应用PCR技术诊断初生犊牛牛白血病病毒

研究了特异的聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测１／万淋巴细胞感染牛白血病病毒（ＢＬＶ）的试验，通过检查持续淋巴细胞增多症（ＰＬ）的母牛传递病毒给犊牛的比率。评价了ＰＣＲ技术野外应用效果，检测４３头犊牛出生时和６月龄时血清中病毒抗体和淋巴细胞中病毒前ＤＮＡ，结果出生进３６头犊牛ＢＬＶ阴性，３头犊牛上述两种检测结果都呈阳性，另外的４头犊牛中２头ＢＬＶ抗体阴性，ＤＮＡ阳性，另两头结果正相反；６月龄时，出生时ＢＬ     

鸡传染性支气管炎病毒结构蛋白引起的免疫反应

用活的和灭活的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）接种鸡，以ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔ ｅｒｎ印迹（ＷＢ）试验测由单一结构蛋白Ｓ１、Ｓ２、Ｍ和Ｎ所引起的抗体反应。无论用活的或灭活的ＩＢＶ接种，４种结构蛋白均在鸡体内激发抗体反应。用活的ＩＢＶ接种后，Ｓ１、Ｓ２和Ｎ蛋白诱导相似效价的抗体，而Ｍ糖蛋白诱导的抗体滴度明显较低，Ｓ１、Ｓ２和Ｎ蛋白的ＥＬＩＳＡ抗体出现时间和形成过程相似。均在接种后２周首次检到，且和病毒中和     

牛轮状病毒重组株的血清学和基因型特性

从母牛接种过Ａ组ＢＲＶ株ＮＣＤＶ－Ｌｉｎｃｏｌｎ（Ｐ１：Ｇ６）苗的两个吡邻牛场分离到两株牛轮状病毒（ＢＲＶ），编号为ＮＳ－１和ＮＳ－２，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，ＮＳ－１和ＮＳ－２有相的的Ａ组ＲＮＡ电泳模式，而且全部基因片段同源，体外中和试验表明，ＮＳ－１株病毒能被Ｇ６特异性单克隆抗体（ＭｃＡｓ）和抗ＢＲＶＢ６４１株（Ｐ５：Ｇ６）豚鼠高免血清（ＧＰＡＳ）中和，但不被Ｇ１０特异性Ｍ     

ND和EDS－76二联灭活苗的研制及其免疫抗体消长规律的观察

应用ＮＤＬａＳｏｔａＮ７９株和ＥＤＳ－７６Ｈ９３１株，分别接种鸡胚和鸭胚增殖病毒．血凝价分别达到≥１：１２８０和≥１：１００００时，收取病毒．经福尔马林灭活．按一定比例加入吐温８０、司本８０、硬脂酸铝和白油，高速搅拌均匀，制成ＮＤ和ＥＤＳ－７６二联疫苗。该苗具有良好的免疫力，其中两种病毒无相互干扰性，接种鸡群无不良反应。疫苗置４～８℃和１５～３０℃分别保存８和６个月不破乳．不分层，颜色无变化。用联苗接种６０００余只父母代种鸡，接种后２５天．ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体可先后达到高峰，接种后９个月，鸡群ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体平均效价仍分别保持在７．０和５．６ｌｏｇ２水平上。对１６～１８周龄产蛋母鸡（皮下注射１ｍｌ／只）应用２０万羽份的联苗证明，疫苗安全．效力确实，使用方便．效益显著。     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

新城疫—传染性支气管炎—减蛋综合征三联油乳剂苗免疫对比试验

用血凝抑制试验（ＨＩ）监测自制ＮＤ－ＲＩＢ－ＥＤＳ，ＮＤ－ＫＩＢ－ＥＤＳ三联油剂灭活苗免疫鸡的抗体水平，并进行相应强毒攻击，同时以ＮＤ－ＥＤＳ二联，ＲＩＢ，ＫＩＢ等自制油苗和进口，ＮＤ－ＲＩＢ－ＥＤＳ三联油苗作对照，在此基础上，用自制三联苗免疫产物鸡４批共３８５２只，进行了田间免疫试验，结果表明：１．用各种疫苗免疫后，第２０天鸡体ＨＩ抗体达峰值，维持３个月左右，至免疫后３６０天，ＮＤ抗体仍维持在８     

鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联油乳剂灭活疫苗研制及应用

用新城疫病毒（ Ｎ Ｄ Ｖ） Ｌａ Ｓｏｔａ 株、鸡传染性支气管炎病毒 （ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｍ４ １ 株接种鸡胚, 收获含毒鸡胚尿液。用传染性法氏囊病病毒 （ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） 地方强毒 Ｈ Ｂ９ ０ ９ 株接种３０ ～４０ 日龄肉用鸡, 发病后取囊组织 （ 或收集 Ｉ Ｂ Ｄ 典型发病鸡囊组织） 制备成含毒组织悬液。将三种病毒液按一定比例混合, 制备成三联油乳剂灭活苗。三联苗免疫１８ 日～２８ 日龄雏鸡, 免疫后２１ 天攻毒测保护力, 三种传染病保护率均在９０ ％ ～１００ ％ , Ｎ Ｄ Ｈ Ｉ抗体≥１∶３２ , Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ａ Ｇ Ｐ阳性率１００ ％ , Ｉ Ｂ Ｖ Ｎ 抗体≥１∶８ , 疫苗免疫期可达４ 个月以上。疫苗在４ ℃～８ ℃保存期为１８ 个月, １０ ℃～２０ ℃保存为６ 个月, 该疫苗在全省不同地区、不同品种鸡应用１５ 万羽份, 取得理想免疫效果。     

禽用生物制品外源病原监测研究：鸡新城疫LaSota活苗中污染IBV的检测研究

使用ＳＰＦ鸡制备的抗ＮＤＶ（新城疫病毒）高免血清可中和ＮＤＶ种毒或鸡新城疫疫苗ＬａＳｏｔａ株１０~７ＥＩＤ５０／０．１ｍｌ（即１０个使用剂量），并具有高度持异性。对于ＮＤＶ疫苗实验室模拟污染ＩＢＶ传染性支气管炎病毒）研究表明，用ＮＤＶ高免血清中和ＮＤＶ疫苗１０个使用剂量后，可检测到ＩＢＶ１０~（－６）污染水平。对于某生药厂ＮＤＶＬａＳｏｔａ疫苗中疑似ＩＢＶ污染的样品进行检测，排除了ＩＢＶ污染。文章同时证明了免疫胚接种ＮＤＶＬａＳｏｔａ毒后胎儿表现出类似感染了ＩＢＶ的病变。     

用于检测猪血清中猪生殖—呼吸道综合征病毒抗体的一种…

为了提高检测猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染猪抗体的血清中和试验（ＳＮ）的敏感性，对不同条件进行了评价和改进，通过在病毒稀释液中添加２０％新鲜猪血清及使用派生于ＭＡ－１０４细胞系的一种受纳细胞克隆（ＭＡＲＣ－１４５），可自始至终获得较高的ＳＮ抗体效价，用于评估ＳＮ试验的待检血清来自两组３周龄，经鼻内感染ＰＲＲＳＶ（ＭＮ－１ｂ株）的猪。用此改良法，在接种后９～１１天首次检出ＳＮ抗体，且于接     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性喉气管炎病毒，减蛋综合症病毒等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７Ｃ孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗，进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＴＢＤＶ、ＩＬＴ     

鸡新城疫／传染性支气管炎二联油乳剂灭活疫苗试验研究报告（Ⅱ）：疫苗…

根据ＮＤＶ、ＩＢＶ二各病毒混合毒种的最适稀释比例，将混合毒种接种９－１０龄鸡胚尿囊腔内（简称同胚培养），使接种鸡胚９６ｈ二种病毒毒价同时达到高峰，０．０１ｍｌ尿囊液含：ＮＤＶ≥１０＾８ＥＩＤ５０、ＩＢＶ≥１０＾７ＥＩＤ５０。收获同胚培养的胚毒，制备同胚培养的胚毒，制备油乳剂灭活疫苗。用三批疫苗分别免疫１８日龄雏鸡，免疫后４周二联疫苗的有效抗体分别为：ＮＤ血凝抑制抗体（ＨＩ）≥１：１６、ＩＢ中和抗体     

犬瘟热疫苗弱毒的复壮与免疫试验

将一株犬瘟热疫苗株病毒通过Ｖｅｒｏ细胞２０代（ＣＤＶ／Ｒ－２０）后又通过敏感犬的腹腔巨噬细胞，获得一株免疫原性更高的弱毒株（ＣＤＶ／Ｒ－２０／８）。接种同样剂量１０４ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８和ＣＤＶ／Ｒ－２０的犬，产生出血清中和（ＳＮ）抗体价的几何平均数分别为１：５４和１：２６。前者为后者的２倍多。接种１０５ＴＣＩＤ５０的ＣＤＶ／Ｒ－２０／８能完全保护犬（１０／１０）抵抗ＣＤＶ强毒的攻击，接种１０４ＴＣＩＤ５０的保护９／１０犬，而对照犬５只全部发病，其中４只死亡。犬体内ＳＮ价可持续一年之久。冻干培养物在４和－３０℃中可分别保存９个月和１２个月而效力不减。     

犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究

用犬瘟热（ＣＤ）弱毒和自制的高免犬血清，建立了检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体的中和（ＳＮ）试验、间接荧光抗体技术（ＩＦＡＴ）和间接免疫酶染色法。这３种方法对３８份ＣＤ弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明，当被检血清稀释度为１∶１００时，ＳＮ试验、ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为２９，７和３１份，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定结果相对于ＳＮ试验结果的符合率分别为４２．１％和９４．７％。同时发现，当ＳＮ试验测定的血清效价在１∶１００以上时，ＩＦＡＴ测定结果总是在１∶２５以上，间接免疫酶染色法测定结果总是在１∶１００以上。３种方法以各自初步确定的ＣＤＶ血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率，ＳＮ试验为７６．３％，ＩＦＡＴ为７８．９％，间接免疫酶染色法为８１．６％。据此认为，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法均可部分代替ＳＮ试验用于ＣＤ疫苗免疫效果的评价、免疫犬抗体水平的监测以及ＣＤ的流行病学调查     

鸡痘疫苗与新城疫疫苗免疫接种对新城疫血凝抑制抗体干 …

试验结果证明，鸡痘（ＦＰ）弱毒疫苗对新城疫（ＮＤ）弱毒疫苗血凝抑制（ＨＩ）抗体产生有严重的干扰作用，在ＦＰ疫苗接种后１５天内再接种ＮＤ疫苗，ＦＰ疫苗以 苗的ＨＩ抗体的产竽均膛同程度的干扰作用，其ＮＤ抗体平均效价低于单独用ＮＤ疫苗组０．１５￣１．３５个滴度。对雏鸡用ＦＰ弱毒疫苗和ＮＤ弱毒疫苗同时接种，或间隔１５天后再接种ＮＤ疫苗，其ＮＤ抗体平均值与单独用ＮＤ疫苗免疫组无明显差异。本实验观察结果表明，     

几种常用鸡油乳剂灭活苗免疫抗体监测及比较

用血凝抑制试验（ＨＩ）监测鸡新城疫（ＮＤ）－减蛋综合症（ＥＤＳ）－传染性支气管炎（ＩＢ）三联、ＮＤ－ＥＤＳ二联及ＮＤ油乳剂灭活苗免疫抗体水平动态，结果表明，以上疫苗免疫鸡群后第１６天ＨＩ抗体达峰值，维持２个月，至免疫后一年ＮＤ抗体不低于８Ｌｏｇ２；ＥＤＳ不低于６Ｌｏｇ２，ＩＢ不低于８Ｌｏｇ２。经ｔ检验结果表明除ＥＤＳ有两组差异显著外，各组之间免疫后一年，ＮＤ、ＥＤＳ和ＩＢ血清抗体差异均极不显著     

热应激对鸡免疫应答的影响

用ＩＳＡ蛋雏研究２７～３８℃昼夜节律高温对新城疫（ＮＤ）疫苗和传染性法氏囊病（ＩＢＤ）疫苗活苗免疫后体液免疫反应的影响，结果表明：ＮＤ苗或ＩＢＤ苗免疫后立即产生热应激，不论ＮＤ的ＨＩ抗体水平还是ＥＬＩＳＡ抗ＩＢＤ抗体滴度在整个实验过程中均受到显著抑制（Ｐ＜０．０５）；应激后立即免疫ＮＤ疫苗或ＩＢＤ疫苗的鸡，ＨＩ抗体水平在免疫后第５和１４天和ＥＬＩＳＡ抗体滴度在免疫后第９天和１６天与对照组相比显著降低（Ｐ＜０．０５）；应激后２４小时免疫，或免疫后２４小时至若干天遭受高温应激的鸡，抗ＮＤ和ＩＢＤ抗体水平分别在免疫后第１４天和１６天均受到显著抑制（Ｐ＜０．０５）。试验组免疫器官与体重之比与对照组间无显著性差异，但免疫器官的组织学结构都有明显的坏死和萎缩性变化     

用PPA-ELISA检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ。用该法检测７５份鸡血清样品，鸡痘病毒抗体检出率（２１．３３％）高于琼脂扩散试验（１０．６７％）。经血清抗体吸收和重复性试验，证明ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法具有特异性强和重复性好特点。此外，对４种封闭液的封板结果表明：１０％犊牛血清ＰＢＳ／Ｔ效果最好，次之为０．２５％白明胶ＰＢＳ／Ｔ、０．５％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ、０．１％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ。     

猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及其用作诊断抗原的研究

对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。     

牛轮状病毒性腹泻的研究

从安徽、河南两地黄牛犊腹泻粪样中分离出了３株能在ＭＡ－１０４细胞上稳定繁殖、继代的轮状病毒（标号为ＢＲＶ００７、ＢＲＶ０１４及ＨＮ－７）。中和试验表明，该３株黄牛分离毒与北京奶牛毒ＢＲＶ６５５５及国外参考毒株ＮＣＤＶ之间抗原性无差异，同属轮状病毒血清６型（或牛轮状病毒血清１型），在亚组抗原特异性上均为第Ⅰ亚组。用ＢＲＶ０１４高代次（５０代以上）细胞培养物（ＴＣＩＤ５０＝１０－６．５）于孕母牛产前３个月和１个月经肌肉免疫注射２次，可明显提高母牛初乳中的轮状病毒抗体，在产后２０ｄ，抗体滴度仍能维持在１∶６４；临床观察，免疫母牛所产犊牛的腹泻发生率较对照组降低８３．８％。     

对新城疫病鸡的紧急接种试验

人工感染鸡新城疫（ＮＤ）病毒后，用Ⅳ系和Ｉ系弱毒疫苗大剂量注射及用抗ＮＤ病毒高免卵黄抗体加ＮＤ油佐剂灭活疫苗共同注射进行紧急接种．结果，对照组９／１０死亡；大剂量Ⅳ系苗接种组８／１０死亡；Ｉ系苗接种组７／１０死亡；高免卵黄抗体加油剂灭活苗接种组死亡１／１０．感染鸡耐过后１３天，其ＨＩ效价均大于１：８０．