凤尾菇菌丝原生质体的分离与再生

本文利用一种自制的真菌细胞壁溶解酶——溶壁酶(Lywallzyme),通过酶解试验比较了菌龄、渗透压稳定剂、酶解温度及酶解时间等对凤尾菇菌丝原生质体分离的影响。通过原生质体的再生试验,系统地比较了菌龄、渗透压稳定剂和酶解时间及再生培养基对凤尾菇菌丝原生质体再生频率的影响,从而找到凤尾菇茵丝原生质体分离和再生的较适条件。在适宜的酶解条件下可分离到大量有活力的原生质体,其产量最高可达3×10~7个/me以上。本试验中,原生质体的再生频率最高为4.98％。同时,本文还对凤尾菇菌丝原生质体再生过程的形态变化作了适当描述。     

云芝菌丝体原生质体制备与再生条件的研究

研究了不同酶种类、酶浓度、酶解温度和时间、渗透压稳定剂、pH值及菌龄等因素对云芝原生质体制备以及不同再生培养基对云芝原生质体再生的影响。结果表明,菌龄3d的云芝菌丝体用3％溶壁酶,以pH5．5,0．4mol／L的KCl为稳定剂,30℃酶解5h获得的原生质体产量最高;用RMl再生培养基培养,原生质体再生率最高。     

灵芝原生质体的制备与再生研究

以泰山灵芝为试材,研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH、渗透压稳定剂对灵芝原生质体制备和再生的影响.结果表明:菌龄为7d,以甘露醇为渗透压稳定剂,采用酶浓度2.0％的溶壁酶,pH为6.0,31℃条件下酶解2.5h为灵芝原生质体制备的最适条件;并在原生质体再生固体培养基(以0.6 mol/L蔗糖为渗透压稳定剂)上,原生质体的再生率最高.     

灵芝原生质体形成与再生的研究

该文通过对原生质体形成与再生条件如酶类、渗透压稳定剂、ｐＨ、培养基、菌龄、酶解温度和时间等因素的研究表明，以Ｄ培养基、葡萄糖为渗透压稳定剂，酶液浓度为１５％Ｌｙｗ＋０２％Ｌｙｓ，ｐＨ４５～５５，培养菌龄为７２～９６ｈ，酶解温度为２０～２５℃条件下，酶解６０～９０ｍｉｎ，其破壁效果为最佳，原生质体形成和再生率都最高。     

毛木耳原生质体制备与再生条件的研究

通过对毛木耳原生质体制备与再生条件的系统研究,确定了原生质体制备的最佳出发菌龄、融壁酶浓度、酶解温度及酶解时间、渗透压稳定剂种类、浓度及最佳再生培养基配方。     

白灵菇原生质体制备与再生的研究

详细研究了酶系统、渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间、pH值、菌龄等因素对白灵菇(Pleurotusnebrodensis)原生质体制备与再生的影响。通过单因素和正交实验确定最适条件为:采用7日龄菌丝,以0.6M甘露醇作为渗透压稳定剂,pH5.8时,在1.5%溶壁酶 0.2%蜗牛酶 0.3%纤维素酶的作用下,32℃水浴酶解2.5～3h,可得到1.7×107/mL原生质体,再用双层混合再生培养基培养,可达到1.3%再生率。     

姬松茸原生质体制备及再生条件优化

以姬松茸JS01为试材,通过单因素试验和正交实验,利用SPSS 22.0软件进行分析,对姬松茸原生质体的制备及再生条件进行优化,以提高姬松茸原生质体产量和再生率。首次通过在再生培养基中添加细胞壁前体物质及营养因子,进一步提高姬松茸原生质体的再生率。结果表明:原生质体最佳制备条件为菌龄7d,以0.6mol·L~(-1) KCl作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度1.5%,酶解温度30℃,酶解时间4.0h,pH 6.0,在该条件下原生质体产量高达1.97×10~7个·mL~(-1);菌龄6d,以0.6mol·L~(-1) MgSO_4作渗透压稳定剂,溶壁酶浓度2.0%,酶解温度30℃,酶解时间3.0h,pH 6.5,再生培养基为GM时,原生质体的再生率最高,为1.12%。再生培养基中添加纤维二糖和维生素B_1后,再生率为1.17%,较优化结果提高了4.46%。该研究为姬松茸在菌种提纯复壮、原生质体诱变、原生质体融合育种、原生质体基因组重排等遗传学研究提供参考依据。     

灵芝原生质体制备与再生条件的研究

本文研究了不同酶浓度、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂及菌龄等对灵芝菌丝原生质体制备与再生的影响，结果表明，菌龄为60h的菌丝，采用浓度为2％的溶壁酶以0．6M的甘露醇作渗透压稳定剂于pH6.5，30℃下酶解2h，当酶解液中湿菌体含量对0．1g/mL时，其原生质体数可达2^*10^7个/mL，且再生率达8．5％。     

白灵菇原生质体制备及再生的研究

研究了酶解时间、酶解温度、菌龄和渗透压稳定剂对白灵菇原生质体制备与再生的影响。结果表明，自灵菇用1％蜗牛酶与1％纤维素酶的混合酶液制备原生质体，酶解时间应控制在3h之内，以2h为最宜；酶解温度28℃左右；适宜菌龄为5目龄；以0．6mol／L蔗糖配制酶解液和作为制备与再生渗稳剂均最优，再生率最高，可达2．1％，比以甘露醇作为渗稳剂再生率提高近3倍。     

双孢蘑菇同核原生质体育种技术研究：Ⅰ.同核原生质体的分离与鉴定

通过对溶壁酶组成及浓度,渗透压稳定剂、菌丝培养方法等研究,建立了有效的双孢蘑菇原生质体制备与再生系统。采用1.5％Lywallzyme、0.6M KCl为渗透压稳定剂,25℃酶解4小时,原生质体的产量可达到10~7个/ml;纯化后的原生质体在0.6M蔗糖为渗透压稳定剂的PDMA培养基中,25℃恒温培养5～7天,再生率达1%以上,根据原生质体再生菌落出现时间的先后顺序,并以菌落形态特征、菌丝生长速度。羧甲基纤维素酶(Cx酶)活性及子实体形成能力上的差异为鉴定同核体的主要标记,从两种形态类型,不同来源的12个双孢蘑菇菌株中均分离到同核原生质体,同核率为2％～15%,平均为11.75％。     

亚侧耳原生质体的制备与再生研究

主要探讨了亚侧耳原生质体制备和再生条件.结果表明,以0.6 mol·L-1.的NaCI配制成浓度为2%、pH值6.5的溶壁酶溶液,32℃恒温水浴酶解菌龄8 d的亚侧耳菌丝体3 h,获得原生质体的产量最高.0.6 mol·L-1的蔗糖作为再生培养基中的渗透压稳定剂时,再生率最高为6.0×10-2.     

猪苓原生质体制备与再生条件的研究

采用L16(4)正交设计,得出猪苓原生质体制备最佳条件是取菌龄7d的菌丝体,以2%溶壁酶,0.6mol·L-1甘露醇作为渗透压稳定荆,在33℃下酶解3h,原生质体数达到2.62×107个·mL-1.原生质体再生的最佳条件是取菌龄5d的菌丝体.以2%溶壁酶,0.6mol·L-1蔗糖作为渗透压稳定剂,在27℃的条件下,酶解3h.猪苓原生质体再生的最佳培养基为葡萄糖10g、麦芽糖5g、酵母粉4g、0.6mol·L-1甘露醇、琼脂5.5g,定容到1 000mL.再生率可达到0.65%.     

金顶侧耳原生质体制备与再生条件的研究

采用单因素以及正交试验法探究金顶侧耳原生质体的制备及再生条件,结果显示:加富PDA液体培养基培养5天的菌丝,在以蔗糖为渗透压稳定剂配制2%浓度的溶壁酶条件下,30℃酶解2.5 h,原生质体得率为2.36×107个/m L;选择蔗糖再生培养基,再生率可达0.71%。     

松茸原生质体制备与再生的研究

本文针对酶种类及其浓度 ,酶解时间、渗透压稳定剂的种类及其浓度、菌龄及菌丝形态等对松茸菌丝原生质体制备与再生影响的研究。结果表明 ,采用三角摇瓶培养 3 d后、静置培养60 h的松茸菌丝体 ,在 3 0℃ ,p H6.5的条件下 ,以 0 .6M蔗糖为渗透压稳定剂 ,通过 2 .5 %溶壁酶、0 .5 %崩溃酶的复合酶进行2 .5 h酶解 ,松茸原生质体制备率与再生率最高     

硫磺菌原生质体的制备

试验分析了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解温度和时间等因素对硫磺菌原生质体产出量的影响。结果表明：采用液体发酵培养第5天的菌丝体，以0．6mol／L KCl作渗透压稳定剂，加入1．5g/L混合酶（即纤维素酶与蜗牛酶按1：1混合）在30℃下酶解3．5h，制备原生质体效果最佳，原生质体产出量可达8．9×10^7个／mL。     

茶薪菇原生质体制备及诱变的研究

对茶薪菇原生质体的分离及再生进行研究 ,结果表明以溶壁酶的去壁效果最好 ,不同酶组合可提高去壁效果 ,酶解液在 2 0 %时原生质体释放量很高。酶解适宜温度为 30℃ ,培养 4～ 5d的菌丝酶解 3h释放的原生质体最多。以甘露醇作为渗透压稳定剂 ,原生质体的释放量及再生率均较高 ,再生率达到 5 %左右 ,经紫外线照射 2 0s,致死率即达 70 %以上     

草菇原生质体制备与再生及诱变效应研究

研究了草菇原生质体制备与再生的最佳条件。试验结果表明,溶壁酶浓度2％,温度32℃,pH自然,以0．8mol／L甘露醇为渗透压稳定剂,用菌龄3d的菌丝酶解2h,可获得最佳原生质体再生效果。试验还分析了紫外线(UV)、^60Co-γ射线、硫酸二乙酯(DES)对草菇原生质体的诱变效应。     

松口蘑菌丝原生质体分离条件的研究

本文比较了不同酶浓度、渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间、酶解系统pH值和菌丝生理状况等因素对松口蘑菌丝原生质体分离的影响。实验结果表明,1克菌丝采用2％单一溶壁酶LYWALLZYME以0.6M甘露酵作渗透压稳定剂,pH6.5,30℃下酶解4小时,可得到10~7/ml原生质体。     

滑菇原生质体分离条件的研究

本文研究了渗透压稳定剂的种类与浓度、pH值、菌龄、酶解温度与时间等因素对滑菇原生质体分离效果的影响。结果表明 ,利用菌龄为 13天的菌丝和 2 0 %的溶壁酶 ,以pH值 6 0M的甘露醇作为渗稳剂 ,在 2 5℃下酶解 5小时是滑菇原生质体分离的较适宜条件。     

鸡鮙菌和粗柄鸡菌的原生质体制备与再生研究

在适宜培养条件下,振荡培养4～5d的鸡纵菌(Termitomyces albuminosus)和粗柄鸡■菌(T.robustus)幼嫩菌丝,经过滤洗涤收集,以0.6mol/L KCl为渗透压稳定剂,用1％纤维素酶加0.5％蜗牛酶的混合酶液处理,于28℃酶解3～4h,可获大量原生质体,产量达2.82×10~6～3.24×10~6/mL。但所形成的原生质体再生能力较差,再生率仅0.6％～1.2％。本文还详细研究了菌龄、酶系统、酶解温度和时间等多种因素对这两种鸡纵菌原生质体形成和再生的影响。