不同地区橡胶树红根病菌的生物学特性及室内毒力测定

橡胶树红根病是我国分布最广、危害最重的橡胶树根部病害。为明确我国海南和云南地区橡胶红根病菌的生物学特性及对杀菌剂的敏感性,采用十字交叉法研究了不同培养条件对病菌菌丝生长的影响,并测定了10种不同杀菌剂对病菌的抑制作用。结果表明,病原菌在玉米+橡胶根的培养基上生长最快,对温度、pH等适应范围广,温度在13~31 ℃,pH在3~10均能生长,最适生长温度为28 ℃,多数菌株最佳pH为7~9,且能利用多种碳氮源;不同的碳源中,果糖、半乳糖、麦芽糖、葡萄糖和甘露糖较适合该菌的生长;在供试氮源中,菌丝在酪氨酸、牛肉浸膏的基础培养基上生长最快,在色氨酸和尿素的基础培养基上生长最慢;光照对病菌有抑制作用,黑暗有利于菌丝生长;菌丝的致死温度为47 ℃,10 min。不同地区的病原菌株间药剂敏感性存在一定差异,戊唑醇抑菌效果最好,其EC₅₀为0.0312 μg/mL,其次为嘧菌酯、十三吗啉、咪鲜胺和腈菌唑,EC₅₀分别为0.5581、0.6759、1.3763和1.5603 μg/mL。     

橡胶树褐根病菌的分子检测

利用褐根病菌的一对特异性引物G1F/G1R,对不同来源橡胶树褐根病菌菌株的r DNA-ITS区进行PCR扩增,对发病组织进行分子检测,并构建橡胶树褐根病菌系统发育树。结果表明:10株不同来源橡胶树褐根病菌菌株DNA均能扩增出一条653 bp的特异性片段,而橡胶树红根病菌、紫根病菌、臭根病菌、白根病菌和清水对照均无扩增条带。发病组织检测结果表明,该引物能特异性检测到橡胶树褐根病菌的存在。引物对基因组DNA检测灵敏度为100 ag/μL。基于r DNA-ITS系统发育分析结果表明,供试菌株与Gen Bank中的菌株KF233592、KM079591聚在同一分支上,其亲缘关系最近,均属于Phellinus noxius。     

巴西橡胶树红根病病菌液体培养条件优化研究

通过设置不同碳源、氮源、温度、菌龄等对巴西橡胶树红根病病菌[Ganoderma pseudoferreum (Wakef) Over.et Steinm]进行液体培养试验。结果表明：适合橡胶树红根病病菌菌丝生长的液体培养基配方为：蔗糖1%,葡萄糖2%,D-果糖2%,玉米粉0.5%,酵母粉0.5%,黄豆粉0.8%,蛋白胨1%,KH2PO4 0.1%,MgSO4 0.1%,VB1 0.02%;最适培养温度是29℃,液体菌种菌龄为120 h,培养周期为240 h。     

橡胶树内生拮抗细菌菌株Czk1的发酵条件优化

从橡胶树根部分离出1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株Czk1,通过室内平皿对峙试验结果表明,菌株Czk1对所参试的5种橡胶树不同的根病菌都具有很强的拮抗作用,同时也对8个其他作物上发生的常见病原菌都有非常强的拮抗作用.通过单因子和正交试验法对菌株Czk1的培养基进行优化,获得的最佳培养基配方为:...     

橡胶树红根病病原菌的鉴定

海南岛橡胶树红根病病原菌的种与国外报道的橡胶树红根病菌是相同的。但子实体的外部形态、内部的微观结构－担孢子、管孔间隔膜等特征存在差异，对十三吗啉农药的反应、培养菌的生长速度和担孢子萌芽等也有所不同。初步认为，海南岛橡胶树红根病菌可能有２个不同的变种。     

竹叶兰的无菌播种快繁技术研究

以竹叶兰种子为外植体进行无菌播种，成功诱导原球茎并再生植株，建立其快繁体系。试验结果表明：(1)1/2 MS＋香蕉泥30.0 g/L为最佳种子萌发与原球茎诱导培养基；(2)1/2 MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋香蕉泥30.0 g/L为最佳芽增殖培养基，且芽生长健壮；(3)1/2 MS＋IBA 0.5 mg/L为最适生根培养基。     

12种杀菌剂对橡胶树褐根病菌的毒力测定

采用菌丝生长速率法测定了12种杀菌剂对3株橡胶树褐根病菌的抑菌能力。结果表明：百菌清、腈菌唑、咪鲜胺、三唑酮、戊唑醇、异菌脲、抑霉唑、十三吗啉、丙环唑9种药剂对橡胶树褐根病菌的毒力较强,抑菌效果较好,对橡胶树褐根病菌的EC50在0.013 2～2.972 6 μg/mL,其中丙环唑和戊唑醇的EC50均小于0.1 μg/mL,对橡胶树褐根病菌的抑制效果最佳;嘧菌酯、甲基硫菌灵的效菌效果较差;多菌灵对褐根病菌的抑制效果最差,3株褐根病菌的EC50在138.655 0～492.298 2 μg/mL。     

橡胶树白根病菌生物学研究

橡胶树白根病是中国进境植物检疫性病害,是世界性橡胶树的严重病害。为了能更好的了解、预防和控制橡胶树白根病,对该病菌进行生物学特性的研究,研究不同培养条件及营养环境对橡胶树白根病菌菌丝生长的影响。结果表明:病原菌在PDA+酵母和PDA+橡胶树根汁培养基上生长最好,PDA培养基中添加不同的糖对病原菌生长影响不同,以蔗糖、淀粉、麦芽糖、甘露糖和鼠李糖最好。PDA培养基中添加2%的氮源对病菌的生长无促进作用。该菌在10～35℃下均能生长,最适生长温度为28℃,55℃下处理10 min,病菌不能生长;pH4~11都可生长,最适pH8～9;黑暗能促进病原菌生长。     

橡胶树内生真菌分离方法研究

以同一株橡胶树的枝条和叶片为材料,采用5种不同的组织表面消毒方法，在加入3种不同细菌生长抑制剂的PDA培养基中培养橡胶树内生真菌。结果表明，在加入Rifamicin 15 mg/L的PDA培养基中，运用M2培养分离效果最佳。     

橡胶树红根病病原菌的鉴定(Ⅱ)

通过对室内人工培养的２种类型橡胶树红根病菌子实体的外部形态、内部微观结构包括担孢子、管孔、管孔间隔膜等分类学上特征的观察，以及与大田病树上子实体的比较，进一步证实海南岛２种类型橡胶树红根病菌的性状差异达到变种级水平。类型Ⅰ和类型Ⅱ可区分为２个不同的变种。     

橡胶灵芝菌（Ganoderma pseudoferreum）DNA 条形码检测 筛选

选用 10 对 DNA 条形码标准序列 ITS、COI、nrDNA-LSU、nrDNA-SSU 和 trnL DNA 对海南和云南红根病区 分离的 21 个橡胶灵芝菌进行检测。除 COI 和 trnL DNA 外，其他 8 对引物均扩增得到 PCR 产物，产物大小范围为 268~1 355bp，种内相似度为 98.05%~99.54%。分别将扩增得到的序列与 GenBank 公布上的 Ganoderma 属和常见真 菌属序列，共 77 个 ITS、74 个 nrDNA-LSU 和 74 个 nrDNA-SSU 序列进行系统进化树构建与分析。结果表明：nrDNA-LSU 序列和 nrDNA-SSU 序列种间差异较小，不能准确区分 Ganoderma 属及其他属；5 对 ITS 序列均能区分 Ganoderma 属，但仅 ITS1/ITS4 序列能将 Ganoderma 属下 16 个种归入不同分支。ITS1/ITS4 序列表现出适宜的种内与种间差异， 适宜作为 G. pseudoferreum 的 DNA 条形码。     

75%十三吗啉乳油防治橡胶红根病田间药效试验

应用75%十三吗啉乳油防治橡胶红根病的田间药效试验结果表明：应用75%十三吗啉乳油50、100和150倍液，第2次药后30 d，防治效果分别为80.73%、76.33%和67.61%；第3次药后30 d，防效分别提高到83.82%、78.93%和71.91%，可见，75%十三吗啉乳油对已发红根病的橡胶树具有很好的防治效果，既起保护作用，也有治疗效果。     

一株产铁载体橡胶树拮抗细菌的分离鉴定及耐药性分析

从橡胶树根部分离到一株拮抗细菌Czk1,该菌株在铬天青(CAS)检测平板上产生较大的桔黄色显色圈,具较强的铁载体产生能力.对其进行生理生化鉴定、16S rDNA序列分析,测定7种常见抗生素的抗性.结合该菌菌落、菌体特征,生理生化指标及16S rDNA序列分析,鉴定该内生菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌对四环素、红霉素、氨苄青霉素、利福平、链霉素和卡那霉素高度敏感,对氯霉素表现抗性.     

8株木霉菌对橡胶树红根病的拮抗作用

木霉菌具有抑制植物病原真菌生长的能力,因而成为开发土传根部病害生防菌的首选之一。利用对峙培养法,测定8个木霉菌菌株对3个橡胶树红根病病原真菌的体外拮抗作用,并对筛选出来的木霉菌进行相互间的对峙培养分析。结果表明：有6个木霉菌对3个红根病病原菌具有显著拮抗效果;所选出的6个木霉菌之间尽管多数可以共存,但存在空间和营养竞争,尤其是棘孢木霉,很容易被其它木霉菌抑制和侵占,因此,在今后使用时不适宜混配。该实验结果可为进一步筛选和利用生防菌防治橡胶树根部病害提供理论依据。     

金龟子绿僵菌菌株培养基的改良

采用液体振荡与固体平板双培养的方法,对金龟子绿僵菌MA4,MAIml两菌株的培养基进行改良.研究结果表明:MA4,MAIml菌株的最适复合碳源均为玉米粉、最适氮源为蛋白胨、最适碳氮比为4:1(m:m,下同)、碳浓度分别为0.5,1.0mol/L,即改PPDA培养基为:MA4菌株以11.8g/L的玉米粉代替蔗糖,17.1g/L的酵母浸膏代替蛋白胨;而MAlml菌株的则以23.6g/L的玉米粉代替蔗糖,蛋白胨由10.0g/L更换为16.2g/L.     

巴西香蕉苗静置水培营养液配方的初步筛选

采用静置水培法，使用4种不同的营养液配方，并以清水培养和椰糠基质栽培为对照，对巴西香蕉苗进行生长比较试验。结果表明：在香蕉苗增加的生物量方面，BXM配方(巴西木植物营养液)处理与椰糠栽培的差异不显著，但与日本园试配方、Hoagland植物营养液配方、1/2 MS培养基营养元素配方和清水培养的差异显著；在株高和叶面积方面，均以椰糠栽培的最大，BXM配方处理的居次，接下来依次是Hoagland植物营养液配方、日本园试配方、1/2 MS培养基配方和清水培养。综上所述，在这4种营养液配方中，BXM配方是巴西香蕉苗生长的最适营养液配方。     

蝴蝶兰的组织培养

以蝴堞兰带节花梗为外植体,在改良MS(其中大量元素量减半,其余全量,下同)附加10 mg/LBA、1 mg/L NAA、20 %CM的培养基上,经4-6周的培养,每个外植体可长出2-3株小苗,小苗叶片长至2 cm左右后,又以无菌小苗叶、叶柄及茎段为外植体,在1/2 MS+10 mg/L BA+10 mg/L AD+1 mg/L GA+30 mg/L苹果酸+1 g/L蛋白胨+10 %香蕉汁的培养基诱导原球茎;香蕉汁可以减少原球茎的褐死现象并促进原球茎的增殖。     

番茄突变体jai1-1高效筛选—再生体系的建立

利用番茄野生型JAI1和通过不同浓度茉莉酸甲酯（MeJA）处理筛选得到的突变体jai1-1的子叶和下胚轴为材料进行离体组织培养,以探究不同激素组合对愈伤组织的诱导、不定芽分化及生根的影响,最后利用PCR反应验证筛选得到的材料的准确性。结果表明,1/2 MS＋50μM/L MeJA是突变体jai1-1筛选的有效培养基。野生型JAI1和突变体jai1-1在MS＋6-BA 2.0 mg/L＋IAA 0.2 mg/L诱导愈伤组织的效果最好;JAI1在MS＋ZT 1.0mg/L＋IAA 0.1mg/L诱导分化不定芽的效率最高,而jai1-1则以MS＋ZT 2.0 mg/L＋IAA 0.2 mg/L为佳;1/2 MS＋NAA 0.1 mg/L是两者诱导生根的理想培养基。     

橡胶树红根病病原菌LAMP检测方法的建立及应用

由灵芝菌（Ganoderma pseudoferreum）引起的红根病是橡胶上危害面积最广、影响最大的世界性根部传染性病害。本研究利用环介导等温扩增技术（LAMP）,以G. pseudoferreum线粒体Large rDNA特异片段为靶标序列,设计出G. pseudoferreum 特异性LAMP引物,以SYBR Green I为指示剂,建立基于颜色判断的直观、快速、灵敏的G. pseudoferreum LAMP检测方法,优化了反应体系和条件,进行了特异性、灵敏度及田间疑似病样的检测验证。结果表明：整个试验检测时间仅需80 min,在等温64 ℃条件下反应1 h能特异性检测出G. pseudoferreum;特异性检测中,G. pseudoferreum菌株扩增后呈阳性（绿色）,而其他真菌均为阴性（橙色）。该技术最低检测限为1′10^-5 ng/μL。田间疑似病样LAMP体系检测,病原检出率为85%。本研究建立的LAMP检测技术为橡胶树红根病菌的快速鉴定提供了新技术。