畜禽粪便TP 产生量是63.89 万t,其中生猪、奶牛、肉牛、蛋鸡和肉鸡粪便TP 分别占34.8%、13.4%、6.5%、2.5%和42.7%。总量分布山东最高,占到17.3%,其次河南,占13.2%,河北第三,占9.1%。单位面积的畜禽粪便TP容纳量北京最高,耕地面积达到29.4 kg/hm2,播种面积达到24.1 kg/hm2,低于耕地面积的承载量35 kg/hm2的安全消纳的临界点。基于欧盟标准,绝大多数省的TP 承载负荷均小于0.5,北京最高,耕地面积下的承载负荷是0.84。由此可见,中国农田消纳畜禽粪便的潜力较大,通过畜禽粪便还田利用能够有效解决粪便污染问题。     

驴肉蛋白质氨基酸组成特点及与其他畜禽肉的分析比较

采用氨基酸自动分析仪测定驴肉的氨基酸组成,比较分析了驴肉与其他畜禽肉蛋白质的营养价值与氨基酸组成特点。结果表明,驴肉蛋白质含量高,必需氨基酸丰富,其氨基酸总量为驴肉总量的23.5%,其中赖氨酸为9.0%,必需氨基酸占总氨基酸的比例高达39.4%。驴肉蛋白质的营养价值和必需氨基酸,尤其赖氨酸明显高于羊肉、猪肉、牛肉和鸡肉,能为人类提供丰富的优质动物性蛋白资源。     

一种土壤中烟草疫霉菌的快速分离鉴定及计数方法

烟草疫霉菌是一种常见的土传植物病原菌,其所导致的烟草黑胫病对烟草业造成了巨大经济损失。准确统计土壤中烟草疫霉菌的数量,有助于了解土壤中烟草疫霉菌的分布,密度以及发生动态,进而可以及时发布灾情预报,减少经济损失。本研究采用土壤稀释平板法,在选择性培养基上较好的对烟草疫霉菌进行了分离;运用微量真菌DNA提取方法成功提取了平板上菌株的DNA;采用特异引物,对提取的7个疑似菌株DNA进行PCR验证,结果有6个菌株扩增出了737bp的烟草疫霉菌特异性目的基因片段;ITS进一步验证6个菌株与已报道烟草疫霉菌相似度达99%以上;表明6个疑似菌株是烟草疫霉菌。该方法具有相对准确、低成本、简单易推广的优点。     

散尾葵提取物成分分析及抑菌作用

利用超声波提取和气质联用分析法,对散尾葵的提取物进行了组分和含量分析。结果表明,提取物含酸类化合物2种,占提取物总量的1.20%;醇类化合物3种,占提取物总含量 1.78%;酯类化合物5种,占提取物总量的7.11%;烷类化合物5种,占提取物总量的13.27%;醚类化合物2种,占提取物总含量 3.36%;酮类化合物1种,占提取物总含量 0.41% 。利用散尾葵提取物对10种居室空气中收集的细菌进行了抑菌性测定,对其中7种具有抑菌活性,而对放线菌、动性球菌、冷杆菌无抑制作用。对葡萄球菌和枯草芽孢杆菌抑菌力最强,125mg/mL浓度提取液抑菌率达到100%。     

福建省畜禽养殖业污染源的普查与分析

畜禽养殖业在迅速发展的同时,给环境带来了严重的污染问题。本文介绍了福建省畜禽养殖业污染源普查结果,分析了畜禽养殖业的现状及其带来的环境污染问题,提出了相应的畜禽养殖业污染防治措施及管理方法。     

腌蛋盐水中致腐菌的分离鉴定

咸蛋加工企业普遍面临腌蛋腐败变质问题,夏季尤为显著,本研究为了找出导致腌蛋腐败的微生物。故采用平板稀释法对腐败腌蛋盐水进行微生物分离,共获得20株耐盐菌,经过反证法将菌株反接到腌蛋盐水中进行腌蛋,以咸蛋的腐败率为指标,筛选出对腌蛋具有较强致腐率5株菌。采用菌株形态学观察、生理生化检测,结合16S rDNA及18S rDNA序列分析,鉴定其中3株属于葡萄球菌属(Staphylococcus),1株奇异变形杆菌属(Proteus),1株织球壳菌属(Plectosphaerella)。