我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下荧光猪崽

2008年1月7日,我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称,这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下“荧光猪崽”

从东北农业大学获悉，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪于2008年1月7日成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称，这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下“荧光猪崽”

从东北农业大学获悉，我国酋例绿色荧光蛋白转基因克隆猪2008年1月7日成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称，这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

我国又添两头“荧光猪崽”

2月17日．记者从东北农业大学获悉．我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪今年1月成功产下的11头猪崽中．又有2头猪崽被确认具有绿色荧光遗传特征．从而使这窝猪崽中“荧光猪崽”的总数由2头增加至4头。     

国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪问世

本刊辑:曾培育出我国首例成体体细胞“克隆”东北民猪的东北农业大学教授刘忠华带领的课题组,12月22日又成功培育出国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪,这是世界上继美国、韩国、日本之后第四例绿色荧光蛋白转基因猪。     

国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪问世

曾培育出我国首例成体体细胞“克隆”东北民猪的东北农业大学教授刘忠华带领的课题组,12月22日又成功培育出国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪,这是世界上继美国、韩国、日本之后第四例绿色荧光蛋白转基因猪。这标志着我国在转基因克隆猪技术研究领域步入世界先进水平行列。     

绿色荧光蛋白表达载体的改造和表达

为获得增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEFP-N1-MSC,并观察其在猪成纤维细胞中的表达情况,用Nhe Ⅰ和Age Ⅰ消除pEGFP-N1质粒上的多克隆位点(MSC),然后补平连接,获得增强型绿色荧光蛋白编码基因的真核表达载体pEGFP-N1-MSC质粒,将pEGFP-N1-MSC质粒转化DH5α感受态细胞,于Kanr LB平板上筛选阳性克隆.重组子经Nhe Ⅰ和Age Ⅰ双酶切鉴定,将该载体转染猪成纤维细胞,24 h后观察EGFP表达情况,48 h后添加G418进行筛选.结果表明:改造的pEGFP-N1-MSC真核表达载体,成功转染猪成纤维细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光,获得可产生绿色荧光的pEGFP-N1-MSC载体,为构建猪双正选择同源重组载体奠定了基础.     

体细胞核移植技术生产转基因猪在我国已发展成熟

2007年岁末，在东北农业大学，一头绿色荧光转基因克隆猪顺利产下11个“猪宝宝”，其中2头具有绿色荧光特征。有关专家称，这次试验的成功标志着中国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

科技动态

国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪问世曾培育出我国首例成体体细胞“克隆”东北民猪的东北农业大学教授刘忠华带领的课题组,12月22日又成功培育出国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪,这是世界上继美国、韩国、日本之后第四例绿色荧光蛋白转基因猪。据悉,此次获得的转基因克隆猪,是研究人员先从一种特殊水母中提取绿色荧光蛋白基因,然后把该基因经过     

绿色荧光蛋白基因在家蚕的表达研究

将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入家蚕蛹(G_0)的睾丸,利用荧光显微镜技术检测到绿色荧光蛋白基因在家蚕卵(G_1)表达的荧光图像。     

荧光抗体法检测猪细小病毒

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)为引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原之一.猪细小病毒感染的主要特征是孕猪在怀孕前容易受到感染,可引起胚胎或胎儿的感染和死亡,导致母猪发生流产,死胎,胎儿木乃伊化及新生仔猪的死亡.目前,国内外检测猪细小病毒的方法主要有原位杂交、银加胶体金检测法、ELISA双抗体夹心法、聚合酶链反应和荧光抗体法等.免疫荧光技术是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应.笔者认为荧光抗体法较适用,而关于此方法的报道甚少,因此进行了以寻求快速、特异的直接荧光抗体检测方法为目的的研究.     

上海奉贤区举办镇级防疫统计员培训

曾培育出我国首例成体体细胞“克隆”东北民猪的东北农业大学教授刘忠华带领的课题组，2006年12月22日又成功培育出国内首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪，这是世界上继美国、韩国、日本之后第四例绿色荧光蛋白转基因猪。     

信息采撷

<正>荧光猪产崽引起世界关注2008年1月7日,由东北农业大学刘忠华教授主持的我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪顺利产下11头小猪。科研人员通过对小猪的耳朵、尾巴和脐带     

适合转基因绿色荧光茧丝护色脱胶的酶类及脱胶工艺条件

转基因绿色荧光茧中的绿色荧光蛋白存在于丝素中,采用传统的皂碱脱胶法极易使茧丝中的绿色荧光蛋白失活。分别用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶对转基因绿色荧光茧丝进行护色脱胶,并通过正交试验优化脱胶工艺条件。观察茧丝经不同酶类脱胶后的绿色荧光强度,筛选出适合转基因绿色荧光茧丝酶法脱胶的酶种类为碱性蛋白酶,其最适脱胶工艺条件为:浴比1∶50,酶用量3 g/L,反应温度50℃,反应时间120 min,p H 9.0。在此优化工艺条件下用碱性蛋白酶对转基因绿色荧光茧丝进行脱胶的脱胶率可达25.16%,茧丝呈现明显的绿色荧光,而且茧丝表面光滑平整,机械性能损失较小,可以较好地保持茧丝的绿色荧光特性和力学性能。     

猪瘟病毒荧光RT-PCR快速检测方法的建立

以猪瘟病毒5＇端非编码区为靶核酸序列设计引物和探针，建立了一步法荧光RT-PCR检测猪瘟病毒。荧光RT-PCR仅检测出猪瘟C株、T株，未能检测出牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、猪呼吸系统冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、PK-15细胞和牛睾丸原代细胞；对猪瘟病毒T株的扩增反应产物进行了测序分析，与预期序列相符。荧光RT-PCR的检测极限可达到1 TCID50／mL，整个试验流程只需2h。采用荧光RT-PCR和抗原捕获ELISA同时检测临床病料、猪副产品共207份样本，两种方法的检出率分别为17．4％和13．5％，两者符合率为95．7％（198／207）；荧光RT-PCR的检出率高于ELISA，两者差异显著。结果表明，建立的荧光RT-PCR可用于猪产品、临床病料中猪瘟病毒的快速检测。     

表达绿色荧光蛋白猪种布鲁菌的构建

为了更直观的观察猪种布鲁菌在宿主细胞/宿主体内的活动规律,本研究首先应用PCR技术扩增pEGFP-N1质粒的N1基因,与pMD18-T载体连接后,成功构建PMD18-N1质粒;进而应用XbalⅠ与SacⅡ限制性内切酶,将PMD18-N1质粒与pBBR1MCS-6质粒分别进行双酶切,并将N1片段反向连接于PBBR1MCS-6载体上,经菌液PCR鉴定与双酶切鉴定,证明成功构建了PBBR1MCS-N1质粒;在此基础上,将PBBR1MCS-N1质粒电转化至猪种布鲁菌感受态细胞,通过含氯霉素的TSA培养基筛选、PCR鉴定、荧光鉴定及菌株的传代稳定性试验与培养特性的观察,最终获得了可稳定表达绿色荧光的猪种布鲁菌。     

东北农业大学克隆猪研究达国际先进水平

由黑龙江省科技厅组织的专家组对东北农业大学“猪体细胞核移植及绿色荧光蛋白转基因克隆猪”研究项目进行了鉴定。     

绿色荧光蛋白的发现和应用

绿色荧光蛋白的发现及应用具有划时代的重要意义,它不仅为当代生物学研究提供了极为实用的基本研究手段,并且在此基础上改造发展和发现了一系列荧光蛋白,拓展了应用范围。本文将对绿色荧光蛋白的发现和应用进行详细的介绍。     

表达绿色荧光和红色荧光蛋白重组新城疫病毒的构建

试验旨在探究以新城疫病毒为载体进行多联疫苗的构建。通过将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和红色荧光蛋白(Ds Red)基因用T2A肽串联后克隆入嵌合新城疫病毒AI4-2FHN的P和M基因之间,获得重组质粒p AI4-2FHN-GRFP。该质粒与p CI-NP、p CI-P和p CI-L 3个辅助质粒共转染至稳定表达T7 RNA聚合酶的BSR细胞后,获得可同时表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的重组新城疫病毒。拯救病毒在SPF鸡胚中繁殖传代,通过RT-PCR验证,并检测重组病毒的生物学活性和外源蛋白的表达效率。结果显示:重组病毒在鸡胚内传3代后,鸡胚尿囊液HA效价稳定在8 log_2,感染细胞24 h、36 h、48 h后在荧光显微镜下观察到EGFP与Ds Red的荧光亮度逐渐增强,且相同时间内红色荧光蛋白与绿色荧光蛋白表达量相似。重组病毒的构建为新城疫病毒作载体用于多联多价疫苗的研发提供了参考。     

猪SP-A基因荧光定量PCR检测方法的建立

SP-A(surfactant protein-A)mRNA的表达对肺的发育、成熟均起关键作用,并且与肺部疾病的发生相关。为了建立荧光定量PCR技术检测猪SP-A表达量的方法,根据猪SP-A基因的mRNA序列(EU622632)设计引物,从纯化模板、PCR程序设计等方面进行了优化,建立了基于SYBR Green I染料技术的Power SYBR(Green荧光定量PCR方法。结果表明,所建立的Power SYBR(Green荧光定量PCR方法检测猪SP-A基因具有特异性好、简便、可靠等特点,为猪SP-A基因定量分析奠定了基础。