广西规模鸡场鸡白血病感染情况调查

用IDEXX公司的禽白血病(ALV)3种ELISA试剂盒对广西规模鸡场不同类别鸡群的血清、喉头/泄殖腔棉拭子、蛋清样品进行禽白血病J亚群(ALV-J)抗体、A和B亚群(ALV-AB)抗体、p27抗原进行检测,发现规模场不同种类鸡群感染程度不同。血清中ALV-J阳性率11.33%(338/2 982),其中核心群鸡阳性率8.87%(86/970),生产群鸡阳性率为12.87%(138/1 072),种公鸡阳性率为12.13%(114/940);p27抗原检测蛋清阳性率为5.48%(43/785),喉头/泄殖腔棉拭子阳性率为15.25%(122/800),蛋清样品检出率低于喉头/泄殖腔棉拭子。另对2个场血清和蛋清ALV-AB、ALV-J、ALV(p27抗原)进行对应检测比较,发现三者没有线性关系,即ALV-J感染率高,ALV-AB和p27抗原检测率不一定高;ALV-AB抗体高,ALV-J和p27抗原阳性率也不一定高。     

河南地区禽白血病病原学和血清学调查

为进一步了解河南省禽白血病(AL)感染情况,采用商品化ELISA试剂盒对河南省不同地区、不同品种(系)、不同代次的12个祖代禽场、父母代场和商品代场,共计360份血清样品和300份蛋清样品,分别进行了ALV-J、ALVAB血清抗体和P27抗原的个体阳性率、场群阳性率、ALV-J、ALV-AB血清抗体及P27抗原共感染数据分析。结果表明:ALV-J、ALV-AB血清抗体和P27抗原的平均个体阳性率分别为14.72%、7.22%和15.00%,其中祖代禽场分别为15.83%、8.33%和14.17%,父母代禽场分别为16.67%、2.22%和20%,商品代禽场分别为12.67%、10.67%和13.33%,场群阳性率分别为75%、58.33%和58.33%,ALV-J、ALV-AB血清抗体和P27抗原共感染鸡场3个,共感染场群阳性率为30%,6个品种(系)中仅有爱拔益加ALV-J、ALV-AB抗体和P27抗原均为0。不同区域鸡群ALV感染普遍存在、各个品种(系)感染的亚群及其阳性率各不相同,调查结果将为河南省开展禽白血病防控、净化提供一定的理论依据。     

浙江省宁波市部分鸡场鸡免疫抑制性疫病血清学调查

为了解禽白血病、禽网状内皮组织增生症和鸡传染性贫血在本地鸡群的感染情况,对宁波市7个区、县的15个鸡群进行了3种疫病4种抗体的血清学检测。结果显示:362份被检血清中,AB亚群禽白血病病毒(ALV-AB)抗体阳性率为55.0%,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)抗体阳性率为21.5%,禽网状内皮组织增生症病毒(REV)抗体阳性率为32.0%,鸡传染性贫血病毒(CAV)抗体阳性率为66.8%;15个鸡场AB亚群禽白血病和鸡传染性贫血共感染率为100.0%;12个鸡场共感染了3种免疫抑制性疫病,混合感染率高达80.0%。调查结果表明免疫抑制病在宁波市鸡群中非常普遍。     

河南地方品种鸡禽白血病病毒感染状况的调查

为了解河南地方品种鸡禽白血病病毒感染状况,2015年10月至2017年4月,在河南地区9个种鸡场,采集了5个河南地方品种1 450只开产母鸡的泄殖腔拭子、血清和蛋清,利用ELISA方法检测3种样品中的禽白血病病毒p27抗原和血清中的禽白血病病毒A/B亚型、J亚型抗体。结果:河南地方品种鸡群总体ALV p27抗原阳性率为泄殖腔拭子22. 62%、血清26. 83%、蛋清12. 90%;鸡群总体血清ALV-A/B亚型、J亚型抗体阳性率分别为24. 76%和19. 52%。5个品种鸡群的血清ALV p27阳性率依次为河南斗鸡84. 48%、淅川乌骨鸡53. 78%、固始鸡19. 81%、三黄鸡17. 22%、卢氏鸡16. 67%,但同品种不同场区间差异较大。表明河南省地方品种鸡群存在不同程度的ALV感染,且可能存在ALV-A/B亚型和ALV-J亚型的同时感染。     

江苏省徐州市部分地区禽白血病流行病学调查

为了解徐州地区鸡群白血病的感染情况,从2013年3月到2013年12月在徐州部分地区的鸡场随机采样500份,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测gp27抗原阳性率以及J亚型白血病(ALV-J)和AB亚型白血病(ALV-AB)的抗体阳性率。调查显示,徐州大多数鸡场均存在白血病的感染,其中ALV-J为阳性的鸡场有8所,ALV-J最高阳性率达28.6%,ALV-AB最高阳性率为23.3%,ALV-AB感染的年龄段存在一定差异,感染率最高的年龄段是75周龄;肉鸡ALV-J、ALV-AB感染率较高,蛋鸡也存在ALV-J感染的情况,说明ALV-J的宿主范围正在扩大。     

2017—2019年安徽省部分禽场禽白血病定点监测

为了解安徽省部分禽场禽白血病病毒（avian leucosis virus，ALV）感染情况，2017—2019年，采用ELISA检测试剂盒，对安徽省59个禽场的3 275份血清和2 100份蛋清进行ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原检测，并对相关结果进行三间分布数据分析。结果显示：2017—2019年ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原平均抗体阳性率分别为19.36%、7.66%和5.90%；从不同养殖规模看，大型场的ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原的场阳性率分别为73.91%、73.91%和62.52%，均高于中型场和小型场；从不同场点类型来看，祖代场的ALV-J抗体和p27抗原的个体阳性率最高，分别为21.52%和6.01%，商品代场的ALV-A/B抗体的个体阳性率最高；从不同养殖品种看，黄羽肉鸡ALV-J抗体个体阳性率（26.24%）、鸭ALV-A/B抗体个体阳性率（12.31%）均高于其他禽种。结果表明，安徽省禽白血病流行较为严重，尤其是大型场、祖代场以及肉鸡和鸭的ALV感染风险较高。建议进一步加强对高风险禽场和禽群的禽白血病监测，持续推进禽白血病净化工作。     

2009-2010年山东地区蛋鸡禽白血病病原学和血清学调查

为了解山东地区蛋鸡禽白血病( Avian Leukosis,AL)的流行病学情况,从泰安、临沂、青岛、聊城等4个地区的祖代种鸡场及其具有亲缘关系的父母代、商品代鸡场采集1827份血清,其中祖代鸡血清597份、父母代鸡血清710份、商品代鸡血清520份;并采集1209份泄殖腔棉拭子,其中祖代鸡棉拭子597份、父母代鸡棉拭子460份、商品代鸡棉拭子152份.通过ELISA检测试剂盒进行了血清的ALV-J、ALV-AB抗体检测、泄殖腔棉拭子的P27抗原检测.结果显示:祖代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为0、0.84％、17.93％,其中不同地区P27抗原阳性率存在较大差异,泰安、聊城、青岛地区P27抗原阳性率分别为52.5％、0.58％、0;父母代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为8.45％、3.10％、30.48％,不同地区之间三者差别较大;而商品代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为13.46％、8.65％、18.42％,不同地区之间三者也存在较大的差别.祖代、父母代及商品代间抗体或抗原阳性率高低的明显相关性,提示存在垂直感染的可能性.山东地区祖代种鸡未检测到ALV-J抗体,ALV-AB抗体检出率极低,仅为0.84％,但个别祖代鸡场P27抗原的阳性率极高,可能存在免疫耐受感染;父母代、商品代鸡群抗体阳性率和抗原阳性率均比祖代高,说明它们已有ALV-J、ALV-AB的感染;父母代及商品代鸡群ALV-J抗体水平都高于ALV-AB抗体水平,说明山东省内AL以ALV-J感染为主,应注意研究其传播途径,加强检疫净化.     

天津市种鸡场禽白血病的流行病学调查

为了解天津地区种鸡场禽白血病(Avian Leukosis,AL)流行情况,在全市8个父母代种鸡场采集了血清样本2024份,泄殖腔棉拭子2030份,通过ELISA试剂盒进行了ALV-J、ALV-AB抗体检测及P27抗原检测,检测结果显示,天津地区种鸡场禽白血病AB亚群抗体阳性率4.25%;禽白血病J亚群抗体阳性率11.12%。明显高于ALV-AB抗体阳性水平,P27抗原的阳性率10.74%,表明天津市种鸡场禽白血病感染普遍。     

多次油苗免疫刺激禽白血病内源性抗体的表达研究

本试验将200只SPF鸡分为免疫组和非免疫组两组,在4周龄时混入HBD祖代鸡群2个批次,100只/组。将SPF鸡均匀的分布到5个鸡舍,每组每舍20只。免疫组的SPF鸡均按照祖代鸡的免疫程序进行油苗、活苗免疫;非免疫组不进行油苗免疫,仅免疫活苗。分别在9、19、26、30、34周龄采集SPF免疫组和非免疫组的血清,检测ALV-J、ALV-AB的抗体。SPF免疫组和非免疫组ALV抗体的差异显著性分析结果显示:在HBD祖代鸡群ALV-AB和ALV-J亚型抗体水平正常的情况下,随着油苗免疫次数的增加,SPF免疫组和非免疫组在26周龄时的ALV-J和ALV-AB亚型的抗体水平均差异极显著(P0.001),在19周龄和34周龄均有不同程度的差异。混入的HBD祖代鸡群的种蛋禽白血病(ALV)p27和病原检测均为阴性,不存在水平传播的情况。这说明经多次油苗免疫刺激后,鸡只携带的内源性ALV诱导产生的抗体能被ALV-AB和ALV-J亚型检测试剂盒所检测到。     

某蛋用型父母代鸡群种蛋中禽白血病病毒的检测

为了检测某蛋用型父母代鸡群是否存在外源性禽白血病病毒（ALV）的感染,收集该鸡群的92枚鸡胚,每枚鸡胚无菌取蛋清2份,一份用禽白血病病毒p27抗原检测试剂盒直接检测群特异性p27抗原,同时分别将92枚鸡胚蛋清接种DF1细胞,培养维持8d后取细胞上清检测p27抗原。将p27抗原阳性样品,分别用针对ALV-J和ALV-AB的单因子血清做间接免疫荧光检测（IFA）。比较p27阳性检出率。结果表明,直接检测蛋清的检出率高于蛋清接种DF1后的细胞上清,接种DF1细胞后p27抗原阳性样品的IFA检测结果显示ALV-J的阳性率为100%,ALV-AB全部为阴性。说明该蛋用型父母代鸡群存在的外源性ALV感染主要是ALV-J,该研究为针对ALV的净化提供了可行性检测方法。     

2009—2010年中国部分地区进口鸡群禽白血病流行病学调查

为了解禽白血病(avian leukemia, AL)在中国进口品种鸡群中的感染状况,2008年12月至2010年6月,在4个省市各选择1个进口品种鸡场进行禽白血病流行病学调查。此次调查共涉及4个场、5个品种、不同代次、不同生长阶段的115个鸡群共计7000余份样品,分别采集泄殖腔拭子进行p27抗原的检测和血清中的J抗体、A/B抗体的检测。结果表明,中国进口品种鸡群中存在不同程度的ALV-J亚群、ALV-A/B亚群感染,J抗体阳性率普遍高于A/B抗体阳性率,且肉鸡品种的J抗体阳性率高于蛋鸡品种;此外,本次调查结果还显示,产蛋初期的鸡群p27抗原阳性率和J抗体阳性率较高。     

安徽省禽白血病感染的血清学调查及gp85基因的扩增

随机抽取安徽省3个肉种鸡场种鸡及3个地市农贸市场商品鸡的血清样本和泄殖腔拭子,采用ELISA进行鸡白血病检测,并对J亚群鸡白血病病毒抗体阳性鸡群中病鸡的肝组织、全血及上毒细胞提取DNA进行PCR扩增和基因测序。检测结果表明,3个肉种鸡场中J亚群鸡白血病抗体阳性检出率分别为：0、73.50%和15.22%;3个农贸市场商品鸡抗体阳性检出率分别为：12.00%、2.22%和9.10%。3个肉种鸡场A、B亚群鸡白血病的抗体阳性率分别为0、17.93%和1.08%,ALV抗原阳性率分别为2.17%、17.93%和15.22%。PCR检测结果表明,从可疑发病鸡的肝组织和全血中均能扩增出ALV-J gp85特异性片段。结果证实安徽省鸡群中有ALV-J感染,并呈不同程度的流行,应引起高度重视。     

纳米氢氧化铝吸附禽流感病毒灭活疫苗的研制及其对肉鸡抗体效价的影响

自制纳米氢氧化铝佐剂,通过吸附H5N1灭活抗原,制备了纳米铝佐剂疫苗,按照中华人民共和国农业行业高致病性禽流感免疫技术规范标准,免疫肉鸡。经检测发现纳米铝佐剂疫苗组肉鸡产生有效保护抗体时间较油佐剂疫苗和常规铝佐剂疫苗提前3d和7d,抗体峰值达到时间较油佐剂疫苗和常规铝佐剂疫苗提前14d。结果表明,纳米氢氧化铝作为高致病性禽流感H5N1的免疫佐剂,可以更早的刺激动物产生有效保护抗体,纳米铝佐剂禽流感疫苗具有广泛的应用价值。     

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立

利用抗J亚群禽白血病病毒（ALV—J）囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9，建立了检测ALV—J env抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清．结果均为阴性，无交叉反应；抗ALV—J阳性血清与ALV—J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断；ALV—J阳性血清经酸处理后，ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV—J阳性血清样本进行电镜观察，可见ALV—J样病毒粒子及ALV—J样免疫复合物。经与间接免疫荧光（IFA）检测ALV—J env抗体结果比较表明，建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率，群体符合率为8／9。这些结果表明，本研究建立的ELISA方法在ALV—J的诊断中具有很好的应用前景。     

Isolation and some characteristics of a subgroup J-like avian leukosis virus associated with myeloid leukosis in meat-type chickens in the United States.

Several subgroup J-like avian leukosis viruses (ALV-Js) were isolated from broiler breeder (BB) and commercial broiler flocks experiencing myeloid leukosis (ML) at 4 wk of age or older. In all cases, diagnosis of ML was based on the presence of typical gross and microscopic lesions in affected tissues. The isolates were classified as ALV-J by 1) their ability to propagate in chicken embryo fibroblasts (CEF) that are resistant to avian leukosis virus (ALV) subgroups A and E (C/AE) and 2) positive reaction in a polymerase chain reaction with primers specific for ALV-J. The prototype strain of these isolates, an isolate termed ADOL-Hc1, was obtained from an adult BB flock that had a history of ML. The ADOL-Hc1 was isolated and propagated on C/AE CEF and was distinct antigenically from ALV of subgroups A, B, C, D, and E, as determined by virus neutralization tests. Antibody to ADOL-Hc1 neutralized strain HPRS-103, the prototype of ALV-J isolated from meat-type chickens in the United Kingdom, but antibody to HPRS-103 did not neutralize strain ADOL-Hc1. On the basis of both viremia and antibody, prevalence of ALV-J infection in affected flocks was as high as 87%. Viremia in day-old chicks of three different hatches from a BB flock naturally infected with ALV-J varied from 4% to 25%; in two of the three hatches, 100% of chicks that tested negative for virus at hatch had evidence of viremia by 8 wk of age. The data document the isolation of ALV-J from meat-type chickens experiencing ML as young as 4 wk of age. The data also suggest that strain ADOL-Hc1 is antigenically related, but not identical, to strain HPRS-103 and that contact transmission of ALV-J is efficient and can lead to tolerant infection.     

用ALV-J gp85单克隆抗体证明蛋鸡存在J亚群禽白血病

采用免疫组化法，对病理学初步诊断为蛋用型鸡J亚群白血病的自然发病鸡的肿瘤、骨髓、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、心脏、胰脏、输卵管、卵巢、腺胃、骨骼肌、大脑、坐骨神经，用特异性抗J亚群禽白血病病毒(ALV—J)囊膜糖蛋白gp85的单克隆抗体进行检测，待检的组织切片中均检出阳性抗原，免疫组化的研究结果与病理学诊断结果相一致。在国内外首次发现并报道蛋用型鸡J亚群禽白血病的自然病例。     

商品蛋鸡成髓细胞瘤、血管瘤型J亚群白血病病毒特性的研究

2007年7月山东某蛋鸡场150日龄海兰褐蛋鸡发病,前期经病理学和免疫组织化学检测证明和ALV—J密切相关。取4只病鸡的肝组织处理后接种鸡胚成纤维细胞（CEF）培养,用ALV—J单抗G2-3进行间接免疫荧光检测,结果呈现强阳性,将反应为阳性的4株病毒分别命名为WS0701、WS0702、WS0703和WS0704;根据ALV-J原型株HPRS-103的序列设计1对针对外源性ALV—J的引物P1和P2,提取阳性CEF基因组DNA作为模板,PCR扩增后,得到长度为924bp的片段;PCR扩增产物测序结果显示,与HPRS-103的同源性为95．0％～97．5％,与国内分离株的同源性为92．0％～95．9％;遗传变异分析结果表明成髓细胞瘤型、血管瘤型ALV-J与国内毒株的同源性较远,而与HPRS-103的同源性最近,这说明ALV—J在蛋鸡体内复制的过程中有返祖现象,并呈现了新的肿瘤学特征。     

J亚群禽白血病对商品蛋鸡生产性能影响的研究

试验对一个大型蛋用鸡场的不同种源商品代蛋鸡群的J亚群禽白血病毒(ALV-J)感染状态与鸡群总死淘率、肿瘤发生率、生产性能的相关性进行了研究。结果表明,从ALV-J感染的父母代鸡场引进的商品代蛋鸡,从性成熟开始不仅整个鸡群的ALV-J抗体阳性率较高,而且总死淘率显著高于生产标准,主要是由肿瘤/血管瘤引起。这些鸡群的产蛋性能也显著低于生产标准。从2009年下半年起,选择无ALV-J感染的父母代种鸡场作为种源,引进19批约190万只雏鸡,分别在1~21周龄抽检血清ALV-J抗体,均为阴性,且不再有肿瘤/血管瘤发生。两年多来,这些无ALV-J感染蛋鸡群的总死淘率不仅比ALV-J感染鸡群降低8.34%,也显著低于生产手册的规定,产蛋率及产蛋高峰持续期均显著高于生产标准。临床和试验观测表明,种鸡感染ALV-J能显著影响商品代蛋鸡的生产性能,选择无ALV-J感染的种源是规模化养鸡场生物安全的最重要措施之一。     

地方品种HR土鸡不同亚型禽白血病病毒的共感染

为研究HR土鸡中存在的不同亚型禽白血病病毒(ALV)共感染的情况,本实验分别采集46只HR土公鸡的泄殖腔棉拭子和455枚鸡蛋卵白样品,采用ELISA试剂盒检测p27抗原;并采用相应的ELISA试剂盒分别检测卵黄中J亚型ALV(ALV-J)和AB亚型ALV(ALV-AB)抗体。结果表明:HR土公鸡泄殖腔棉拭子样品中p27检出阳性率为87%(40/46),卵白检出率为74.7%(340/455);而卵黄中ALV-J和ALV-AB抗体阳性率分别为0(0/30)和80%(24/30)。无菌采集初步筛选p27抗原检测为阳性的5只HR土公鸡的抗凝血接种CEF,采用抗ALV-J和ALV-A的单克隆抗体进行IFA检测,结果显示5份样品中ALV-A和ALV-J的阳性率均为100%(5/5)。同时选取HR土鸡分离株HR332进行PCR扩增鉴定,结果表明分离株HR332存在ALV-J(HR332J)和ALV-A(HR332A)。其中,HR332J与11株ALV-J国内外参考株的同源性为92.4%～97.9%;HR332A与ALV-A参考株RSA-A、MQNCSU的同源性分别为90.1%和89.7%,与国内分离株SDAU09E2的同源性为99.0%。本研究显示,地方品种HR土鸡存在不同亚型ALV共感染,同时ALV-A和ALV-J共感染同一个鸡的现象已经存在。     

从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒

将表现为典型 J亚群禽白血病肿瘤的病料分别接种于鸡胚成纤维细胞和 DF1细胞 ,采用间接荧光抗体试验(IFA)和 PCR方法 ,从这些肿瘤病料中分离和鉴定出 8株 J亚群禽白血病病毒 (AL V- J)。对证明感染了 AL V- J的细胞继续培养 ,并用禽网状内皮组织增生症病毒 (REV)的特异性单抗及引物做 IFA和 PCR,在 8株 AL V- J中 ,有 3株AL V- J的感染细胞中同时有 REV感染。由此表明 ,发生肿瘤的肉鸡中 ,AL V- J和 REV的共感染已相当普遍。将这 3株 REV- SD0 0 0 3、SD0 0 0 4和 SD0 10 2的 3′- L TR用 PCR扩增、克隆和序列比较 ,发现分离的 SD0 0 0 3、SD0 0 0 4和SD0 10 2与国内的另外 2株 REV- SD990 1和 HA990 1的同源性为 96 .7%和 96 .1% ;而与另 1株 REV参考株鸭脾坏死性病毒 (SNV)的同源性高达 99%。