马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

PCR法检测血清I型马立克氏病病毒及其敏感性试验的研究

以人工合成的针对血清Ｉ号马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）Ａ抗原基因（ｇＡ）部分序列的两端寡聚核苷酸为聚合酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对马立克氏病病毒血清Ｉ型（京－１株，ＭＤ１１／７５Ｃ株）；２型（ＳＢ－１株）；３型（火鸡疱疹病毒的ＦＣ１２６株）毒株和ＧＡ株ＢａｍＨＩ Ｂ片段的ＰＡＣＹ１８４克隆重组质粒ＤＮＡ进行基因扩增反应及其敏感性试验。结果表明，该引物不仅对ＭＤＶ１具有较强的特异性，而且由此引物引导     

马立克氏病毒单克隆抗体的制备及应用

用ＭＤ１１／７５ｃ，ＳＢ１，ＨＶＴＦＣ１２６三个马立克氏病毒株分别兔疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，获得１０株分泌抗马立克氏病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＦＭ３，ＦＭ１７，ＦＭ２４，ＦＭ２８，ＦＭ４２，ＦＭ４５，ＦＭ５２，ＦＭ５３，ＦＭ５４，ＦＭ１５９。这些单克隆抗体都具有免疫萤光反应特性，其腹水抗体的ＦＡ效价为１０＾３－１０＾５，其中ＦＭ３，ＦＭ４２，ＦＭ５３，ＦＭ１５９等单抗具有ＥＬＩＳＡ特性，     

马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白D基因的分离克隆,定序及其在大肠杆…

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白（ｇＤ）抗原基因１２０９ｂｐ编码序列。将该ＰＣＲ扩增产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎⅠ位点克隆进行ｐＵＣ１８质粒载体中。将ｇＤ重组ｐＵＣ１８质粒ＤＮＡ用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（Ｄｉｇ）标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的Ｂａｍ ＨＩ－Ａ克隆中的Ａ     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）弱毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＭＤＶ弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒（ＦＰＶ）,鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）,ＭＤＶ强毒Ｆ４８Ｅ８株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别ＮＤＶ弱毒株。     

牛病毒性腹泻病毒现地分离株与疫苗株的抗原差异

用单克隆抗体（ＭＡｂ）作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、免疫荧光试验（ＩＦＡ）、病毒中和（ＶＮ）试验及兔疫沉淀试验证明了牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）致细胞病变株８７－２５５２（现地分离）与ＮＡＤＬ和Ｓｉｎｇｅｒ（原型株）之间的抗原差异。两个抗ＢＶＤＶ８７－２５５２株的ＭＡｂ（Ｄ１１和Ｂ７）能强烈中和现地分离株，并对该病毒的４８－ＫＤａ糖蛋白呈特异性。这两个ＭＡｂ有不同的亚型，Ｄ１１为免疫球蛋白Ｇ１     

MDVgB对鸡白细胞的粘着作用及其抗病毒免疫原性

用抗马立克氏病病毒囊膜糖蛋白Ｂ（ＭＤＶｇＢ）的单抗ＩＡＮ８６作间接免疫荧光试验表明，在昆虫细胞中表达的重组ｇＢ基因产物能识别和粘着于鸡的部分淋巴细胞和巨噬细胞表面。抗重组ｇＢ的鸡血清在鸡成纤维细胞培养上对ＭＤＶ的中和效价为１∶８～１∶１６。经用能表达ＭＤＶｇＢ基因的重组杆状病毒感染的昆虫Ｓｆ９细胞免疫的鸡，能抵抗ＭＤＶ强毒株引起的急性死亡，但对ＭＤＶ引起的后期死亡和肿瘤发生率影响不大     

提纯的马立克氏病肿瘤相关表面抗的在鸡体内的免疫应答

应用本瓜蛋白酶消化法，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）人工感染鸡的淋巴细胞瘤表面提取马立克氏病相关肿瘤表面抗原（ＭＡＴＳＡ）。所获得的抗原与从肿瘤细胞表面洗脱的抗ＭＡＴＳＡ抗体在ＥＬＩＳＡ中呈阳性反应。将这种抗原与白油佐剂乳化，给２０日龄鸡肌注免疫３次，应用间接ＥＬＩＳＡ对被免疫鸡的ＭＡＴＳＡ抗体进行了监测。结果表明，免疫前正常鸡的血清中无ＭＡＴＳＡ抗体存在，而用这种抗原免疫后１０天即可形成抗体应答，Ｅ     

表达马立克氏病病毒CV1988／Rispens糖蛋白B重组鸡痘病毒的免？…

用表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ（Ｉ型疫苗株ＣＶ１９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因的重组鸡痘病毒（ｒＦ－ＰＶ－ｇＢ／Ｒ）和鸡痘病毒（ＦＰＶ）疫苗株２８２Ｅ４免疫１日龄不同品种的鸡,来评价２种病毒株的安全性及免疫母源抗体的商品是我毒性,而对无毒源抗体的ＳＰＦ鸡的毒性则不同。斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交产,ｆＦＰＶ－ｇＢ／Ｒ中无氨苄青霉素的抗性基因。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒变异株的比较研究

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）变异株Ｈ９５提纯样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ,证明Ｈ９５株单抗ＤＥ７和Ｍ４１株单抗６ＤＨ８均能识别Ｈ９５株５４０００蛋白多肽。采用单抗、多抗介导间接ＥＬＩＳＡ试验表明,Ｈ９５毒株能与抗ＩＢＶＭ４１Ｎ蛋白单抗６ＤＨ８和ＩＢＶＭ蛋白单抗ＭＣ发生反应,也能与抗Ｍ４１、Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ、Ｔ、Ｈ５２、Ｎ１１５和分离株Ｃ９００１、ＤＬＺ９１１１的多抗血清反应,同时抗Ｈ９５株的４株单抗、多抗血清也能与上述毒株反应。卵磷脂酶Ｃ处理的Ｈ９５株的血凝活性能被相应的Ｈ９５株的单克隆抗体和高免血清所抑制,也能被Ｍ４１单抗和高免血清所抑制。通过ＲＴ－ＰＣＲ获得了Ｈ９５毒株的免疫原基因Ｓ１,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＩＢＶ的Ｓ探针检测呈阳性。     

单抗ELISA在鸡传染性支气管炎病毒分型中的应用

用８株抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）结构蛋白单克隆抗体（Ｍａｂ），以单抗ＥＬＩＳＡ法检测澳大利亚不同年代分离的１６株ＩＢＶ。结果表明，系列单抗对ＩＢＶ分型有一定意义。方法简便特异     

鸭乙型肝炎病毒的致病性及致癌性研究

以５Ｂ８株抗ＤＨＢｓＡｇ特异性单克隆抗体作为包被抗体和酶标抗体，首次建立了检测血清中ＤＨＢｓＡｇ的单抗夹心ＥＬＩＳＡ，对纯化ＤＨＢｓＡｇ的最小检出量为１０ｎｇ／ｍｌ，对雏鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒等９种禽类常见的病毒病抗原及人乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）均不发生反应，且能被多克隆的兔抗ＤＨＢｓＩｇＧ及５Ｂ８株单抗本身所阻断。应用本试验方法调查江苏省部分地区麻鸭ＤＨＢＶ的感染率分别为：高邮２４．５％、常     

马立克氏病疫苗免疫鸡群强毒攻击后羽囊排毒情况

分别以血清型Ⅱ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ）疫苗株（Ｚ４、ＳＢ１）、血清Ⅲ型火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗株（ＦＣ１２６）及二价疫苗（Ｚ４＋ＦＣ１２６、ＳＢ１＋ＦＣ１２６）免疫鸡群，用琼脂扩散试验（ＡＧＰＴ）检查各鸡群ＭＤＶ强毒攻击后不同时期的羽囊抗原。结果，二价苗能使试验鸡羽毛囊强毒排出高峰推迟，排毒率显著下降。     

抗鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及在诊断上的应用

鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化；电镜观察，以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６，９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞，特异性试验表明经闪与鸡的传染性支气管炎，痘病毒，新城疫病毒马立克氏病病毒，白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得三株单抗建立单     

蓝舌病病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

以纯化的蓝舌病病毒（ＢＴＶ）１１型ＶＰ７免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,动用淋巴细胞杂交瘤技术,借助间接ＥＬＩＳＡ筛选,获得了３株分泌抗ＢＴＶ１１ ＶＰ７的群特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株,命名为Ｃ１２Ｄ９、Ｂ４Ｆ３、Ｅ１Ａ７。这３株杂交瘤细胞株连续传代３个月再经液氮冻存６个月后复苏培养,仍能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。３株ＭｃＡｂ均具有ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性,其中Ｃ１２Ｄ９株上清液的ＥＬＩＳ     

鸡马立克氏病活疫苗免疫效力比较试验

用ＨＶＴ冻干苗、ＨＶＴ细胞结合苗、ＣＶＩ９８８细胞结合苗、ＳＢ１＋ＦＣ１２６双价活疫苗、３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６双价活疫苗和Ｚ４＋ＦＣ１２６双价活疫苗等６种鸡马立克氏病（ＭＤ）疫苗免疫ＳＰＦ白来航鸡或普通伊莎鸡，用鸡马立克氏病病毒（ＭＤＶ）强毒ＧＡ株、京－１血毒以及鸡马立克氏病超强毒ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ５毒株分别攻击进行免疫效力比较试验。试验表明，ＭＤ单价苗的免疫效力强弱顺序依次是ＣＶＩ９８８、ＨＶＴ细胞结合苗和ＨＶＴ冻干苗，这３种ＭＤ单价苗均能给免疫鸡群提供有效的免疫保护力。ＳＢ１＋ＦＣ１２６、Ｚ４＋ＦＣ１２６和３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６等３种ＭＤ双价苗免疫效力显著高于ＭＤ单价苗，均能给免疫鸡群提供较强的免疫保护力，并能有效地抵抗ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ５毒株的致瘤作用。Ｚ４＋ＦＣ１２６和３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６ＭＤ双价苗免疫效力无显著差异     

抗牛病毒性腹泻/粘膜病病毒单克隆抗体的抗原结合位点分析

用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的特性研究

应用杂交瘤技术获得了１３ 株抗传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 的单克隆抗体（ ＭｃＡｂ） ,经过检测其中有９ 株ＭｃＡｂｓ 为ＩｇＧ 类, ４ 株为Ｉｇ Ｍ , 这些ＭｃＡｂｓ 与新城疫病毒（ＮＤＶ） 、传染性支气管炎病毒 （ＩＢＶ） 和马立克氏病病毒（ ＭＤＶ） 均无交叉反应, 病毒中和试验表明, 有５株ＭｃＡｂｓ 具有中和活性,Ｗｅｓｔｅｒｎ － ｂｌｏｔｔｉｎｇ 试验表明, 这５ 株有中和活性的ＭｃＡｂｓ 识别的抗原位点在ＶＰ２ 。传染性法氏囊病最早于１９５７ 年发现于美国东部特拉华州的甘博罗（Ｇｕ ｍ ｂｏｒｏ） 地区,１９６２ 年由Ｃｏｓｇｒｏｖｅ 首次报道, 此后该病相继在全世界许多国家和地区广泛流行。本试验对通过淋巴细胞杂交瘤获得的１３ 株单克隆抗体进行了生物学特性鉴定, 以期应用于对ＩＢＤ 的研究, 现将试验情况报告如下。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。