玉米黄曲霉毒素污染拮抗菌的筛选·鉴定及控制效果

黄曲霉毒素是饲料等农副产品中重要的有毒有害污染物,是一类强致癌性、剧毒性真菌毒素,对畜禽健康危害巨大。该研究对黄曲霉毒素污染拮抗菌开展研究,为黄曲霉毒素污染治理提供技术支持。从河北迁安、迁西、遵化、玉田及丰南饲用玉米或饲料中分离细菌,通过室内外试验,获得对黄曲霉具有较强拮抗力的菌株B45和B6。经分子生物学及理化性质鉴定,菌株B45和B6为解淀粉芽孢杆菌。进一步开展了B45和B6对黄曲霉菌丝生长的抑制作用、黄曲霉毒素的消减作用及黄曲霉毒素的分解作用研究,结果表明,拮抗菌可以显著抑制产毒黄曲霉菌丝生长,降低黄曲霉毒素的产生及消除黄曲霉毒素。     

抑制黄曲霉毒素前体合成的芽孢杆菌鉴定及其抑制活性研究

为了开发有效提高花生等农产品抗黄曲霉毒素污染能力的生物防腐剂,对已分离获得的一株生防细菌Hitwh-B05进行16S rDNA鉴定,并研究其防霉抑毒能力。结果表明,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),产生抗黄曲霉毒素有效成分的能力不受传代次数影响,可在广温度范围内产生抑毒活性成分,培养基最佳初始pH为6,抑毒活性成分产生的最佳培养时间为6 d,菌株发酵上清液经甲醇提取获得的抑毒活性/mL时,对降散盘衣酸(norsolorinic acid,NA)积累抑制率均达到84%以上,抑制效果明显优于双乙酸钠,对花生的防霉抑毒处理起到良好的作用,结果对提高农产品的防霉抑毒能力,从污染源头有效阻止霉菌侵染,降低毒素产生,并减少化学防腐剂对环境和人体的危害具有重要意义。     

人参锈腐病菌拮抗菌的筛选及其耐药性测定

以人参锈腐病菌为靶标菌,从79株木霉菌株中筛选出3株拮抗效果较好的菌株ECT-01、WW Z 22-11和2-67,3株木霉菌对人参锈腐病菌抑制率分别达到77.24%、76.08%、74.06%。通过对其拮抗机理的初步研究发现,3株木霉菌主要通过重寄生作用寄生于人参锈腐菌菌丝上,吸取养分,最终使人参锈腐菌菌丝断裂死亡。耐药性试验表明3株木霉菌对多菌灵极敏感,ECT-01对百菌清和恶霉灵的耐药性均高于其他2株木霉菌。     

绿色木霉对花生黄曲霉毒素污染的防治

采用平板对峙培养、发酵液抑菌实验、薄层层析法以及ELISA法,检测绿色木霉对花生黄曲霉的抑菌活性和黄曲霉毒素的降解活性。结果表明,随着培养时间的增加,绿色木霉的拮抗作用增大,绿色木霉向黄曲霉扩张逐渐形成包围趋势,拮抗带宽度5.5 mm;不同培养时间和培养浓度的绿色木霉发酵液对黄曲霉均有抑制效果,且能抑制毒素的产生并降解黄曲霉毒素B_1,当发酵液浓度为5%时,降解率达95%;大田试验发现该发酵液能显著降低花生收获前黄曲霉毒素的污染,降低率达97%,同时能较大程度地抑制土壤中黄曲霉的生长。绿色木霉发酵液中可能存在抑制黄曲霉生长及降解黄曲霉毒素的抗菌活性物质,此研究可为花生产业化生产提供理论依据。     

木霉菌对番茄灰霉病菌的抑制作用

为明确木霉菌对福建省番茄灰霉病菌的抑制效果,研究了8株木霉菌对病原菌的拮抗作用。结果表明,在对峙培养条件下,供试木霉菌能显著抑制灰霉病菌菌丝生长,其抑制率为86.83%~91.39%,不同木霉菌株的发酵液对病原菌菌丝生长具有不同程度的抑制效果,其差异达显著水平。其中,菌株FJ2006-8发酵液的抑制生长率最高,为39.44%。此外,供试的木霉菌均能产生非挥发性和挥发性代谢产物,其中,菌株FJ2006-8的非挥发性代谢产物对病原菌菌丝生长的抑制效果最佳,抑制率为61.09%;而菌株T05-58的挥发性代谢产物对病原菌菌丝生长的抑制率最高,为22.95%。研究结果可为木霉菌生防菌剂的开发以及番茄灰霉病的绿色防控提供理论依据。     

烟田瓜果腐霉的分离鉴定及其拮抗木霉菌株的筛选

采用诱捕法从烟田土壤中分离到1株腐霉(Pythium spp.),鉴定为瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum).接种试验结果表明该菌对烟草、黄瓜、辣椒具有致病性.采用对峙培养试验测定木霉菌(Trichodermaspp.)对瓜果腐霉的抑制作用,筛选出拮抗瓜果腐霉哈茨木霉(T.harzianum)菌株TGY040604,该菌株对瓜果腐霉的生长抑制率达到80%以上,其次生代谢产物对病原菌也具有一定的抑制效果.盆栽试验结果表明,该木霉菌菌株对烟草猝倒病的防效达65%,优于甲霜灵锰锌.     

玉米腐霉茎腐病生防木霉菌株的筛选、鉴定及防治效果分析

【目的】筛选对玉米腐霉茎腐病病原菌具有抑制作用的木霉（Trichoderma spp.）菌株，明确其分类地位以及对腐霉茎腐病的防治效果和抑菌机理，为腐霉茎腐病生防制剂的研发提供菌种资源。【方法】采用菌丝生长速率法测试候选木霉菌株对肿囊腐霉（Pythium inflatum）、强雄腐霉（P. arrhenomanes）和芒孢腐霉（P. aristosporum）的抑制作用，筛选拮抗菌株；通过形态学和分子生物学特性确定Tr21菌株的分类地位；采用常规抑菌方法观察Tr21对腐霉菌丝形态的影响；采用溴化丙啶（PI）染液检测法及对不同处理时间菌丝上清液中蛋白和核酸吸光值的检测，分析Tr21发酵液对腐霉菌细胞膜通透性的影响；通过不同浓度Tr21发酵滤液浸种试验，检测Tr21发酵滤液对玉米种子发芽性状的影响；通过温室盆栽试验和田间人工接种试验，明确Tr21对腐霉茎腐病的防治效果。【结果】从实验室保存的109株木霉菌中，筛选到7株木霉菌对肿囊腐霉、强雄腐霉和芒孢腐霉具有拮抗活性，抑制率均>60%，其中Tr21菌株对3种腐霉菌的抑制率达到100%，其5×、10×和20×稀释液对3种腐霉菌的抑制率均...     

利用木霉菌防治草坪镰刀枯萎病研究

为了筛选防治草坪镰刀枯萎病的木霉菌株,采用平板对峙法、盆栽试验、田间试验研究了木霉菌对草坪镰刀枯萎病的拮抗作用及其机制。结果表明,从草坪禾草根际分离获得木霉菌株150株,通过平板对峙法筛选获得20株对草坪镰刀枯萎病有明显拮抗作用的菌株。通过盆栽试验测定,获得8株能显著降低病害发生率和病情指数的菌株。在2008年和2009年2a的田间试验中,筛选到对草坪病害有良好防效的木霉菌株T12。体外拮抗试验显示,木霉菌株T12对引起草坪镰刀枯萎病的尖孢镰刀菌具有良好的拮抗活性。菌株T12的拮抗机制主要为生长竞争、重寄生及产生代谢物质等。木霉菌制剂被认为是化学农药的理想代替产品,它的应用为草坪病害的防治提供了另一条有效防控途径。     

玉米苗期根腐病生防木霉菌的筛选

为筛选出由串珠镰孢菌引起的玉米苗期根腐病生防木霉菌,对分离出的木霉菌株,采用对峙培养及室内盆栽试验对木霉菌(Trichoderma spp.)进行了拮抗效果筛选及防效试验.结果表明:从分离出的92株木霉菌中采用PDA培养基复筛出拮抗效果较好的木霉菌10株(T-A2,T-B5,T-B8,T-B11,T-C7,T-C10,T-D3,T-E4,T-E8,T-F3),再从10株木霉菌中筛选出1株对串珠镰孢菌(Fusarium moniliforme Sheld.)有较好拮抗效果的优良木霉菌T-C7菌株,该菌株对串珠镰孢菌的抑制率达到87%以上;盆栽试验中,应用木霉菌T-C7防治玉米苗期根腐病,其防效为47.49%.     

拮抗细菌B44 对食用菌致病木霉的抑制作用

以3株食用菌致病木霉为目标菌株,利用热处理过的发酵液研究拮抗细菌B44对3株木霉的抑菌作用。通过对3株木霉菌丝生长、产孢量以及孢子萌发的研究,结果发现拮抗细菌B44对3株木霉均有较强的抑制作用,随着细菌发酵液浓度的提高,其抑制作用也逐渐增强;在细菌发酵液浓度为40%时,对3株木霉的抑制作用较强,其抑制率分别为79.74%、91.19%、73.37%,而对两株平菇的抑制作用相对较弱,抑制率为33.80%和55.46%。因此拮抗细菌B44具有潜在的生防应用前景。     

三七根际耐皂苷木霉菌的分离鉴定及其拮抗促生活性评价

为筛选出三七根际具有拮抗促生活性的耐皂苷木霉菌,通过收集一年生健康三七根际土壤进行木霉菌株的分离,并测定三七根系分泌物对木霉菌孢子萌发的影响以及皂苷对木霉菌菌丝生长的抑制效果,筛选获得耐皂苷的菌株,进一步对其分类鉴定后进行拮抗根腐病病原菌活性测定以及盆栽促生效果、根际定殖能力及其对连作障碍缓解效果的评价。结果表明:试验共分离到6株木霉菌株,其中2株对三七根系分泌物敏感性较低,经过形态学特征和ITS序列比对鉴定为绿色木霉(Trichoderma viride)T3和渐绿木霉(T. viridescens)T20。T3和T20菌株对三七主要根腐病病原菌恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)、茄腐镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(F. oxysporum)和雪腐镰刀菌(Monographella cucumerina)均具有较强的拮抗效果,对恶疫霉菌抑制率分别可达到61.76%和70.59%;T3和T20菌株能促进三七植株的生长,将其接种于三七连作土中,在接种20 d后能够在根际较好的定殖,增加三七植株的存苗率,降低根腐病发病率。该研究结果为缓解三七连作障碍提供了重要的生防菌资源。     

Screening of antagonistic Trichoderma strains and their application for controlling stalk rot in maize

Maize is one of the major crops in China, but maize stalk rot occurs nationwide and has become one of the major challenges in maize production in China. In order to find an environment-friendly and feasible technology to control this disease, a Trichoderma-based biocontrol agent was selected. Forty-eight strains with various inhibition activities to Fusarium graminearum, and Fusarium verticillioides were tested. A group of Trichoderma strains(DLY31, SG3403, DLY1303 and GDFS1009) were found to provide an inhibition rate to pathogen growth in vitro of over 70%. These strains also prevented pathogen infection over 65% and promoted the maize seedling growth for the main root in vivo by over 50%. Due to its advantage in antifungal activity against pathogens and promotion activity to maize, Trichoderma asperellum GDSF1009 was selected as the most promising strain of the biocontrol agent in the Trichoderma spectrum. Pot experiments showed that the Trichoderma agent at 2–3 g/pot could achieve the best control of seedling stalk rot and promotion of maize seedling growth. In the field experiments, 8–10 g/hole was able to achieve over 65% control to stalk rot, and yield increased by 2–11%. In the case of natural morbidity, the control efficiency ranged from 27.23 to 48.84%, and the rate of yield increase reached 11.70%, with a dosage of Trichoderma granules at 75 kg ha~(-1). Based on these results, we concluded that the Trichoderma agent is a promising biocontrol approach to stalk rot in maize.     

不同木霉菌株对黄瓜枯萎病菌的拮抗作用

比较不同木霉菌株对黄瓜枯萎病菌的竞争作用、重寄生作用、抗生作用和防病作用的差异,筛选出高效菌株,为利用木霉菌防治土传病害提供理论依据。通过与致病菌对峙培养,研究竞争作用。结果表明:供试木霉菌能限制黄瓜枯萎病菌的菌丝扩展,哈茨木霉(Trichoderma harzianum)TH菌株竞争作用最强,菌丝扩展抑制率为67.70%。试验发现木霉菌株能够通过紧贴、缠绕、穿透等方式寄生于黄瓜枯萎病菌的菌丝上,最后引起菌丝断裂,细胞内容物外泄。通过无菌滤膜过滤获得的不同木霉菌代谢产物抗生作用明显,TH菌株代谢产物的抑菌圈直径达到3.9cm,对黄瓜枯萎病菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别为57.19%和68.35%。盆栽试验结果显示,育苗时施加木霉菌株不同程度控制苗期黄瓜枯萎病的发生,TH菌株防病作用最强,防效为64.34%,绿色木霉(Trichoderma viride)TV菌株促进黄瓜生长作用最强,地上部分和地下部分鲜质量分别增加42.81%和86.92%。     

Soil application of Trichoderma asperellum GDFS1009 granules promotes growth and resistance to Fusarium graminearum in maize

Of diseases affecting maize (Zea mays), Fusarium graminearum is one of the most common pathogenic fungi that cause stalk rot. In the present study, the Trichoderma asperellum GDFS1009 strain was shown to be an effective biocontrol agent against stalk rot. In a confrontation culture test, Trichoderma strain displayed an approximately 60% inhibition rate on the mycelial growth of F. graminearum. In pot trials, the application of 2 g/pot of T. asperellum GDFS1009 granules had the best control effect on stalk rot at the seedling stage (up to 53.7%), while the average plant height and fresh weight were also significantly improved. Additionally when fertilizer was added at 8 g/pot, the application of 3 g/pot of Trichoderma granules had the best control effect on maize stalk rot (40.95%). In field trials, when inoculating F. graminearum alone, the disease index for inoculating was 62.45, but only 31.43 after treatment with T. asperellum GDFS1009 granules, suggesting a control efficiency of 49.67%. Furthermore, in a naturally F. graminearum-infected field, Trichoderma granules, when applied for 3 consecutive years, showed significant control of stalk rot and increased yields.     

AFLA-maize,a mechanistic model for Aspergillus flavus infection and aflatoxin B1 contamination in maize

A mechanistic weather-driven model was developed based on the infection cycle of Aspergillus flavus on maize to predict the risk of aflatoxin contamination in field on a daily basis from silk emergence to harvest; hourly data of temperature, relative humidity and rain were used as model input. The work was done in four steps: (i) development of the model prototype; (ii) collection of Italian field data on aflatoxin contamination in maize with related crop and weather data; (iii) development of a probability index to exceed the legal limit of 5 μg of aflatoxin B₁ per kg of unprocessed maize by combining model predictions and field data in a logistic regression; and (iv) validation with Italian data of the probability index and release of the predictive model, named AFLA-maize. Predictions of maize contamination above the threshold of 5 μg/kg in the data set used for parameterization of the regression equation were correct for 73% of field samples; 59% and 14%, respectively, were not contaminated and contaminated. In a second independent data set, 68% of samples were correctly predicted. The model AFLA-maize provides prediction of A. flavus infection and aflatoxin contamination along the growing season and at harvest. This information is useful to support decision-making for (i) crop management, (ii) harvest timing, (iii) maize lots cleaning and logistic, and (iv) maize sampling for aflatoxin analysis at consignment.     

甘草内生细菌对4种植物病原菌的抑菌谱及其16S rRNA系统发育分析

旨在筛选对4种植物病原真菌具有拮抗活性的甘草内生细菌,为新疆甘草内生细菌的开发应用提供理论依据。采用平板对峙培养法从100株甘草内生细菌中筛选对石榴枯萎病甘薯长喙壳、草果叶斑病镰刀菌、草果假茎黑斑病小孢拟盘多毛孢、墨兰炭疽病胶孢炭疽菌等4个病原菌具有拮抗活性的菌株,并测定其16SrRNA基因序列,建立系统发育树对其进行初步鉴定。结果显示,61株菌株对甘薯长喙壳具有拮抗作用,其中13株菌的抑菌半径均大于15mm。进一步研究表明,10株菌对4种植物病原菌都表现出较高的抑菌能力。基于16Sr RNA基因序列分析与系统发育分析表明,其中11株菌为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus),另外2株菌分别为副氧化微杆菌(Microbacterium paraoxydans)和莫哈韦芽胞杆菌(B.mojavensis)。     

94株土壤放线菌抑菌活性的初步筛选

以油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌、番茄叶霉病菌为指示菌,采用生长速率法对94株土壤放线菌进行抑菌活性筛选。发现AXW4-1菌株等10株放线菌发酵液至少对3种病原真菌中的1种有60%以上的抑制率,占总测试菌株的10.64%。对这10株放线菌进行抑制孢子及菌核萌发试验,结果获得4株活性较高的菌株,其中AXW4-1和HVA29-2菌株发酵液对番茄灰霉病菌的孢子萌发抑制率分别为86.9%和78.8%,X-1-8和GSA26-2菌株发酵液10倍稀释液对油菜菌核病菌的菌核萌发抑制率均为86.1%;油菜叶片组织法试验表明,X-1-8和GSA26-2菌株发酵液对油菜菌核病的药效均在90%以上。     

链霉菌对玉米弯孢霉菌抑制作用的初步研究

用 39株链霉菌株对玉米弯孢霉菌进行了拮抗作用的研究。结果表明 ,有 7株对玉米弯孢霉菌表现一级拮抗作用 ,15株表现二级拮抗作用 ,17株没有表现拮抗作用。其中E17-P、B17-G菌株的抑菌效果达到福美双5 μL·L-1稀释液作用的 6 0 %以上 ,并且超过了退菌特 5 μL·L-1稀释液的作用 ,是较好的具有潜力的生防菌。同时 ,所有一级拮抗菌的抑菌稳定性都好于杀菌剂对照     

黄芪根腐病生防菌株的筛选鉴定及其防效评价

以沙棘根瘤内生细菌为材料,筛选对黄芪根腐病具有生防效果的菌株,以期为黄芪根腐病的生物防治提供优质菌种。采用平板对峙法,筛选得到抑菌性能较强的沙棘根瘤内生细菌TT14,并检测其对4株黄芪根腐病原菌的抑菌活性;根据形态和培养特征,生理生化特性及16S rRNA基因序列分析,对菌株TT14进行鉴定;通过盆栽试验,测定菌株TT14发酵液对黄芪根腐病的防治效果。结果显示,25株沙棘根瘤内生细菌中,11株具有抑制黄芪根腐病的能力,其中5株对供试的4株黄芪根腐病病原菌都表现出较好的抑菌效果,在这5株内生菌中TT14抑菌效果最佳,其对4株病原菌的抑菌率均在54.52%以上;经鉴定菌株TT14为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis);盆栽试验显示菌株TT14发酵液对黄芪根腐病有明显的生防效果,其防治效果达65.68%,较对照组提高38.08%。综上可见,沙棘根瘤内生细菌TT14具有较强的抑制黄芪根腐病的活性,并具有较好的生防效果。     

哈茨木霉T2-16突变体库的构建及突变株表型分析

为了优化高效拮抗生防菌哈茨木霉T2-16的EMS诱变条件,构建哈茨木霉T2-16突变体库,为哈茨木霉功能基因组研究奠定材料基础,以哈茨木霉T2-16为试验材料,采用单因素试验以0～0.6 mol·L^-1 EMS溶液分别处理不同浓度孢子0～6 h,明确适于哈茨木霉诱变的EMS最佳浓度、处理时间和孢子浓度。以最适参数诱变处理野生型菌株,进行生长势、拮抗能力和生防效果比较。结果显示,0.4 mol·L^-1 EMS溶液处理浓度为10⁶ ·mL^-1的孢子4 h,其致死率接近70%,诱变效果最佳。经生长势、拮抗能力和生防效果比较发现,生长势呈正向突变占有率达46.20%,其中,16株突变菌株拮抗作用明显增强,T42和T62的生防效果分别高出野生型菌株31.64%和27.91%,为研究哈茨木霉与生防相关的功能基因打下基础。