重组白介素-2增强口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究

通过研究重组白细胞介素-2（IL-2）对口蹄疫病毒（FMDV）多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为 FMDV 表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性 Balb／c 小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪 IL-2的重组腺病毒（rAd5poIL-2）和串联表达 FMDV 多表位基因的重组腺病毒（rAd5EGS）,第2、3和4组分别注射 rAd5EGS、灭活疫苗和 PBS,间隔2周免疫1次,共免疫3次。首免后每周采血分离小鼠血清,通过 ELISA 检测血清中特异性 IgG;首免后6周检测血清中抗体亚型 IgG1、IgG2a 及细胞因子 IL-4和 IFN-γ的表达水平,同时分离脾细胞,MTT 法检测淋巴细胞增殖指数。结果显示,联合免疫 rAd5poIL-2和rAd5EGS 既能增强 rAd5EGS 诱导小鼠特异性 IgG、IgG1和 IgG2a 的分泌,又能增强其诱导淋巴细胞增殖能力,且免疫效果强于灭活疫苗;细胞因子检测结果显示,联合免疫 rAd5poIL-2后能增强 rAd5EGS 诱导小鼠 IL-4和 IFN-γ的分泌,且其诱导 IL-4和 IFN-γ分泌能力也强于灭活疫苗。说明重组 IL-2能有效增强FMDV 多表位疫苗诱导抗体分泌能力和细胞免疫应答,rAd5poIL-2有望作为 FMDV 表位疫苗的候选佐剂。     

口蹄疫油乳剂疫苗中添加人参茎叶皂甙对免疫效果和黏滞性的影响

将人参茎叶皂甙(GSLS)和油佐剂混合,然后再与口蹄疫病毒(FMDV)抗原乳化制成口蹄疫疫苗.将FMD疫苗皮下二次免疫小鼠后,检测血清特异性IgG水平、脾脏淋巴细胞增殖指数(SI),脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4mRNA表达水平,并测定GSLS对疫苗黏滞性的影响.结果表明,用200 μL的FMD疫苗免疫小鼠,显著促进小鼠产生以4μg组产生最高水平的IgG(P＜0.05)；与对照组比较,添加GSLS后脾淋巴细胞对ConA和LPS增殖指数,IFN-γ和IL-4mRNA表达也显著增高(P＜0.05)；吐温浓度为1.0％和1.5％时,添加GSLS能显著降低疫苗的黏滞性(P＜0.05).因此,在FMD疫苗中添加GSLS能提高机体的体液免疫和细胞免疫应答,降低疫苗黏滞性.     

猪圆环病毒2型感染对猪瘟弱毒疫苗接种猪免疫应答的影响

为探索猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪瘟(CSF)弱毒疫苗接种猪免疫应答的影响,将20头28 d断奶仔猪随机分为V-I、I-V、V和C4组,5头·组-1.V-I组在接种CSF弱毒疫苗后2d感染PCV2;I-V组在感染PCV2 后2d接种CSF弱毒疫苗;V组只接种CSF弱毒疫苗;C组为空白对照组.共免疫2次,间隔21 d.免疫后定期检测血清CSFV特异性抗体水平、外周血淋巴细胞(PBLC)增殖活性和PBLC中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的表达水平.结果显示:在CSF弱毒疫苗免疫前或免疫后感染PCV2,均会导致CSFV抗体水平低下,血清抗体阳转率下降,PBLC增殖活性降低.初次免疫后,V-I与I-V组的PBLC内IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的表达量严重不足,其中V-I组的表达量最低.加强免疫后V-I与I-V组的PBLC内IFN-γ与IL-10的表达失衡,IL-2和IL-4的表达缺乏,其中I-V组的细胞因子表达失衡和缺乏更严重.上述研究表明,CSF弱毒疫苗免疫前或免疫后感染PCV2均会影响机体的体液和细胞免疫应答水平,导致PBLC内细胞因子的表达严重抑制和紊乱.     

蜂胶对猪细小病毒灭活疫苗佐剂作用的试验

68只豚鼠随机均分为4组,1³组分别免疫蜂胶、铝胶和油佐剂PPV疫苗,第4组为空白对照组,注射等量生理盐水。免疫后不同时间点采集血清分析特异性血凝抑制抗体效价评价蜂胶佐剂对免疫豚鼠体液免疫的影响,测定淋巴细胞增殖、IL-2和IL-4含量评价蜂胶佐剂对免疫豚鼠细胞免疫的影响。结果表明,蜂胶、油佐剂和铝胶3种佐剂均能提高豚鼠对PPV灭活疫苗的免疫应答能力,油佐剂提高血清HI抗体效果较好,其次为蜂胶佐剂,再次为铝胶佐剂。蜂胶佐剂促进T淋巴细胞增殖和提高IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ含量效果优于油佐剂和铝胶佐剂。结论:蜂胶能增强PPV灭活疫苗的免疫效果。     

铜绿假单胞菌flg E基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果评估

为评价铜绿假单胞菌flgE基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果，本研究经PCR扩增flgE基因，将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中，构建flgE基因的重组质粒pflgE，进一步以壳聚糖为佐剂制备了纳米DNA疫苗CpflgE，通过测定OD260nm值检测纳米DNA疫苗的包封率、加入DNA酶后经琼脂糖凝胶电泳检测其抗DNA酶降解的能力、37℃恒温静置1 d,3 d和5 d后经琼脂糖凝胶电泳检测稳定性。结果显示CpflgE的包封率为94.69%，可有效抵抗DNaseⅠ的降解，具有较强的稳定性。以pflgE和CpflgE免疫BALB/c小鼠，共免疫3次，同时设置灭活疫苗免疫组、铜绿假单胞菌鞭毛蛋白亚单位疫苗免疫组以及PBS对照组。免疫后不同时间经间接ELISA测定各组小鼠血清抗体水平，MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平，采用检测试剂盒测定各组小鼠血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的水平。结果显示，Cpflg E诱导小鼠的血清抗体水平、脾淋巴细胞增殖水平及血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的浓度总体上虽均低于灭活疫苗，但与鞭毛蛋白亚单位疫苗相当，且显著高于pflgE (P<0....     

抗鸭传染性浆膜炎中药组方对鸭免疫功能的影响

在成功筛选出防治鸭传染性浆膜炎效果较好的中药组方P基础上,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测21日龄雏鸭外周血淋巴细胞(PBMC)IFN-γ和IL-6 mRNA的表达水平,研究该组方对鸭只免疫器官的影响。结果表明,P1组(预防组)鸭脾脏指数和胸腺指数显著或极显著高于y组(阳性对照组)与K组(健康对照组)(P0.05;P0.01),P2组(治疗组)鸭脾脏指数和胸腺指数极显著高于K组(P0.01);P1组极显著提高鸭外周血淋巴细胞IFN-γ mRNA的表达量(P0.01);P2组显著提高IFN-γ mRNA的表达量(P0.05);P1组、P2组IL-6 mRNA的表达量有升高的趋势(P0.1)。说明组方P能促进机体免疫器官的发育和分泌IFN-γ及IL-6,提高机体抗病力和免疫调节能力。     

猪圆环病毒核酸疫苗pcDNA-PCV-ORF2-ISS的构建及分子佐剂联合免疫研究

用PCR方法扩增猪圆环病毒PCVwhn株编码CAP蛋白的基因ORF2,同时人工合成一段CpG序列,并设计上下游引物,进行扩增,定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建新型核酸疫苗(pcDNA-PCV-ORF2-ISS),并进行了酶切和测序鉴定.用构建的pcDNA-PCV-ORF2-ISS质粒以及pcDNA-PCV-ORF2与5种细胞因子分子佐剂质粒(IL-6/4、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ真核表达质粒)联合对仔猪进行免疫试验.免疫后用间接ELISA法测定猪圆环病毒Ⅱ型特异性抗体IgG,用流式细胞仪测定猪血液CD3+、CD4+和CD8+T细胞亚类的数量.结果显示,成功构建含CpG免疫刺激序列的猪圆环病毒Ⅱ型核酸疫苗;pcDNA-PCV-ORF2-ISS在仔猪免疫实验能诱导细胞免疫并产生特异性抗体(P<0.05);用5种细胞因子分子佐荆质粒与pcDNA-PCV-ORF2疫苗同时免疫能显著提高DNA疫苗的免疫效果(P<0.05).分子佐剂免疫增强效果次序为:IL-6、CpG、IL-6/4、IL-2、IL-4和IFN-γ,表明IL-6和CpG最佳.     

铜绿假单胞菌flgE基因菊粉季铵盐纳米DNA的制备与免疫效果研究

为提高铜绿假单胞菌flgE基因DNA疫苗的免疫效果,本实验对菊粉进行阳离子化后获得带正电荷的菊粉季铵盐,以其包裹裸DNA疫苗后制备成菊粉季铵盐纳米DNA疫苗,结果显示,flgE基因壳菊粉季铵盐纳米DNA疫苗在扫描电镜下呈现较为规则的圆球型,粒径100 nm～200 nm。以裸DNA疫苗和菊粉季铵盐纳米DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,同时设置灭活疫苗、pcDNA3.1(+)空载体和PBS对照组。免疫1周时经断尾采血并分离血清,采用间接ELISA检测免疫后血清特异性抗体水平,结果显示小鼠免疫后菊粉季铵盐纳米DNA疫苗诱导的血清抗体水平虽低于灭活疫苗,但明显高于裸DNA疫苗(p0.05)。同时每次免疫2周后,每组各随机取5只小鼠分离制备脾淋巴细胞悬液,采用MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,双抗夹心ELISA测定脾淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-2的水平,结果显示,纳米DNA疫苗组小鼠的刺激指数(SI)及脾淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-2含量与灭活疫苗组相当,显著高于裸DNA疫苗组(p0.05)。三免2周后以1.8×1010cfu/只铜绿假单胞菌CAU0792菌液攻击各组小鼠,且计算存活数及保护率,结果显示灭活疫苗组、菊粉季铵盐纳米DNA疫苗组和裸DNA疫苗组的保护率分别为90%、75%和55%,表明菊粉季铵盐可增强裸DNA疫苗诱导的免疫应答水平和保护效果。本实验首次将菊粉进行季铵盐化后使其带有正电荷,有利于结合DNA分子形成纳米颗粒,从而增强了DNA疫苗的免疫原性,为铜绿假单胞菌DNA疫苗的研制及新型DNA疫苗佐剂的开发奠定了基础。     

抗鸭传染性浆膜炎中药组方对鸭免疫功能的研究

在成功筛选出防治鸭传染性浆膜炎效果较好的中药组方P基础上,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测21日龄雏鸭外周血淋巴细胞（PBMC）IFN-γ和IL-6 mRNA的表达水平,研究该组方对鸭只免疫器官的影响。结果表明,P1组（预防组）鸭脾脏指数和胸腺指数显著或极显著高于y组（阳性对照组）与K组（健康对照组）（P〈0.05;P〈0.01）,P2组（治疗组）鸭脾脏指数和胸腺指数极显著高于K组（P〈0.01）;P1组极显著提高鸭外周血淋巴细胞IFN-γ mRNA的表达量（P〈0.01）;P2组显著提高IFN-γ mRNA的表达量（P〈0.05）;P1组、P2组IL-6 mRNA的表达量有升高的趋势（P〈0.1）。说明组方P能促进机体免疫器官的发育和分泌IFN-γ及IL-6,提高机体抗病力和免疫调节能力。     

ZE515对CP5型金黄色葡萄球菌疫苗的佐剂作用

前期研究表明一种含人参皂甙的植物油佐剂ZE515对口蹄疫疫苗具有佐剂作用,本研究探讨该佐剂对荚膜多糖CP5型金黄色葡萄球菌(S.aureus)疫苗的佐剂作用。将ZE515和灭活的金黄色葡萄球菌抗原乳化制备成疫苗,ICR小鼠皮下注射疫苗免疫2次,二免后3周采血制备血清,检测血清抗体及其亚类、细胞因子IL-5和IFN-γ,取脾脏检测淋巴细胞增殖指数(SI),并对免疫鼠腹腔注射S.aureus活菌进行攻毒保护性试验。结果显示,ZE515能显著增强抗体及其亚类的免疫应答(P0.05),提高淋巴细胞增殖指数(P0.05),提升血清IL-5和IFN-γ表达水平(P0.05)。ZE515对S.aureus疫苗的佐剂作用显著强于常规铝胶佐剂,含ZE515的疫苗对S.aureus强毒攻毒的保护率为75%,而含铝胶佐剂的疫苗保护率只有50%,表明ZE515对S.aureus疫苗具佐剂作用,值得进一步研究。     

H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较及其表面基因序列分析

选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(缩写为SS株)和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIVA/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)(缩写为F株)为研究对象,对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性比较后发现,F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株,F株可以经气溶胶传播途径传播,SS株不能经气溶胶传播途径传播;利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获取F株和SS株的HA和NA基因的cDNA,序列分析得知,F株和SS株的HA和NA基因的同源性分别是96.6%和98.1%;HA基因的裂解位点氨基酸序列都是PARSSR↓GL,但有5个氨基酸的差异,即166位N(F)→D(SS)、198位A(F)→V(SS)、217位V(F)→I(SS)、335位G(F)→R(SS)、504位L(F)→S(SS);2株病毒的NA基因在63~65位都存在氨基酸缺失,但在NA基因红细胞吸附位点的氨基酸序列不同,分别是IKKDSRSG(F)和IKEDLRSG(SS)。F株和SS株的传播特性差异是否与其表面基因序列有关,有待进一步研究。     

乡土灌草青贮与牛羊健康饲喂研究进展与展望

本文系统地回顾了近60年以来国内外乡土灌草青贮利用与牛羊健康饲喂的研究现状与进展。通过对已有研究文献的年度分布、研究内容与研究区域进行分析,结合饲草青贮技术领域、草食畜牧业领域以及社会发展的背景,将乡土灌草青贮与牛羊健康饲喂划分为3个阶段,20世纪50年代到80年代末期为萌芽阶段、20世纪80年代末期到21世纪初期为缓慢增长阶段、21世纪初期至今为快速增长阶段。其次,根据研究内容从理论研究、监测评价、技术示范、技术研发4个方面进行归纳总结,分析了各分支领域的主要成果与关键问题,提出下阶段应重点研究的内容,应加强对乡土灌草饲料生产与牛羊健康饲喂的研究,综合提高饲料能量与蛋白质的利用率,尽可能改善牛羊的能氮平衡,促进畜牧业和饲料加工业的发展。     

猪葡萄球菌EXHC、SHETA基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测

为分析猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因结构并预测其所编码蛋白的结构和功能,本试验根据GenBank已报道的猪葡萄球菌脱落毒素EXHC和SHETA基因序列分别设计了1对特异性引物,从猪葡萄球菌GDZC株中扩增获得EXHC和SHETA基因片段,大小分别为1007和971 bp。序列分析结果表明,EXHC基因与猪葡萄球菌丹麦分离株(GenBank登录号:AF515455)及猪源松鼠葡萄球菌河北分离株(GenBank登录号:JF755400)的核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为100.0%,而与其他葡萄球菌脱落毒素基因的核苷酸、氨基酸序列同源性分别为3.3%~53.9%和7.9%~44.2%。SHETA基因与日本分离株(GenBank登录号:AB036768)的核苷酸序列同源性为96.2%,氨基酸序列同源性为98.4%,在保守区共有31个碱基发生突变。利用DNAStar软件对EXHC和SHETA蛋白结构进行分析,结果显示EXHC基因编码的蛋白为亲水性蛋白,SHETA基因编码蛋白为疏水性蛋白,抗原性较差。本研究从猪葡萄球菌GDZC株中成功扩增获得EXHC和SHETA基因片段并对其编码的蛋白结构进行了预测,证实了中国分离的猪葡萄球菌同时携带有EXHC和SHETA 2种毒素基因,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及毒素之间的相互作用提供了理论依据。     

秦川牛种质资源保护利用、存在问题及对策建议

秦川牛因原产于陕西八百里秦川而得名,具有体躯高大、遗传稳定、适应性强、肉用性能好等特点,是我国著名的地方品种和国家级资源保护品种,是肉牛新品种培育和产业化发展的基础.文章介绍了秦川牛种质资源保护利用情况和取得的成效,并针对当前存在的问题提出了相应的对策和建议,以期对秦川牛种质资源的保护和开发提供科学指导,推动肉牛产业的健康发展.     

果洛州草地鼠虫害情况及防治措施

１９９６年的调查，果洛州草地鼠虫害面积约为２４７．６万ｈｍ２，因鼠害每年损失牧草约１５９８．７万ｔ，相当少养１０９５．０１万羊单位。近１０年来使用Ｃ型肉毒梭菌毒素灭治取得很大成绩，累计灭治面积达到１８３．１万ｈｍ２。     

蓝舌病病毒基因和蛋白的特点及利用

蓝舌病病毒是引起绵羊、牛蓝舌病的病原.该病毒是一种结构复杂的RNA病毒,对其分子生物学特性的研究,可以阐明其致病机制和遗传学规律,有助于蓝舌病预防治疗的研究.国内对该病毒的研究起步较晚,本文简述了蓝舌病病毒基因结构和蛋白特点及对其的利用,为预防及治疗提供参考.     

呕吐毒素和玉米赤霉烯酮的理化及毒理特性分析

由于谷物中含有真菌的有毒次生代谢物霉菌毒素,其对动物的健康、生产性能及动物源性食品的质量可能有负面影响,这对动物营养是一个永久性的挑战。因此,本文综述了霉菌毒素在动物营养中存在的问题、对易感动物的影响以及应对谷物感染毒素污染的管理策略。     

狐貉自咬症疾病行为观察及防治技术试验

通过观察狐貂自咬症疾病行为特点,分析发病原因,传播途径,及时诊断治疗,以提高狐,貉养殖的经济效益。     

胭脂虫开发利用的研究及前景展望

系统阐述了胭脂虫分类、生物生态特性、人工繁养、胭脂虫红色素的性质及加工利用、胭脂虫产业的发展等,并对其开发应用前景进行了展望。