生长抑素基因免疫对湖羊羔羊生长及GH和IGF-Ⅰ的影响

为探讨生长抑素DNA疫苗免疫湖羊的效果,将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)基因融合构建真核表达质粒pES/2SS,分别与pE-CpG质粒、细菌DNA、脂质体粗品配合及重新构建的pES/2SS-GMCSF免疫断奶母羔羊,4周后以相同剂量加强免疫1次。结果显示,免疫组的抗体水平高于对照组(P<0.05),首次免疫4周和加强免疫2周后,细菌DNA佐剂组的抗体水平高于生长抑素单独免疫组(P<0.05),其抗体阳性率也为各免疫组最高。全期免疫组抗生长抑素抗体阳性率达36.0%;免疫羊的增重比对照组高18.82%(P<0.01)。加强免疫后2周,免疫组的GH和IGF-Ⅰ水平显著高于对照组(P<0.05),抗体阳性羊的GH和IGF-Ⅰ水平显著高于抗体阴性羊(P<0.01)。分析第2、4、6和10周所检测的各免疫组湖羊生长抑素抗体P/N值、GH、IGF-Ⅰ及周增重之间的相关性,发现生长抑素抗体与GH、IGF-Ⅰ、周增重显著相关(P<0.01),周增重与生长抑素抗体(P<0.01)、GH(P<0.01)、IGF-Ⅰ(P<0.05)显著相关。结果表明:SS基因免疫产生SS抗体,有效中和了内源性SS,影响了相关激素的分泌,促进羔羊生长。     

生长抑素DNA疫苗对湖羊羔羊生长和相关激素的作用——佐剂效应

选择60只断奶湖羊母羔羊,分为6组,1～5组为免疫组,分别用pES/2SS pE-CpG、pES/2SS 细菌DNA、pES/2SS-GMCSF、pES/2SS脂质体和pES/2SS免疫,第6组为对照组.结果显示,首次免疫4周和加强免疫2周后,细菌DNA佐剂组的抗生长抑素抗体水平显著高于pES/2SS单独免疫组(P＜0.05),其抗体阳性率也最高,达50%.比较全期14周免疫羊的体质量增加情况,最优为pE-CpG佐剂组,其次为细菌DNA佐剂组,分别比对照组高33.0%和31.6%(P＜0.01),且显著高于pES/2SS单独免疫组(P＜0.05).加强免疫2周后,免疫组GH和IGF-Ⅰ水平显著高于对照组(P＜0.05),抗体阳性羊的GH和IGF-Ⅰ水平极显著高于抗体阴性羊(P＜0.01).结果表明:几种佐剂配合pES/2SS免疫,产生了免疫佐剂效应,能增强生长抑素DNA疫苗的免疫效果.     

生长抑素DNA疫苗对湖羊羔羊生长和相关激素的作用——佐剂效应

选择60只断奶湖羊母羔羊,分为6组,1～5组为免疫组,分别用pES/2SS+pE-CpG、pES/2SS+细菌DNA、pES/2SS-GMCSF、pES/2SS脂质体和pES/2SS免疫,第6组为对照组.结果显示,首次免疫4周和加强免疫2周后,细菌DNA佐剂组的抗生长抑素抗体水平显著高于pES/2SS单独免疫组(P＜0.05),其抗体阳性率也最高,达50%.比较全期14周免疫羊的体质量增加情况,最优为pE-CpG佐剂组,其次为细菌DNA佐剂组,分别比对照组高33.0%和31.6%(P＜0.01),且显著高于pES/2SS单独免疫组(P＜0.05).加强免疫2周后,免疫组GH和IGF-Ⅰ水平显著高于对照组(P＜0.05),抗体阳性羊的GH和IGF-Ⅰ水平极显著高于抗体阴性羊(P＜0.01).结果表明:几种佐剂配合pES/2SS免疫,产生了免疫佐剂效应,能增强生长抑素DNA疫苗的免疫效果.     

基因佐剂CpGDNA对生长抑素DNA疫苗pES/2SS的作用

 【目的】探讨CpGDNA对生长抑素DNA疫苗免疫小鼠免疫效果的影响。【方法】生长抑素质粒pES/2SS分别与CpG-ODN、pE-CpG、细菌DNA、脂质体配合免疫小鼠，疫苗剂量为20μg/只，佐剂等量混合，2周后加强免疫。【结果】雌性小鼠免疫后4、6周，疫苗组平均增重显著高于对照组(P<0.05)。CpGDNA和DNA疫苗联合免疫后SS抗体P/N值、IgG2a/IgG1、脾细胞活性、GH和IGF-I均比单一使用DNA疫苗的高(P<0.05)。免疫后4周，P/N值以pES/2SS + CpGODN组最高，SI值以pES/2SS+ CpG-ODN组最高。CpGDNA佐剂组GH从第2周开始升高，至第6周达高峰，显著高于pES/2SS组（P<0.01），CpG-ODN组GH高水平持续时间最长，至免疫后8周，仍显著高于pES/2SS组（P<0.01）。CpGDNA组IGF-I值显著高于pES/2SS疫苗组（P<0.05）。【结论】生长抑素基因免疫小鼠可以产生SS抗体，而含CpGDNA序列的核酸佐剂及脂质体粗品，可以增强生长抑素基因疫苗的效果。     

小鼠对pGM-CSF/SS生长抑素基因疫苗的免疫应答

通过研究细胞因子GM-CSF与生长抑素pcS/2SS融合表达质粒pGM-CSF/SS诱导小鼠免疫应答的影响,探求生长抑素基因免疫新策略。将60只20日龄雄性昆明小白鼠均分为6组,分别用PBS(C0)、pGM-CSF质粒(C1)、pGM-CSF/SS质粒(T1、T2、T3)、pcS/2SS(T4)质粒口服免疫,T1~T4组的免疫剂量分别为2×106cfu/mL、2×108cfu/mL、2×1010cfu/mL、2×108cfu/mL,以上质粒均以减毒沙门氏菌为传导载体。结果显示:pGM-CSF/SS组的抗生长抑素抗体AP/AN值显著高于pcS/2SS组,阳性鼠体增重亦高于pcS/2SS组,抗体阳性率分别是71.4%和40.0%。另外,高剂量组的AP/AN值极显著高于低剂量组,显著高于中剂量组;中剂量组的AP/AN值显著高于低剂量组,高剂量组的抗体阳性率也明显高于中剂量组和低剂量组,分别为100%、71.4%和20.0%。可见,pGM-CSF/SS疫苗的免疫效果优于pcS/2SS疫苗,且pGM-CSF/SS疫苗呈剂量依赖关系。这些结果显示出细胞因子GM-CSF可以增强生长抑素DNA疫苗的免疫效果。     

GM-CSF与SS融合表达质粒对小鼠淋巴细胞增殖及GH和IGF-1分泌的影响

以小白鼠为试验对象,分别肌肉注射生理盐水及pcS/2SS、pGM-CSF/SS、pGM-CSF pcS/2SS质粒,每只50 μg,免疫后第3周以相同剂量加强免疫1次,测定不同质粒对小鼠淋巴细胞增殖反应及血浆生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)分泌水平,探讨GM-CSF对生长抑素DNA疫苗的免疫增强作用.结果表明: GM-CSF可增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,以pGM-CSF pcS/2SS组的增殖能力最强,显著高于pcS/2SS组和生理盐水组;同时注射2种表达质粒(pGM-CSF pcS/2SS)的GH分泌水平和融合表达质粒(pGM-CSF/SS)的IGF-1分泌水平明显高于生理盐水组和pcS/2SS免疫组.这证明GM-CSF对生长抑素DNA疫苗有一定的免疫增强作用,可促进生长抑素DNA疫苗的免疫反应,提高血浆GH和IGF-1的分泌水平.     

鸡Toll样受体2的克隆表达及多克隆抗体的制备

试验旨在制备鼠抗鸡Toll样受体2(chTLR2)的多克隆抗体。采用RT-PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增其胞外区片段chTLR2(chTLR2t1和chTLR2t2),并构建这两个片段的原核表达重组质粒,优化蛋白质的表达条件,SDS-PAGE和Western-blot法检测融合蛋白,将融合蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠,利用相应的原核表达的全长蛋白检测特异性抗体滴度。结果显示,成功获得chTLR2的胞外区片段,构建的原核表达重组质粒经IPTG诱导能成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价分别为1∶16 000和1∶10 000。表明制备的鼠抗chTLR2多抗具有良好的特异性,为进一步研究chTLR2的功能提供了重要材料。     

GM-CSF与生长抑素共表达基因疫苗的构建和鉴定

以基因疫苗pVGS/2SS-asd为模板，采用分子生物学方法，分别获得目的片段粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（ GM-CSF）和含有乙肝表面抗原S基因的生长抑素基因（ SS）。以共表达质粒pIRES为载体，采用基因工程方法，将GM-CSF和SS基因片段分别克隆到载体的多克隆位点A和多克隆位点B上，构建共表达基因疫苗pIRES-GM-CSF/2SS，旨在同时表达GM-CSF和SS两种蛋白。获得表达质粒后，酶切和测序鉴定该共表达基因疫苗，结果显示，该共表达基因疫苗pIRES-GM-CSF/2SS构建成功，为该共表达基因疫苗的后续研究奠定了良好的基础。     

FMDV P1基因DNA疫苗构建及免疫实验

[目的]构建口蹄疫DNA疫苗[方法]构建以PRV为载体的表达FMDV P1基因的质粒pIESZP1和pUTK3CP1,免疫小鼠并检测了免疫后小鼠的抗体水平.将构建的2个真核表达质粒分别转染Vero细胞,通过PCR、IFA、Western-blot等方法检测目的基因的转录和表达.将正确表达目的基因的DNA质粒肌肉接种3周龄的Balb/C小鼠,采用ELISA和SN方法检测了免疫小鼠体内的抗体水平.[结果]携带有FMDV衣壳蛋白P1基因的DNA质粒能引起小鼠产生特异性的体液免疫反应,两重组质粒诱导小鼠产生抗FMDV的抗体水平无差异.[结论]该研究为含有FMDV P1基因重组PRV以及重组病毒的动物免疫试验以评价基因工程疫苗的免疫效果奠定了基础.     

变异猪流行性腹泻病毒M和N双基因融合真核表达及其活性鉴定

[目的]体外表达变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M-N双基因融合蛋白并明确其生物活性,为开展PEDV新型疫苗及其诊断技术研究提供更多的候选蛋白.[方法]将变异PEDV的M基因克隆至pEASY-Blunt M2(pM2)真核表达载体构建pM2-M真核质粒,通过同源重组将N基因克隆至M2-M基因片段构建pM2-M-N双基因融合重组质粒,然后转染293T细胞表达出M-N双基因融合蛋白.通过Western blotting、ELISA及免疫BLAB/c小鼠试验鉴定表达融合蛋白的生物学活性.[结果]扩增获得的M基因、N基因片段大小分别为678和1359 bp,且与原序列的相似性均达100.0%.将M基因和N基因并连接至pM2真核表达载体成功构建获得pM2-M-N双基因融合重组质粒,M-N双基因片段大小为2004 bp,且与原序列的相似性为99.3%.以pM2-M-N双基因融合重组质粒转染239T细胞,表达出大小约75 kD且具有免疫活性的M-N双基因融合蛋白,纯化的M-N双基因融合蛋白能与PEDV阳性血清反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒均无交叉反应;以其免疫BLAB/c小鼠能诱导产生特异性抗体.[结论]通过pM2真核表达载体能构建获得变异PEDV毒株的pM2-M-N融合双基因重组质粒,转染293T细胞后可表达出具有良好免疫活性的M-N双基因融合蛋白,为后期开展变异PEDV基因工程疫苗及其诊断技术研究提供更多的候选蛋白.     

植物外源基因转移技术综述

本文对植物外源基因转移方法和研究进展进行了综述,并对常用的选择标记基因、报告基因以及植物遗传转化中存在的问题进行了分析。     

浅析抗虫基因种类及抗虫原理

概述了目前植物抗虫基因工程中应用较广的Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、外源凝集素基因、淀粉酶抑制剂基因和动物源抗虫基因及抗虫原理,分析了抗虫基因植物面临的问题,提出了延缓害虫对转基因植物抗性的解决建议。     

Design and Implementation of Visual Dynamic Display Software of Gene Expression Based on GTK

The paper presented an implement method for a dynamic gene expression display software based on the GTK. This method established the dynamic presentation system of gene expression which according to gene expression data from gene chip hybridize at different time, adopted a linearity combination model and Pearson correlation coefficient algorithm. The system described the gene expression changes in graphic form, the gene expression changes with time and the changes in characteristics of the gene expression, also the changes in relations of the gene expression and regulation relationships among genes. The system also provided an integrated platform for analysis on gene chips data, especially for the research on the network ofgene regulation.     

阿勒泰羊羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织的表达研究

[目的]研究MSTN/Smad信号通路基因在阿勒泰羊2日龄羔羊不同组织中的表达程度的差异.掌握阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因表达规律.[方法]采用荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织中的表达量.[结果]背最长肌MSTN mRNA表量显著高于股三头肌、股二头肌、半腱肌和半膜肌(P＜0.05),各组织Smad2 mRNA表达量无显著差异(P＞0.05).Smad3 mRNA在股二头肌、半腱肌、背最长肌和脾中的表达量显著高于肺中的表达量(P＜0.05).Smad4 mRNA在心脏中的表达显著高于肺脏中的表达量(P＜0.05).TGFBR1 mRNA在心脏中的相对表达量为最高.TGFBR2 mRNA在心脏、脾脏、肾脏、肝脏中的表达量显著高于股二头肌肉中的表达量(P＜0.05).[结论]对阿勒泰羊2日龄羔羊MSTN/Smad信号通路基因在不同组织中的表达进行了初步的研究,这对今后阿勒泰羊MSTN基因表达规律及调控的研究具有重要意义.     

基因芯片技术及其应用

基因芯片是一种高通量、快速、平行核酸序列测定及定量分析技术。它是将大量特定序列的核酸片段有序地固定在载体上作为探针与标记核酸分子进行杂交,检测杂交信号的强弱,进而判断样品中靶分子的组成及数量。目前基因芯片技术广泛应用于基因序列测定、基因表达研究、动植物疾病诊断及生物药物筛选等领域,是一种发展前景良好的新兴检测手段。文章介绍了基因芯片技术的概念、工作原理、种类和制备过程,重点介绍了该技术在基因测序,基因表达水平检测,基因多态性检测,药物筛选,以及在预防兽医中的应用。     

新疆巴什拜羊不同毛色与有关基因多态性分析

【目的】以不同毛色(红棕色73只,黑色53只,青灰色40只)新疆巴什拜羊为研究对象,采用PCR-SSCP技术检测ASIP、TYR、TYRP1和TYRP2基因多态性,并分析其与被毛表型的相关性。【方法】采用随机抽样的方法选取出三种毛色的巴什拜羊,用枸橼酸钠抗凝管进行采血。运用软件PIC-CALC和POPGENE 32计算巴什拜羊ASIP、TYR、TYRP1和TYRP2基因的多态信息含量和基因型频率、等位基因频率、纯合度、杂合度、有效等位基因数,并对该位点基因型的分布进行Hardy-Weinberg平衡的卡方检验。将所得数据输入Excel表中进行整理,并用SPSS 19.0软件进行差异性分析。【结果】ASIP基因在不同毛色的巴什拜羊群体中有两种基因型分别为AA型和AB型,等位基因B为红色被毛群体中的优势等位基因;等位基因A为黑色和青灰色两种被毛群体中的优势等位基因。处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05),红色被毛多态信息含量处于中度多态,而黑色和青灰色被毛多态信息含量处于低度多态。TYR基因在不同毛色的巴什拜羊群体中有两种基因型分别为AA型、AG型和GG型,等位基因G为3种毛色的优势等位基因TYR基因在巴什拜羊黑色和青色被毛群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05),而红色被毛群体中处于不平衡状态(P<0.05)。TYRP1基因存在两种基因型:AA型和GG型,等位基因A为红色和青灰色两种毛色的优势等位基因;等位基因G为黑色被毛群体的优势等位基因。TYRP1基因在巴什拜羊群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态。红色被毛多态信息含量处于高度多态,黑色和青灰色被毛多态信息含量处于低度多态。TYRP2基因PCR-SSCP检测结果没有显示多态。【结论】ASIP、TYR、TYRP1和TYRP2基因多态性与巴什拜羊的毛色性状有相关性。     

转基因玉米的定性PCR检测

根据玉米内参照基因zSSIIb和转基因玉米中常见的CaMV35S、NOS、Bt、hpt等基因的特异性结构,设计5对定性PCR引物,经定性PCR检测,可以准确地将转基因玉米的目的基因检出,说明这5对引物具有较高的特异性和准确性。由此建立了一套转基因玉米定性PCR检测方法,用于转基因玉米及其产品的筛查、抽检。     

甘蔗抗虫转基因研究进展*

 甘蔗是重要的糖料和能源作物,甘蔗生产中鳞翅目害虫(大螟、二点螟等)和同翅目害虫(甘蔗绵蚜等)的危害已成为其持续、稳定和健康发展的严重障碍。甘蔗组织培养和离体再生等技术体系比较成熟，十分有利于基因工程改良，利用基因枪转化和农杆菌介导法等已经建立了多种甘蔗受体系统与转化系统，成功获得甘蔗转基因植株。综述了甘蔗转基因技术、抗虫基因以及甘蔗抗虫转基因研究进展。     

基因工程技术应用对有机农业生态环境的影响

基因工程的生物安全性越来越受关注。有机农业作为一种新兴产业。正不可避免地受到基因流和基因污染的影响。本文阐述了基因工程和有机农业思想内涵的差异。分析了有机农业的生态环境受基因污染的潜在风险。阐明了国际有机农业运动联合会(IFOAM)对基因污染的立场和态度，并针对我国的实际，提出了相关对策和建议。