中药地翁颗粒对小鼠脾淋巴细胞功能的影响

为观察中药地翁颗粒在体外对小鼠脾淋巴细胞功能的影响,设置高（100mg/L）、中（10mg/L）、低（1mg/L）3个剂量组,采用3 H法进行刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）诱导脾淋巴细胞增殖试验,ELISA方法检测ConA或金黄色葡萄球菌Cown株灭活菌体（SAC）刺激的脾淋巴细胞上清液IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α的含量。结果显示,在安全浓度范围内,地翁颗粒能够明显促进T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖;能够促进ConA刺激的淋巴细胞分泌INF-γ;能够促进SAC刺激的淋巴细胞分泌IL-12、INF-γ和IL-6,并抑制IL-10的分泌。结果表明,地翁颗粒能够有效调节小鼠脾淋巴细胞的功能,促进细胞免疫。     

辣椒碱对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞体外免疫调节活性的影响

为探讨辣椒碱的免疫调节作用。试验利用体外分离培养小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,辣椒碱单药和辣椒碱与脂多糖(LPS)复合刺激脾淋巴细胞,MTT法检测辣椒碱和复合物对脾淋巴细胞增殖的影响;用辣椒碱单药刺激脾淋巴细胞,酶联免疫吸附(ELISA)法检测辣椒碱对淋巴细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-6(IL-6)的影响;用辣椒碱单药刺激腹腔巨噬细胞,MTT法检测辣椒碱腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;用ELISA法检测辣椒碱对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6的影响。结果表明,辣椒碱单药和辣椒碱与脂多糖复合均能促进脾淋巴细胞增殖,辣椒碱单药能促进淋巴细胞IFN-γ和IL-6的分泌。辣椒碱单药能增强巨噬细胞的吞噬功能,促进巨噬细胞TNF-α和IL-6的分泌。辣椒碱具有免疫调节作用。     

硼对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子的影响

为了研究硼对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子的影响,分别采用CCK-8、ELISA及qPCR技术检测不同浓度硼协同刀豆凝集素(concanavalin A,ConA)或脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对小鼠脾淋巴细胞增殖、细胞因子分泌及其mRNA表达的影响。结果显示,当硼协同ConA作用于脾淋巴细胞时,随着硼浓度的增加,细胞存活率呈先上升后下降的趋势;IL-2的分泌量逐渐下降,IL-6的分泌量没有显著变化;IL-2、IFN-γ及IL-6 mRNA的相对表达量有所增加,IL-10则表现为逐渐下降的趋势。当硼协同LPS作用于脾淋巴细胞时,随着硼浓度的增加,细胞存活率也呈先上升后下降的趋势;显著促进了IL-2、IL-6的分泌(P<0.05);硼浓度为1,10,50 mmol/L时,IL-2及IL-10 mRNA的相对表达量均显著低于LPS单独刺激组(P<0.05),IL-6 mRNA的相对表达量先下降后上升,IFN-γ则表现为逐渐下降。结果说明低浓度的硼对脾淋巴细胞的增殖及细胞因子的分泌起促进作用,高浓度的硼则对细胞产生毒性作用且在一定程度上抑制相关细胞因子的分泌,且硼对脾淋巴细胞的细胞因子表达也起到了一定的调控作用。     

桔梗皂苷D对小鼠巨噬细胞和脾淋巴细胞体外增殖和分泌功能的影响

研究探讨桔梗皂苷D对小鼠脾淋巴细胞体外增殖、腹腔巨噬细胞吞噬及诱导淋巴细胞分泌细胞因子的影响。采用MTT法检测桔梗皂苷D和桔梗皂苷D与脂多糖(LSP)组合对淋巴细胞增殖及金黄色葡萄球菌感染淋巴细胞增殖的影响;ELISA法检测桔梗皂苷D对诱导淋巴细胞γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-6(IL-6)的分泌的影响;MTT法检测桔梗皂苷D对诱导巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌功能的影响。结果显示,桔梗皂苷D在一定质量浓度范围内,均能诱导淋巴细胞的增殖,促进IFN-γ和IL-6的分泌,且呈双向调节;不能协同LSP诱导淋巴细胞的增殖;在金葡菌感染淋巴细胞时桔梗皂苷D能促进淋巴细胞的增殖,但效果低于桔梗皂苷D单药组;能提高巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的功能。桔梗皂苷D能有效促进脾淋巴细胞的增殖和巨噬细胞的吞噬功能,可通过淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-6发挥免疫增强作用。     

白藜芦醇对小鼠淋巴细胞分泌细胞因子的影响

为了探讨白藜芦醇的免疫增强作用。分离小鼠脾淋巴细胞,设空白对照组、阳性对照组及10、20、40和80μg/mL白藜芦醇组,采用ELISA法检测白藜芦醇对淋巴细胞分泌IL-3、IL-4、IL-12和IFN-γ细胞因子的影响。结果,白藜芦醇能诱导脾淋巴细胞IL-3、IL-4、IL-12和IFN-γ细胞因子的分泌。表明白藜芦醇可通过促进淋巴细胞细胞因子的分泌,来提高淋巴细胞的免疫功能。     

蓝黄青口服液对小鼠体外诱生细胞因子的影响

在对体外诱生小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子的影响试验中,用双抗体夹心ELISA法测定蓝黄青口服液(LHQY)对脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ及INF-α含量的影响,结果显示,LHQY在有无诱生剂ConA存在的条件均能极显著促进小鼠T淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ(P<0.01),加入诱生剂的组,分泌的量较大;在PHA-M的协同作用下,除药物浓度为1:10外,均可极显著促进小鼠脾淋巴细胞分泌INF-α(P<0.01),但其本身对于INF-α的分泌主要起抑制作用.     

银杏叶提取物对小鼠脾淋巴细胞体外增殖和分泌功能的影响

为分析银杏叶提取物(EGB)对小鼠脾淋巴细胞体外增殖和分泌功能的影响。无菌分离小鼠脾,制备淋巴细胞,并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养,在培养液中分别加入刀豆蛋白A(Con A)或脂多糖(LPS)及8、16、32和64μg/m L不同质量浓度的EGB,经过不同时间培养后,采用MTT法检测淋巴细胞的增殖,ELISA法检测淋巴细胞分泌IL-4和IL-12的水平,流式细胞仪检测淋巴细胞的细胞周期和细胞膜表面标志。结果表明:EGB能够促进小鼠脾淋巴细胞增殖,不能与Con A或LPS协同促进小鼠脾淋巴细胞增殖;能增强IL-4和IL-12的分泌;能提高小鼠脾淋巴细胞CD4~+/CD8~+的比值;能提高脾淋巴细胞周期中细胞进入S期细胞的百分率。结果提示:EGB能增强小鼠脾淋巴细胞的免疫调节活性。     

铜绿假单胞菌oprL和oprF基因二价组合DNA疫苗初免-灭活疫苗加强免疫效果的研究

为探索铜绿假单胞菌oprL和oprF基因的二价组合DNA疫苗pOPRL+pOPRF初免-灭活疫苗加强免疫的效果,本实验以铜绿假单胞菌二价组合DNA疫苗pOPRL+pOPRF免疫BALB/c小鼠后再以灭活疫苗加强免疫,根据两种疫苗的免疫次数分为初免-加强免疫1组和初免-加强免疫2组,同时设置二价组合DNA疫苗单独免疫组、灭活疫苗单独免疫组以及生理盐水对照组。免疫后间接ELISA法测定小鼠血清抗体水平、MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平,双抗体夹心ELISA测定小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ、IL-2和IL-4的水平。三免两周后将铜绿假单胞菌以1.35×10~(10)cfu/只的剂量对各组小鼠进行攻毒试验,测定攻毒后各组小鼠的保护率。结果显示DNA疫苗初免-灭活疫苗加强免疫诱导的小鼠血清抗体水平、刺激指数(SI)值及小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-2含量显著高于DNA疫苗单独免疫组(p0.05)。且初免-加强免疫1组小鼠的SI值及分泌的IFN-γ和IL-2含量显著高于灭活疫苗组(p0.05),但各组小鼠分泌的IL-4含量无显著差异(p0.05)。初免-加强免疫1组、初免-加强免疫2组、灭活疫苗组和DNA疫苗单独组的保护率分别为92%、80%、84%和72%。表明二价组合DNA疫苗初免-灭活疫苗加强免疫策略可以诱导小鼠产生较高水平的抗体和Th1型细胞免疫应答,并可为小鼠提供较好的保护率。     

淫羊藿苷对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞免疫功能的影响

为探讨淫羊藿苷对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞的免疫功能,体外分离小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞,以淫羊藿苷进行刺激,同时设空白对照组和阳性对照组,采用MTT法检测淫羊藿苷对巨噬细胞吞噬功能和淋巴细胞增殖的影响,ELISA法检测淫羊藿苷对淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的影响。结果显示,淫羊藿苷能够提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能,促进脾淋巴细胞增殖,刺激淋巴细胞细胞因子的分泌。结果表明,淫羊藿苷能够提高小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞的免疫功能。     

牦牛脾脏转移因子对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响

为了探究牦牛脾脏非特异性转移因子(specificity transfer factor,TF)对小鼠淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响,应用ELISA测定了小鼠注射TF后不同时间相关细胞因子分泌量的变化。结果显示,牦牛TF对分泌细胞因子具有促进作用,且用ConA或用TF再次刺激鼠淋巴细胞后各细胞因子分泌量均高于鼠淋巴细胞单独增殖组。其中小鼠γ-干扰素(IFN-γ)含量表现为先增加后减少,峰值出现在第48 h,并持续分泌时间较长,与对照组相比,TF+ConA组鼠淋巴细胞分泌IFN-γ的量在48 h和72 h时显著高于TF组和细胞单独增殖组(P0.05);小鼠白细胞介素-1(IL-1)含量的变化随着时间的延长呈上升趋势;白细胞介素-12(IL-12)的动态变化全部表现出前期(12 h)和中期(48 h)两个分泌高峰,并且在48 h时,ConA协同TF组明显高于细胞单独增殖组与TF组(P0.05);白细胞介素-4(IL-4)的动态变化表现不明显;白细胞介素-2(IL-2)含量随着时间的延长,呈上升再下降的趋势,48 h达到峰值,并显著高于TF组和细胞单独增殖组(P0.05),而后下降。说明TF协同ConA刺激小鼠淋巴细胞后,均可提高各种细胞因子的分泌能力。     

转牛Myf6基因小鼠脾脏功能的研究

为了研究外源基因转入对动物免疫功能的影响,即转牛Myf6基因小鼠脾脏淋巴细胞的增殖能力以及相关细胞因子IL-2、IFN-γmRNA表达的变化,试验随机选择5只转牛Myf6基因的子一代小鼠,采用MTT法体外检测脾淋巴细胞增殖能力和实时荧光定量PCR研究宿主脾脏中的IL-2mRNA、IFN-γmRNA表达变化。结果表明:Myf6子一代小鼠T淋巴细胞、B淋巴细胞的增殖指数与阴性对照组相比显著降低,IL-2 mRNA相对表达量显著降低,IFN-γmRNA表达也出现了显著下降。说明外源基因Myf6转入抑制了小鼠的脾脏免疫机能。     

富硒女贞子粗多糖对小鼠免疫功能的影响

从富硒女贞子及女贞子中提取粗多糖,探讨其对小鼠免疫功能的影响。将90只小鼠随机均分为3组:对照组、富硒女贞子粗多糖组、普通女贞子粗多糖组。对照组灌服生理盐水,试验组小鼠灌服粗多糖液,灌服2次,每次连续5 d。2次灌胃的第3天注射卵清蛋白,二免后测定胸腺脾脏指数;MTT法检测脾淋巴细胞增殖水平;ELISA试剂盒检测血清中IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平及相应抗体生成水平。结果显示:与对照组相比,试验组脾脏和胸腺指数明显升高,脾淋巴细胞增殖作用显著提高;IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平明显提高,其中IFN-γ与对照组存在显著差异;而对特异性卵清抗体生成影响不大。这表明富硒女贞子粗多糖较普通女贞子粗多糖能更好地促进机体非特异性免疫及细胞免疫,从而增强机体免疫功能,在特异性体液免疫的作用方面则没有表现出明显的规律性,还需进一步研究。     

中药复方对热刺激小鼠脾脏IFN-γ、IL-4含量的影响

用ELISA法测定了中药复方对热刺激小鼠脾脏IFN-γ和IL-4水平的影响。结果,高温对照组IFN-γ、IL-4和IL-4/IFN-γ上升,中药复方组IFN-γ从热刺激后第1天显著上升,第3天达高峰,第6天下降到常温对照组水平;IL-4在第1天显著下降,然后回升,第6天显著升高,第10天下降,接近常温对照组水平;IL-4/IFN-γ第1天显著降低,然后逐步回升。研究表明,热刺激会引起小鼠脾脏IFN-γ、IL-4水平的紊乱,中药复方有显著的调节作用,从而促进免疫功能的恢复。     

口蹄疫油乳剂疫苗中添加人参茎叶皂甙对免疫效果和黏滞性的影响

将人参茎叶皂甙(GSLS)和油佐剂混合,然后再与口蹄疫病毒(FMDV)抗原乳化制成口蹄疫疫苗.将FMD疫苗皮下二次免疫小鼠后,检测血清特异性IgG水平、脾脏淋巴细胞增殖指数(SI),脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4mRNA表达水平,并测定GSLS对疫苗黏滞性的影响.结果表明,用200 μL的FMD疫苗免疫小鼠,显著促进小鼠产生以4μg组产生最高水平的IgG(P＜0.05)；与对照组比较,添加GSLS后脾淋巴细胞对ConA和LPS增殖指数,IFN-γ和IL-4mRNA表达也显著增高(P＜0.05)；吐温浓度为1.0％和1.5％时,添加GSLS能显著降低疫苗的黏滞性(P＜0.05).因此,在FMD疫苗中添加GSLS能提高机体的体液免疫和细胞免疫应答,降低疫苗黏滞性.     

重组白介素-2增强口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究

通过研究重组白细胞介素-2（IL-2）对口蹄疫病毒（FMDV）多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为 FMDV 表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性 Balb／c 小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪 IL-2的重组腺病毒（rAd5poIL-2）和串联表达 FMDV 多表位基因的重组腺病毒（rAd5EGS）,第2、3和4组分别注射 rAd5EGS、灭活疫苗和 PBS,间隔2周免疫1次,共免疫3次。首免后每周采血分离小鼠血清,通过 ELISA 检测血清中特异性 IgG;首免后6周检测血清中抗体亚型 IgG1、IgG2a 及细胞因子 IL-4和 IFN-γ的表达水平,同时分离脾细胞,MTT 法检测淋巴细胞增殖指数。结果显示,联合免疫 rAd5poIL-2和rAd5EGS 既能增强 rAd5EGS 诱导小鼠特异性 IgG、IgG1和 IgG2a 的分泌,又能增强其诱导淋巴细胞增殖能力,且免疫效果强于灭活疫苗;细胞因子检测结果显示,联合免疫 rAd5poIL-2后能增强 rAd5EGS 诱导小鼠 IL-4和 IFN-γ的分泌,且其诱导 IL-4和 IFN-γ分泌能力也强于灭活疫苗。说明重组 IL-2能有效增强FMDV 多表位疫苗诱导抗体分泌能力和细胞免疫应答,rAd5poIL-2有望作为 FMDV 表位疫苗的候选佐剂。     

沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞增殖及IL-2、IL-4、IFN-γ mRNA表达的影响

本试验以绵羊外周血淋巴细胞为研究对象,研究沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞增殖率,IL-2、IL-4、IFN-γ基因mRNA表达量的影响,为全面揭示沙葱黄酮的免疫调节活性机制和相关产品的开发提供试验依据。试验采用MTT法研究沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞增殖率的影响,使用RT-PCR法研究沙葱黄酮对绵羊外周血淋巴细胞IL-2、IL-4、IFN-γ基因mRNA表达量的影响。结果显示,沙葱黄酮具有促进绵羊外周血淋巴细胞增殖的作用,对绵羊外周血淋巴细胞IL-2mRNA表达无明显调节作用,可上调IFN-γmRNA表达,下调IL-4mRNA表达。综上,沙葱黄酮具有促进绵羊外周血淋巴细胞增殖及免疫调节活性的作用。     

人参茎叶总皂苷联合亚硒酸钠对猪伪狂犬病灭活疫苗免疫的增强作用

为了探讨人参茎叶总皂苷(ginseng stem-leaf saponins,GSLS)联合亚硒酸钠(Na2SeO3,简称Se)对伪狂犬病病毒(PRV)灭活疫苗免疫的增强作用,本试验给小鼠口服GSLS后,接种添加了Se的PRV灭活疫苗,并检测免疫后小鼠血清中PRV gB抗体及其亚类(IgG1和IgG2a)水平、淋巴细胞增殖水平、淋巴细胞分泌细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6)水平以及野毒(fPRV)攻毒后小鼠的存活率。结果显示,与仅仅免疫PRV灭活疫苗的小鼠相比,口服GSLS联合疫苗中添加Se(GSLS-Se)能够显著提高小鼠血清中PRV gB抗体及其亚类(IgG1和IgG2a)水平,淋巴细胞增殖水平和细胞因子(IFN-γ、IL-2和IL-6)水平。此外,GSLS-Se还提高了免疫小鼠对野毒感染的抵抗力。结果表明,GSLS-Se对PRV灭活疫苗具有免疫增强作用,值得在本动物上进一步研究。     

TCDCA对有丝分裂原刺激的小鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响

为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDcA)对有丝分裂原刺激的小鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响,设计了TCDCA的0.01,0.05,0.1,1,10μg/mL5个剂量浓度梯度,开展了TCDCA对有丝分裂原刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖反应、分泌IL-2和IgG的影响研究。结果表明:TCDCA对ConA刺激的脾淋巴细胞增殖反应表现出调节作用,对LPS刺激的脾淋巴细胞无明显作用;TCDCA对ConA和LPS刺激的脾淋巴细胞的分泌IL-2表现出向上抛物线形式的明显的调节作用;TCDCA对LPS刺激的脾淋巴细胞分泌IgG具有向下抛物线形式的明显的调节作用。说明TCDCA对有丝分裂原刺激的小鼠脾淋巴细胞免疫功能具有明显的调节作用。     

硫酸化20(S)-人参皂苷Rh_2对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-4和IFN-γ的影响

为了进一步评价硫酸化修饰后人参皂苷Rh2的免疫活性变化,试验分别采用MTT法和ELISA法对比研究了浓度为0.2 mg/L、1 mg/L、5 mg/L的人参皂苷Rh2及其硫酸化衍生物(S-Rh2-1和S-Rh2-2)对ConA刺激小鼠的脾淋巴细胞增殖和分泌IL-4、IFN-γ的影响。结果表明:S-Rh2-1为0.2 mg/L、5 mg/L,S-Rh2-2为1 mg/L,Rh2为5 mg/L时能显著或极显著抑制由ConA引起的脾淋巴细胞增殖(P<0.05或P<0.01);S-Rh2-2为1 mg/L、5 mg/L,Rh2为0.2 mg/L、5 mg/L时能显著或极显著抑制由ConA引起的脾淋巴细胞分泌IL-4的量(P<0.05或P<0.01);S-Rh2-1、Rh2的3个试验浓度以及S-Rh2-2为0.2 mg/L、1 mg/L时都能极显著抑制由ConA引起的脾淋巴细胞分泌IFN-γ的量(P<0.01)。说明Rh2进行硫酸化修饰后其免疫活性在一定程度上得到了增强。     

混饮低剂量ChlFN-α对肉鸡细胞免疫功能及细胞因子水平的影响

本实验研究低剂量鸡α-干扰素(ChtFN-α)对内鸡细胞免疫及细胞因子水平的影响.15日龄肉鸡连续混饮0.1 IU/mL、1 IU/mL和10 IU/mL剂量的ChIFN-α,分别在混饮后14 d和21 d翼静脉采取血样,采用中性红.结晶紫联合测定白细胞总数,经典方法进行白细胞分类计数,MTT比色分析法测定淋巴细胞转化能力,LDH释放法测定NK细胞的杀伤活性,双夹心ELISA法测定血清中IFN-γ、IL-4、IL-12水平.结果显示肉鸡连续混饮ChIFN-α后,能显著提高白细胞总数、淋巴细胞百分比和血清中IFN-γ水平,对IL-4、IL-12的浓度水平影响不显著,但提高IFN-γ/IL-4的比例,对淋巴细胞增殖和NK细胞的杀伤活性影响不明显.试验表明,混饮低剂量ChlFN-α后可调节肉鸡的细胞免疫功能及细胞因子水平,增强肉鸡的抗病能力.