植物源病毒抑制剂WCT-II控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT- 直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体,经枯斑半叶法接种和电镜检测发现,处理后的病毒致病力明显下降,病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象,WCT- 对TMV的枯斑抑制率为86.6%;WCT- 处理烟草后,其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现,处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明,WCT- 不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用,而且能诱导植物产生病程相关蛋白,提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

枯草芽孢杆菌W-QX-1碱性蛋白酶的性质及其抗烟草花叶病毒活性初步研究

为发现新的天然源抗植物病毒活性物质,从枯草芽孢杆菌W-QX-1的发酵液中粗提了碱性蛋白酶,并初步测定了其抗TMV活性及其酶学性质。结果表明,W-QX-1碱性蛋白酶作用最适温度为50℃;在硼酸-硼砂缓冲液中的作用最适pH为7.8;在Tris-HCl缓冲液中的作用最适pH为8.0;在pH6~10范围内,45℃以下酶的性质稳定;对干酪素、明胶、牛血清白蛋白和精炼丝素均具有一定的降解能力,其中对干酪素的降解力最强。采用半叶法测定了其抗烟草花叶病毒TMV的活性,发现该酶对TMV的体外钝化作用明显,在酶液浓度为50 mg/L时,其钝化效果即可达到53.40%;而该酶对TMV的初侵染和体内复制增殖也具有一定的抑制能力。试验结果表明,在TMV侵染前24 h施用浓度为200 mg/L碱性蛋白酶液抑制其侵染力的效果达到50.35%,而在TMV侵染后抑制其复制增殖的作用并不明显。可见,该酶是一种性质稳定的广谱性蛋白水解酶,并具有一定的抗TMV活性。     

15种中草药抗烟草花叶病毒活性的研究

[目的]测定15种中草药提取物抗TMV的活性。[方法]利用半叶枯斑法,初筛测定15种中草药对TMV钝化作用,复筛测定其对TMV初侵染和复制增殖作用。[结果]商陆、大黄、板蓝根、金银花4种中草药表现出明显的TMV体外钝化作用,其钝化抑制率均在50%以上;复筛测定4种中草药抗TMV初侵染和复制增殖活性,大黄表现出较好的活性,且与其他3种中草药相比差异显著。盆栽试验表明,植物提取液(大黄)在100倍液下,喷雾加灌根的施药方式对烟草病毒病的防效最好,达49.00%,优于对照药剂20%吗啉胍·乙铜可湿性粉剂。[结论]15种中草药中大黄具有较优的抗TMV活性,值得进一步研究。     

烟草内源提取物抗TMV活性筛选

【目的】探讨3种烟草提取物的抗TMV活性,为开发烟草内源性抗烟草花叶病物质提供依据。【方法】利用半叶枯斑法对心叶烟、云烟203和K326三种烟草的根、茎、叶、杈甲醇提取物进行抗烟草普通花叶病毒活性筛选,并用叶盘法对部分筛选结果进行验证。【结果】3种烟草根和茎的提取物对TMV具有较明显的抑制活性,其中根对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制率范围分别为65.00%~79.75%、64.0 8%~74.31%、26.9%~42.40%,活性最强;茎的活性次之,对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制率范围分别为33.33%~44.25%、42.82%~66.06%、10.96%~47.76%。3种烟草叶和杈的提取物对TMV虽有一定的抑制活性,但较全株提取物对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制活性均降低,抑制活性不明显。【结论】3种烟草的根部粗提物具有较好的抗TMV活性,值得进一步研究。     

植物源抗病毒制剂 VA 对烟草花叶病毒(TMV)体外钝化作用的初步研究

用植物源抗病毒制剂VA与烟草花叶病毒 (TMV)混合 ,经枯斑半叶法接种 ,结果证明 ,VA对TMV有较强的体外钝化作用 ,体外钝化后的枯斑抑制率为 80 .0 % ;用苯酚氯仿法提取TMV的核酸后 ,按一定的比例与VA混合 ,经枯斑半叶法接种测得枯斑抑制率为 43.8%～ 77.9% ;TMV与VA混合后用RNase处理 ,测得侵染率为 78.6 % ,比未用RNase处理的对照降低了 2 1.4% ,由此说明VA具有一定的体外脱衣壳作用 ;又经电镜观察发现VA可使部分TMV粒体发生断裂或粗细不均、略变弯曲等畸变现象。     

植物源病毒抑制剂WCT-Ⅱ控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT-Ⅱ直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体，经枯斑半叶法接种和电镜检测发现，处理后的病毒致病力明显下降，病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象，WCT-Ⅱ对TMV的枯斑抑制率为86．6％；WCT-Ⅱ处理烟草后，其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现，处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明，WCT-Ⅱ不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用，而且能诱导植物产生病程相关蛋白，提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

香菇多糖对烟草花叶病毒的抑制作用研究

利用有机溶剂浸提法分离香菇多糖，研究了多糖对烟草花叶病毒（TMV）的体外钝化以及对烟草抗性的诱导作用。结果表明：体外钝化与多糖浓度呈正相关，当处理浓度为5．00mg／mL时，枯斑抑制率为48％。用1．00mg／mL多糖喷施烟草叶片可以产生较好的诱导抗性，枯斑抑制率为53％。进一步研究表明，多糖诱导抗性与过氧化物酶（POD）和多酚氧化酶（PPO）活性增加有关。     

植物源农药VFB抗烟草花叶病毒(TMV)活性初步研究

【目的】研究植物源农药VFB及其主要成分马齿苋(Portulaca oleraceaL.)、板兰根(Isatis Indigoti-caFort)、甘草(Glycyrrhiza uralersisFisch)等3种植物粗提物的抗病毒活性,为VFB进一步开发利用提供依据。【方法】以病毒A为对照药剂,采用半叶枯斑法测定了VFB及其主要成分马齿苋、板蓝根、甘草等3种植物粗提物对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的体外钝化作用及对TMV初侵染和增殖抑制作用,并用盆栽法研究了VFB对烟草花叶病毒病的保护和治疗作用。【结果】VFB对烟草花叶病毒(TMV)具有明显的体外钝化作用,钝化0.5,1和2 h后,其抑制率分别达到44.41%,55.62%和64.43%;对TMV的初侵染也有较好的抑制作用,在50倍剂量下,其24和48 h的抑制率分别达到54.33%和55.60%;对TMV增殖的抑制作用较差,在50倍剂量下,其24 h的抑制率为36.15%;3种植物粗提物对TMV有一定的体外钝化作用,对TMV初侵染和增殖的抑制作用较差,且均显著低于VFB。室内盆栽试验结果表明,VFB对烟草花叶病毒病有较好的保护和治疗作用,采用"喷雾+灌根"的施药方法,其14和21 d的保护效果分别达到75.00%和51.11%,治疗效果分别达到68.75%和41.67%,均显著高于对照药剂病毒A。【结论】VFB具有较高的抗病毒活性,开发利用前景良好。     

茶山海棠叶提取物对烟草花叶病毒活性的抑制效果

为烟草花叶病毒植物源农药的研发提供参考,采用半叶枯斑法测定茶山海棠叶提取物对烟草花叶病毒活性的影响。结果表明:茶山海棠叶的乙醇提取物,石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇和水相的液-液萃取物对烟草花叶病毒(TMV)活性均具有显著体外钝化效果;当各提取物浓度为10mg/mL时,其对TMV的抑制率为100.00%~64.13%;茶山海棠叶各提取物对TMV的初侵染抑制率为47.57%~18.62%,增殖抑制率为25.56%。     

6种病毒抑制剂对烟草花叶病毒的抑制作用及其机制初探

采用半叶枯斑法测定6种病毒抑制剂对烟草花叶病毒(TMV)的活体治疗、保护和钝化作用,并用半定量RT-PCR检测药剂诱导烟叶中病程相关蛋白基因PR-5的表达情况。结果表明:有效成分为宁南霉素的金珠蔬美对TMV有较高的活体治疗和保护效果,在250 mg/L时枯斑抑制率分别达到了67.24%、54.55%;关于药剂对TMV的活体钝化作用,金毒冠氨基寡糖素的抑制率最高,5 mg/L时平均抑制率为60.31%。6种药剂处理烟草K326后,PR-5基因表达呈现不同程度地上调,表明它们均能诱导烟草产生对TMV的抗性。     

26种植物提取物抗烟草花叶病毒的活性

对福建省常见的26种植物的乙醇提取物体外抑制烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的活性进行测定,发现抑制率达50%以上的有17种植物.依次用氯仿、正丁醇对这17种植物的乙醇提取物进行萃取,并分别测定各萃取物的抗病毒活性,结果表明,正丁醇萃取物的抗病毒活性最高,但去除其中鞣质后,其抗病毒活性明显降低.蟛蜞菊(Wedeliachinen sis)、大蒜(Alliumsativum)和决明(Cassiatora)3种植物的乙醇提取物对烟草叶片中的TMV增殖有明显的抑制作用.     

云南大型真菌提取物及其多糖组分对TMV的抑制作用

 对采自云南的17种大型食用真菌子实体的浸提液及其多糖组分,用半叶法在心叶烟上分别从预防(施用提取物24h后接种病毒)、钝化(提取物与病毒混合后接种)、治疗(接种病毒24h后施用提取物)3个方面进行抗TMV活性检测。结果表明,16种食用菌子实体的浸提液对TMV有较好的预防和钝化作用,预防效果最好的真菌为火碳菌,预防效果达到99.95％。火碳菌、奶浆菌、扫把菌、白奶浆菌、美味牛肝菌、黄虎掌、黄牛肝、黑虎掌、冬瓜菌、红乳菇、北风菌的水浸液对TMV的钝化效果均在80％以上。火碳菌、青杆菌等9种食用菌的多糖组分与其子实体浸提液对TMV的抑制效果相似,表明其多糖组分具有抑制TMV的主要活性成分。实验真菌的治疗效果总体不如钝化效果明显,治疗效果在70%以上的有扫把菌、黄虎掌和冬瓜菌。其中,火碳菌和黄牛肝等对TMV抑制效果较好的食用菌及其多糖可作为环保型农药及生物保健产品的开发对象。     

β-氨基丁酸保护烟草抵抗TMV侵染的研究

[目的]研究B-氨基丁酸（β-amino—butyricacid,BABA）保护烟草增强其抗烟草花叶病毒（TMV）侵染的能力。[方法]以云烟87为材料,分别用O．5、1．0、5．0、7．0、10．0mmol／L的BABA处理烟草,以喷清水为对照,统计BABA对TMV的抑制率,筛选最适BABA浓度。用5．0mmol／LBABA喷施处理,观察烟叶的发病情况,同时用组织化学法鉴定BABA诱导烟草产生的过敏反应,进行H202原住检测以及苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性测定,采用SDS．PAGE检测病程相关（PR）蛋白。[结果]BABA处理后能显著诱导氧进发,引起过敏性反应,烟叶中的PAL活性升高,有分子量为20kDa的PR蛋白出现。烟叶TMV发病率明显减轻,BABA增强了烟草对TMV的抗性,5．0mmol／LBABA能保护烟草抵抗TMV侵染。[结论]为进一步揭示BABA的诱导机理提供了理论依据。     

入侵植物紫茎泽兰的抗烟草花叶病毒活性研究

为综合治理及利用入侵植物紫茎泽兰,采用半叶枯斑法研究了紫茎泽兰不同部位提取物的抗烟草花叶病毒活性.结果表明,根、茎、叶和花的提取物均具有一定的抗烟草花叶病毒活性.其中,根、茎、叶提取物的活性较强,当浓度为10 mg/mL时均显示了中等的抑制活性,抑制率为50％左右;花提取物的活性相对较弱.这是首次对紫茎泽兰的抗烟草花叶病毒活性进行报道,扩展了植物源TMV抑制剂筛选的范围,为综合利用入侵植物紫茎泽兰提供了更广阔的思路.     

花脸香蘑菌丝体发酵条件优化研究

[目的]优化花脸香蘑菌丝体发酵条件。[方法]研究花脸香蘑菌丝体发酵中碳源、氮源、pH、时间对菌丝干重的影响。[结果]培养条件中对花脸香蘑菌丝体生长影响的顺序为:碳源>时间>pH>氮源。通过正交优化试验确定了花脸香蘑菌丝体液体最佳发酵条件为:玉米粉3%、酵母膏0.2%、pH值6.0、培养时间8 d。[结论]该研究结果为开发利用花脸香蘑生物资源提供了理论参考和试验依据。     

贝莱斯芽孢杆菌LJ02中植物免疫蛋白的筛选及其功能

【目的】贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）LJ02菌株能够诱导黄瓜等植物产生免疫抗病反应。本研究从生防菌LJ02中分离鉴定具有激发植物免疫活性的蛋白分子,通过验证其功能,进一步解析免疫蛋白的免疫信号通路。【方法】用硫酸铵沉淀法处理LJ02菌株发酵液,离心获得LJ02蛋白粗提物,将其经凝胶层析后再利用半制备高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）分离,收集不同峰值处的蛋白组分。以烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus,TMV）为靶标进行活性组分的筛选,从而获得具有免疫活性的组分。液相质谱联用仪（LC-MS）检测分析活性组分后发现,在组分F-23中含鞭毛蛋白（flagellin,Flg^LJ02）。将鞭毛蛋白Flg^LJ02进行原核表达并纯化,经过敏性坏死反应（hypersensitive reaction,HR）和抗病试验验证其免疫功能。为确定其主要免疫信号通路,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测水杨酸（salicylic acid,SA）和乙烯（ethylene,ET）途径的相关合成酶基因ICS1、PAL、ACS1以及免疫相关抗性基因NPR1、PR-1、EIN2和EIN3,通过免疫相关抗性基因的相对表达量解析鞭毛蛋白Flg^LJ02免疫信号转导途径。【结果】HPLC层析分离出贝莱斯芽孢杆菌LJ02菌液产生的60个外泌蛋白组分（F-1—F-60）,免疫烟草接种TMV后,观察分析发现组分F-20、F-23、F-41、F-44具有显著的免疫抗病效应,其中组分F-23抗TMV效果最为显著,其抑制率为81.7%。经过质谱数据分析发现该组分包含鞭毛蛋白Flg^LJ02等7种物质。选择鞭毛蛋白Flg^LJ02为研究对象构建表达载体,转化大肠杆菌BL21,诱导表达后破碎细胞,获得粗提蛋白。将粗提蛋白过柱、透析纯化后的Flg^LJ02渗入珊西烟（Nicotiana tabacum var. xanthi）叶片,24 h后能观察到过敏性坏死反应。将Flg^LJ02稀释为终浓度50、100、200 μg·mL ^-1的稀释液后预处理珊西烟叶片,24 h后接种TMV,其对TMV的枯斑抑制率分别为65.6%、76.1%、88.1%。用鞭毛蛋白Flg^LJ02处理珊西烟,其SA途径和ET信号途径的免疫抗病相关基因ICS1、PAL、NPR1、PR-1、ACS1、EIN2、EIN3的相对表达量在24—48 h均显著上调。【结论】贝莱斯芽孢杆菌LJ02外泌的鞭毛蛋白Flg^LJ02可以激发珊西烟植株的免疫防御反应,提高烟草植株对TMV的抗病性。     

食用菌提取物对烟草花叶病毒的抑制作用

 从钝化(提取物与病毒混合后接种)、预防(施用提取物24 h后接种病毒)、治疗(接种病毒24 h后施用提取物)3个不同时期,在心叶烟上测试了8种食用菌乙醇提取物水溶液对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)的抑制作用。试验结果表明：8种食用菌提取物在体外都具有钝化病毒(TMV)及抑制病毒(TMV)侵染的作用；除鸡油菌(Cantharellus minor Peck)外，其它7种食用菌提取物对TMV有不同程度的治疗作用。     

茸毛基因和Tm－2nv及其重组基因型对番茄病毒病抗性的研究

茸毛、Tm-2nv重组基因型对病毒病的抗性调查结果表明:重组基因型间的病毒病抗性存在极显着差异,茸毛基因能极显着地降低病毒危害,而Tm-2nv各基因型间的病情指数却无显着差异.1993年秋季大田生态条件下,番茄病毒病危害潜力达63.48%,其中CMV、TMV分别约占67.7%和32.3%.CMV和TMV危害程度的相对大小是制订Tm-2nv和茸毛基因综合利用方案的重要依据,当CMV占主导地位时,主要以茸毛基因利用为宜.     

烟草种质资源TI203对烟草花叶病的抗性特点

[目的]系统了解烟草种质资源TI203抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的特点,为烟草抗病育种的亲本选择提供更丰富信息.[方法]以烟草种质资源TI203为材料,采用TMV病毒接种、病情调查、病毒外壳蛋白累计量检测、TMV复制水平测定及日灼现象观察等方法,研究TI203对TMV的抗性特异性、TI203接种TMV普通株系(TMV-U1株系)后的症状、病毒复制水平等.[结果]TI203只对TMV表现无症状的抗病特点,接种马铃薯Y病毒(PVY)和黄瓜花叶病毒(CMV)则表现出典型症状.接种TMV-U1株系后14 d,Western blotting检测结果显示,TI203叶片病毒复制水平明显低于对照品种;用表达GFP的TMV侵染性克隆浸润接种发现,TI203对TMV的抗性发生在病毒复制水平.在高温和强日照条件下,TI203生长迅速的中上部叶片会发生日灼现象,且难以恢复.[结论]TI203只对TMV表现无症状,其对TMV的抗性发生在病毒复制水平.     

花脸香蘑菌丝体生长特性研究

采用液体和平板培养法对花脸香蘑菌丝体的生长特性进行了研究。结果表明:玉米粉是花脸香蘑菌丝生长适宜的碳源,浓度在3%时菌丝长势好,长速可达9.2 mm/d;蛋白胨和酵母膏氮源是最佳氮源,适宜浓度为0.3%,长速可达8.2～8.4 mm/d;菌丝生长最适温度为25℃;最适pH为6。