盾壳霉在贵州首次收集及研究初报

采用土壤稀释平板分离法和土壤诱捕法从贵州省7个地区14个县(市)的110份土壤样品中分离得到25株菌株,其中真菌15株、细菌10株.经初步鉴定,与核盘菌菌核有一定颉颃作用的有小盾壳霉(Coniothyrium minitans)、镰孢属(Fusarium spp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、交链孢属(Allternaria spp.)、青霉属(Penicillium spp.).分离结果表明,在贵州省盾壳霉主要分布于高海拔、潮湿、常年温度较低的地区,有一定的地域性.     

用于虫生真菌遗传转化的苯菌灵抗性菌株筛选

发展虫生真菌的抗药性是协调生防与化防,稳定真菌杀虫剂应用效果的一个重要策略。本研究从代表性地区采集植物病原样本,分离得到35株菌株,鉴定为3属5种,即灰葡萄孢霉Botrytis cinerea、扩展青霉Penicillium expansum、指状青霉Penicillium digitatum、长柄链格孢菌Alternaria longipes和茄链格孢菌Alternaria solani。应用菌落直径法测定其对苯菌灵的抗性,结果表明：供试的11株灰葡萄孢霉菌株中,最高EC50为936.2670μg·mL^-1;12株青霉属菌株中,最高EC50为0.0384μg·mL^-1;12株链格孢菌株中,最高EC50为703.5557μg·mL^-1。其中灰霉和链格孢属菌株中有4株EC50大于600μg·mL^-1的高抗菌株,即灰葡萄孢霉的菌株SD2和SD1以及茄链格孢的菌株CC2-2和LF1-2,这4株菌株可作为遗传转化抗性基因克隆的基础材料。     

短期玉米秸秆还田对冷凉地区土壤真菌多样性的影响

在玉米吐丝期,利用传统涂布平板法和高通量测序技术,设置常规秸秆不还田(CK)、秸秆深翻还田(SF)和秸秆旋耕还田(XG)3个处理,研究0~10 cm、10~20 cm和20~30 cm土层真菌群落丰富度、多样性和群落结构变化,揭示冷凉地区玉米秸秆还田真菌群落结构及其差异。结果表明:冷凉地区玉米秸秆还田对土壤真菌多样性的影响较大,秸秆还田土壤中可培养真菌数为SFXGCK;秸秆还田后土壤真菌优势菌群发生变化,CK优势菌为马拉色氏霉菌属、被孢霉属和葡萄孢属,XG优势菌为被孢霉属;XG和SF表层土壤中耐冷酵母菌属和被孢霉属是优势菌;SF处理20~30 cm土层优势菌为葡萄孢属。真菌菌群Alpha多样性、群落组成丰度、RDA(Redundancy analysis)和菌群相似性综合分析可知,SF和XG 0~20 cm土层菌群差异小;SF和XG均能增加10~30 cm土层真菌群落丰度。     

甘肃小陇山日本落叶松人工林土壤优势真菌多样性探讨

为了初步了解国家级自然保护区小陇山沙坝地区日本落叶松人工林夏季土壤真菌生态分布与多样性情况,利用全球卫星定位系统(GPS),在天水小陇山日本落叶松栽种区沙坝地区抽取10块日本落叶松人工林样地,采用稀释平板法对该地区日本落叶松人工林土壤真菌进行分离计数,结果表明该区土壤真菌数量较少。并分离鉴定出4个优势属,其中青霉属(Penicillium)和曲霉属(Aspergillum)是该地区最常见的类群。为了进一步了解该区日本落叶松人工林土壤质量与土壤真菌数量及多样性的反应机制,对该区日本落叶松人工林真菌区系又进行了多样性分析:不同采样区多样性指数波动较大,物种多样性较低,土壤真菌数量较少。     

不同时期的柑橘果实中真菌种类分析

柑橘采后真菌病害发生普遍,对柑橘产业造成了极大的威胁。柑橘体内存在丰富的真菌类群,为了了解柑橘成熟和衰老过程中果实内生真菌的多样性和变化动态,本论文通过MiSeq技术解读真菌ITS区域序列,分别对生长期、成熟期和贮藏期的晚蜜一号果实的果皮和果肉的内生真菌种类进行了分析。发现相比于果肉,果皮中真菌在目和属水平的多样性更为丰富,而成熟期果肉中真菌种类多于果皮。不同生长阶段的两种组织中优势的真菌属也不同,果皮在生长期以Medicopsis和刺盘孢属(Colletotrichum)占绝对优势,成熟期为刺盘孢属,贮藏期以葡萄孢属(Botrytis)、Erythrobasidium和Strelitziana较为常见;而果肉中生长期主要为青霉属(Penicillium)和枝孢菌属(Cladosporium),约占1/4,成熟期半数以上为葡萄孢属,及至贮藏期约90%为链格孢属(Alternaria)和青霉属,其中链格孢属约占2/3。常见植物病原真菌如枝孢菌属(Cladosporium)、巨座壳属(Magnaporthe)、核盘菌属(Sclerotinia)、葡萄孢属(Botrytis)、白粉菌属(Erysiphe)、青霉属(Penicillium)、链格孢属(Alternaria)和镰孢霉属(Fusarium)等在果肉中的数量高于果皮。果肉中存在较大数量的常见植物病原真菌,不同属真菌在不同样品中呈不同的变化动态,暗示采后病变是多种真菌交互作用的结果,采后病害的防治可以提前至开花期。     

核盘菌菌核围微生物群落分析及其对盾壳霉重寄生的影响

 重寄生真菌盾壳霉(Coniothyrium minitans)是核盘菌的一种生防菌,它通过寄生核盘菌菌核,减少初侵染来源,从而达到防病效果。但在田间自然土壤中,核盘菌菌核围微生物对盾壳霉寄生菌核的影响还不清楚。本研究对核盘菌菌核围微生物进行了分离鉴定,并评估了菌核围细菌对盾壳霉重寄生的影响。结果表明,不同取样时间和不同深度的核盘菌菌核围土壤中,均存在可培养微生物富集的“菌核围效应”,即菌核围土壤中可培养细菌数量和真菌数量均高于非菌核围土壤。从菌核围土壤中共分离获得了253株细菌和180株真菌,并对其中的代表菌株进行了分子鉴定,发现假单胞菌属(Pseudomonas)和芽胞杆菌属(Bacillus)是菌核围细菌的优势种群,青霉属(Penicillium)是菌核围真菌的优势种群。通过平板对峙,从菌核围细菌中筛选到25个菌株对核盘菌有拮抗活性,22个菌株对盾壳霉具有拮抗活性。砂皿寄生菌核试验证实,7株菌核围细菌对盾壳霉寄生菌核有显著的抑制作用。核盘菌菌核围细菌对盾壳霉重寄生的抑制作用,可能是导致盾壳霉田间生防效果不稳定的原因之一。     

宁夏地区苦豆子内生真菌的分离与初步鉴定

为了探讨宁夏地区苦豆子内生真菌类群的多样性,以宁夏地区苦豆子草为试验材料,采用组织分离法从其根、茎、叶中分离内生真菌,依据形态进行初步鉴定。结果表明,从宁夏地区苦豆子875个表面消毒的根、茎、叶组织块中,共分离出内生真菌115株。其中根中分离出18株,占15.7%,茎中分离出41株,占35.7%,叶中分离出56株,占48.6%,分布规律为叶、茎、根依次递减,叶组织中的内生真菌多样性较高。对产孢的113株进行初步鉴定,分类为2纲3目5科7属,其中青霉属(Penicillium)3株,占2.6%,黑葱花霉属(Periconia)4株,占3.6%;链格孢属(Alternaria)45株,占39.1%;镰孢霉属(Fusarium)9株,占7.8%,曲霉属(Aspergillus)10株,占8.7%,枝梗茎点霉属(Dendrophoma)30株,占26.1%,根霉属(Rhizopus)9株,占7.8%;其中链格孢属(Alternaria),枝梗茎点霉属(Dendrophoma)为优势种群。宁夏地区苦豆子内生真菌多样性丰富,同时不同部位内生菌的数量、种类及分布存在差异。     

进境林木种子携带真菌的检测

以5种进境林木种子为材料进行种子带菌分析,采用保湿培养检验法和分离培养检验法分别对种子表面粘附真菌及内部寄藏真菌进行检测和鉴定.在供试的5个样品上共分离得到18属真菌,分别为链格孢属、枝孢属、镰孢属、加氏菌属、小丛壳属、毛壳菌属、拟茎点霉属、根霉属、附球菌属、节菱孢属、弯孢属、德氏霉属、拟盘多毛孢属、木霉属、散囊菌属、青霉属、毛霉属及曲霉属.种子表面附带真菌以曲霉菌和根霉菌分离频率最高;链格孢菌、镰孢菌、毛壳菌是种子寄藏真菌的优势菌群.     

耕作方式对玉米田土壤真菌群落及多样性的影响

为明确不同耕作方式对玉米田土壤真菌区系的影响,2011-2015年选取全国13个主要玉米种植区不同保护性耕作处理的土壤465份,进行了玉米田土壤真菌多样性的研究。采用稀释平板法和水稻秸秆组织定殖法分离出真菌3 167株,利用形态学鉴定出43属71种。其中,接合菌6属8种,占总菌株数的9.66%;子囊菌3属4种,占2.05%;无性型真菌36属59种,占85.54%。除无孢类群外,玉米田中的优势菌分别为镰孢菌属(Fusarium)、木霉属(Trichoderma)、青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus),分别占总菌株数的15.57%、15.50%、14.34%、12.53%。13个地区中吉林洮南地区玉米田土壤真菌多样性指数和丰富度指数最高,分别为R=5.772 7和H′=2.730 0;陕西杨凌地区玉米田土壤真菌均匀度指数最高(J=0.970 2);辽宁沈阳和吉林洮南玉米田土壤真菌相似度指数最高(C_j=0.806 5),云南曲靖、四川绵阳地区玉米田土壤真菌相似度指数最低(C_j=0.045 5)。研究表明,深松处理使玉米田土壤有益真菌数量逐年增加,且高于旋耕处理;致病菌数量显著下降,降低水平低于旋耕处理;中性菌数量年际间变化不显著;秸秆还田处理玉米田土壤有益菌、致病菌和中性菌数量均高于旋耕处理;随耕作年限增加有益菌和中性菌数量平稳上升,致病菌数量逐年下降,但不排除有回升的可能性。     

细辛叶枯病生防真菌的筛选、鉴定及拮抗效果评价

通过平板对峙培养和发酵液抑菌试验,从细辛健康植株根际土壤中筛选出拮抗效果较好的生防真菌F1-6菌株,经形态学和ITS序列分析鉴定,确定该菌为微紫青霉(Penicillium janthinellum)。对峙培养和发酵液抑菌试验结果表明,该菌株对叶枯病病菌的抑菌率分别为61.25%和63.64%;室内盆栽防治试验结果表明,该菌株对细辛叶枯病的预防效果为70.78%、治疗效果为61.03%。     

微生物菌剂处理增加了生姜土壤中有益微生物的相对丰度

作物连作易导致土壤中病原菌大量积累, 促使土传病害频发, 影响作物生长?本试验采用微生物菌剂(富含哈茨木霉Trichoderma harzianum TH7?淡紫拟青霉Purpureocillium lilacinum PL22以及高效枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis)处理具有多年生姜种植历史的地块, 并采用分离培养法和宏基因组测序技术对处理后土壤中的微生物进行检测, 明确微生物菌剂对生姜土壤中微生物群落组成的影响?结果表明, 与对照相比, 微生物菌剂处理后, 土壤中细菌属和种的数量增加, 而真菌属和种的数量减少?从微生物菌剂处理后的土壤中分离出3个门水平, 24个属水平和42个种水平细菌, 以及3个门水平, 20个属水平和24个种水平真菌, 其中分离频率较高的细菌和真菌种分别为温哥华假单胞菌Pseudomonas vancouverensis和Musidium stromaticum?从未经微生物菌剂处理的土壤(对照)中分离出导致生姜茎基腐病的病原菌尖镰孢Fusarium oxysporum和腐皮镰孢 F. solani?宏基因组测序结果表明, 微生物菌剂处理对真菌多样性的影响大于对细菌?与对照相比, 微生物菌剂处理提高了土壤中根瘤菌属Rhizobium?假单胞菌属Pseudomonas?芽胞杆菌属Bacillus等细菌属及Musidium?被孢霉属Mortierella等真菌属物种的相对丰度?综上, 微生物菌剂处理增加了生姜土壤中细菌属和种的数量, 增加了土壤中与有益微生物相关的细菌和真菌的相对丰度, 并且抑制了病原菌的生长?     

农家稻谷贮藏期真菌区系和霉变损失研究

在浙江省农村农家贮藏稻谷中,定点每月采集稻谷样品,共分离到37个属的真菌(不包括酵母菌)。其中曲霉属(Aspergillus spp.)、青霉属(Penicillium spp.)、镰孢霉属(Fu-sarium spp.)、弯孢霉属(Curvularia spp.)、链格孢霉属(Alternaria spp.)为优势菌。系统调查研究表明,我省农家贮粮早晚稻谷在真菌种类和数量上有较大差异,在不同的地区及贮藏方式中,真菌的种类基本一致,但其群体有着明显的变化规律,新收入库的稻谷以田间真菌的检出率和带菌量为高,从贮藏的第二个月开始,贮藏真菌有明显增长,并随外界条件出现变化,田间真菌则相应减少。贮藏方式和环境条件的不同,真菌的数量及霉变损失程度亦呈明显差异。     

西藏砂生槐内生真菌的分离鉴定及其多样性分析

采用组织分离法分离纯化取自西藏砂生槐不同部位组织的内生真菌,依照其形态学特征将菌株初步归类;挑选代表性菌株进行核糖体内转录间隔区(r DNA-ITS)序列分子鉴定,采用MEGA5.10软件构建系统进化树,对菌株进行聚类分析;采用SPSS13.5软件进行砂生槐内生真菌的多样性分析。结果表明,从砂生槐不同部位共分离得到77株内生真菌,其荚果中的分离几率最高,达到45.68%,而叶片中内生真菌分离几率最低,仅为4.63%。其形态学特征和ITS-r DNA序列表明,供试的16株菌分别归属于11个不同的种,其中茎点霉属(Phoma sp.)为优势种群。系统进化树显示,4个菌株在96%相似水平上聚在一个分枝上,与茎点霉属关系最近;2个菌株在92%相似水平上聚在一个分枝上,与壳二孢属亲缘关系最近;2个菌株在97%相似水平上聚在一个分枝上,与盘菌属亲缘关系最近。荚果中的内生真菌多样性指数和均匀度指数均为最高,分别为1.078 1和0.601 7,刺中的内生真菌丰富度指数最高,达到0.836 8。     

基于高通量测序及分离培养初步研究美国大豆中真菌多样性

中国是全球最大的大豆进口国,进境大豆所携带的病原真菌传入我国的风险极高。基于高通量测序技术对6批美国大豆真菌多样性进行分析,同时采用分离培养获得单一菌株,依据菌落形态、显微结构及分子技术进行鉴定。高通量测序结果显示,大豆中所有真菌共计5门15纲35目63科112属155种,主要为链格孢属(Alternaria)、球腔菌科(Mycosphaerellaceae)、小戴卫霉科(Davidiellaceae)、小囊菌科(Plectosphaerellaceae)、赤霉属(Gibberella)、附球霉属(Epicoccum)、间座壳属(Diaporthe)、隐球菌属(Cryptococcus)。分离培养结果显示,得到真菌共计40株10种,分别是大豆北方茎溃疡病菌(Diaporthe phaseolorum var.caulivora)、大豆南方茎溃疡病菌(Diaporthe phaseolorum var.meridionalis)、大豆拟茎点种腐病菌(Diaporthe longicolla/Phomopsis longicolla)、大豆炭腐病菌(Macrophomina phaseolina)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、菌核菌(Sclerotinia sclerotiorum)、镰刀菌(Fusarium sp.)、附球菌(Epicoccum sp.)、交链孢菌(Alternaria sp.)、小双胞腔菌(Didymella sp.)。     

半干旱黄土高原生态区不同土地利用类型土壤可培养微生物群落分析

对半干旱黄土高原生态区山地干草原、耕地和河谷荒地等不同利用类型土壤可培养微生物进行了研究,结果发现山地干草原土壤可培养细菌、放线菌、真菌数量分别为6.43×106cfu·g-1、2.68 × 106cfu·g-1和0.11×106cfu·g-1,耕地分别为9.27×106cfu·g-1、5.33 × 106cfu·g-1和0.07×106cfu·g-1,河谷荒地分别为2.35×106cfu·g-1、2.36×106cfu·g-1和0.08×106cfu·g-1.山地干草原可培养细菌包括厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)和α变形菌纲(Alphaproteobacteria)的芽孢杆菌属(Bacillus)、微杆菌属(icrobacterium、节杆菌属(Arthrobacter)和农杆菌属(Agrobacterium),优势菌属为芽孢杆菌属(69.23％),耕地为厚壁菌门、放线菌门、α变形菌纲和γ变形菌纲(Gammaproteobacteria)的芽孢杆菌属、农杆菌属、葡萄球菌属(Staphylococcus)、节杆菌属、假单胞菌属(Peseudomonas),河谷荒地包括厚壁菌门和放线菌门的节杆菌属、葡萄球菌属和类芽孢杆菌属(Paenibacillus),以葡萄球菌属为主(50.00％).不同类型土壤放线菌以链霉菌属(Atreptomyces)为主,其余包括链孢囊菌属(Streptosporangium)、链轮丝菌属(Streptoverticillium)和小单孢菌属(Micromonspora).霉菌以青霉属(Penicillium)为主,其余包括曲霉属(Aspergillus)、芽枝霉属(Cladosporium)、毛霉属(Mucor)、镰孢霉属(Coniothecium)和交链孢霉属(Alternaria).     

草莓根围拮抗细菌的多样性分析及其田间应用

为研究草莓相关拮抗细菌的多样性,以期筛选对草莓土传病害有良好防效的生防细菌。本研究从土传病害重发田块的草莓健株根围分离得504株草莓根围细菌。用平板对峙培养法,以草莓黄萎病菌、草莓疫霉和草莓枯萎病菌作指示病原真菌,筛选得24株有显著拮抗活性的细菌。通过测定拮抗细菌的胞外酶活性(纤维素酶,蛋白酶,几丁质酶)、次生代谢物(噬铁素)活性,初步确定拮抗细菌的拮抗机理。通过细菌16S rDNA限制性酶切图谱分析(ARDRA)和16S rRNA基因序列测定比对结果,阐明拮抗细菌种群结构。同时把分离得的拮抗细菌用于防治草莓黄萎病试验。研究结果表明,24个拮抗细菌的ARDRA图谱共有12种;结合菌株16SrDNA序列测定结果得出,12个ARDRA类群分属于6个细菌属(芽孢杆菌、假单胞菌、伯克氏菌、土壤杆菌、不动杆菌和食酸菌属)。其中芽孢杆菌、假单胞菌和伯克氏菌为优势种群。田间防治结果表明,菌株SB13对草莓黄萎病的田间防效达93.5%,菌株SB336和SB479的防效达100%。     

一株拮抗4种马铃薯病原真菌的拟康宁木霉的分离鉴定

本研究从黑龙江省土壤中分离获得一株木霉, 运用生物学特征和ITS序列分析相结合的方法将其鉴定为拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis?薯块活体抑菌测定表明, 该木霉对接骨木镰孢Fusarium sambucinum?马铃薯早疫病菌Alternaria solani?立枯丝核菌Rhizoctonia solani (AG3和AG5)等病原真菌引起的马铃薯病害具有抑制作用?对峙培养试验结果显示, 该木霉对上述病原菌的生长具有拮抗作用, 平均抑制率均超过50%, 且该木霉生长速度快于上述病原真菌, 以竞争生长方式抑制病原菌菌丝生长和菌核形成?采用扫描电子显微镜观察发现, 该木霉可通过缠绕或并行生长等方式寄生在上述病原真菌菌丝上?以上结果表明, 从土壤中分离获得的拟康宁木霉具备良好的生防潜力, 可为马铃薯种植中多种真菌病害的统防统治提供良好的生防菌株?     

干旱区不同品种苹果树叶片内生真菌群落组成和功能特征

分析新疆典型干旱区轮台国家果树资源圃不同品种苹果树叶片内生真菌的分布特征及差异,为病害防治、品种选育和筛选功能微生物菌株提供参考。利用ITS基因高通量测序技术对6个品种苹果树叶片内生真菌进行测序,并比较其群落组成和功能特性。研究表明,苹果树叶片蕴含着丰富多样的内生真菌资源,共检测到真菌序列566453条,鉴定到5个门、15个纲、30个目、42个科及43个属。不同品种间内生真菌群落多样性存在一定差异,野苹果叶片内生真菌的多样性指数和丰度指数均较高。在门水平上的优势真菌菌群为子囊菌门(85.22%～98.68%),不同品种间差异不大。在纲和属上不同品种间有一定的差异,子囊菌门中的锤舌菌纲和座囊菌纲为优势纲,相对丰度分别在17.48%～69.69%和28.21%～67.59%之间;可归类的优势真菌属包括小粉孢属(17.47%～69.68%)、链格孢属(13.36%～39.35%)、枝孢霉属(2.94%～8.80%)和隐球菌属(0.20%～2.36%)。不同品种苹果树叶片真菌共有属的OTU数有42个,占各样品相对丰度的99%以上,而独有属的丰度各品种均低于1%。由于长期适应干旱区环境,在属水平...     

江西省纸质档案有害真菌种类分离与鉴定

为明确江西省纸质档案有害真菌种类,对江西省部分档案馆纸质档案调查抽样并进行大量病菌分离。分离鉴定出曲霉属、枝孢霉属、青霉属等8个属20个种,并对每个菌属的分离培养菌丝体形态作了介绍。研究结果对纸质档案霉菌的分布、防治具有一定指导意义。     

黄土高原雨养区不同种植年限紫花苜蓿土壤真菌群落的分布特征

依托布设在黄土高原雨养农业区的长期田间定位试验,以玉米田为对照、不同种植年限紫花苜蓿地(L2003,L2005,L2012)土壤为研究对象,采用真菌ITS高通量测序技术探究不同种植年限苜蓿土壤真菌群落分布与演替特征,为黄土高原苜蓿人工草地的可持续利用提供微生物参数。结果表明:黄绵土共检测到真菌6门24纲73目156科313属,主要包括子囊菌门(Ascomycota)、接合菌门(Zygomycota)、担子菌门(Basidiomycota)。苜蓿土壤和农田土壤真菌群落结构差异显著,随苜蓿种植年限延长子囊菌门相对丰度先降低后升高,接合菌门和担子菌门相对丰度先升高后降低,表现为L2003子囊菌门相对丰度显著高于L2005处理12.42%(P0.05),接合菌门相对丰度显著低于L2005处理153.54%(P0.05)。农田土壤优势属为被孢霉属(Mortierella)、绿僵菌属(Metarhizium)和腐质霉属(Humicola),苜蓿土壤共有优势真菌属为刺孢属(Phaeomycocentrospora)、白僵菌属(Beauveria)和被孢霉属。农田土壤被孢霉属相对丰度显著高于苜蓿土壤62.38%～73.48%(P0.05),随着苜蓿种植年限的延长,土壤促生菌(白僵菌属和绿僵菌属)丰度下降,部分病原菌(镰刀菌属、赤霉菌属)丰度增加。主成分分析发现,丛赤壳属(Nectria)、土赤壳属(Ilyonectria)和镰刀菌属(Fusarium)与第一主成分(PC1)具有较高的相关性,Lectera菌属、支顶孢属(Acremonium)和赤霉菌属(Gibberella)与第二主成分具有较高相关性,与第一、第二主成分相关性较高的菌属均为植物病原菌。