猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP检测方法的建立

针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因设计了2对特异性引物,建立了快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的环介导等温扩增(RT-LAMP)方法,并进行了酶切鉴定以及特异性、灵敏性和临床试验确定。酶切鉴定试验结果与RT-LAMP结果完全符合;特异性试验结果表明本研究所建立的RT-LAMP检测方法只针对猪繁殖与呼吸综合征病毒;灵敏度试验结果显示RT-LAMP是RT-PCR方法的100倍;临床试验中RT-LAMP方法的检出率与病毒分离的符合率为100%。本检测方法操作简单,不需要复杂的仪器,是适合基层和现场检测而无需送至诊断实验室的快速灵敏实用的分子生物学检测方法。     

猪附红细胞体环介导等温扩增快速检测方法的建立

为了建立猪附红细胞体的快速实用分子生物学检测方法,试验采用环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种灵敏、特异、快速的分子生物学检测方法,用10倍系列稀释的DNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试,同时对新孢子虫、弓形虫、瑟氏泰勒虫病原体进行检测以验证LAMP技术的特异性。结果表明:利用LAMP技术成功检测到猪附红细胞体基因区,此方法的灵敏度可达到5×105倍稀释的DNA分子水平,并且特异性强,对新孢子虫、弓形虫、瑟氏泰勒虫病原体检测均为阴性。     

快速检测小反刍兽疫病毒RT—LAMP方法的建立

本研究采用一步法反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测小反刍兽疫病毒(PPRV)的方法.针对PPRV-N基因保守区域设计4条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,可以实现DNA的梯状等温扩增.优化RT-LAMP的反应体系,并检验其灵敏性、特异性.一步法RT-LAMP检测方法从核酸抽提到检测结果出现仅需70 min,该方法具有良好的特异性,与同属的犬瘟热病毒无交叉反应,灵敏度是RT-PCR的1 000倍,是巢式RT-PCR的100倍.结果证明,RT-LAMP方法可快速、灵敏、特异、经济地检测PPRV,在基层和实验室都具有良好的应用前景.     

非洲马瘟病毒RT-LAMP检测方法的建立

为了建立非洲马瘟病毒(AHSV)环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测方法,基于AHSV VP7基因保守序列,设计2对特异性扩增引物。通过对反应体系中各组分浓度,反应温度及时间的优化,建立了快速、灵敏的AHSV RT-LAMP检测方法,并对该方法特异性、灵敏度、重复性进行探索。结果表明,在63℃恒温下反应45min,便可进行高效率的特异性扩增。反应产物经琼脂糖凝胶电泳和染料可视化鉴定,能够快速有效检测AHSV。用建立的方法检测马属动物易感的4种疫病病原,结果均为阴性,证实具有较高的特异性。灵敏度是RT-PCR的1 000倍。建立了AHSV RT-LAMP检测方法,具有快速、特异、灵敏、操作简单、设备要求低的特点,适合用于现场AHSV快速检测。     

猪巨细胞病毒检测方法研究进展

猪巨细胞病毒病是危害养猪业的一种重要传染病。文章概述了猪巨细胞病毒(PCMV)实验室检测方法的研究进展。在细胞生物学方面,主要依靠病毒分离培养、酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFA)等病毒特异性抗原及其抗体的检测等。在分子生物学方面,主要依靠国内外相继建立起的聚合酶链式反应(PCR)、荧光定量PCR、环介导等温扩增(LAMP)和原位杂交(ISH)技术等。介绍和比较了各种方法的优缺点和实用性,为临床科技工作者建立快速、简便、准确、实用的检测方法提供参考。     

犬细小病毒LAMP检测方法的建立

为提高犬细小病毒(CPV)的检出率,降低检测成本,本研究采用环介导等温扩增(LAMP)技术,建立了一种新型敏感、特异、快速、简便、实用的检测CPV的技术。针对CPVVP2基因保守区设计6条引物,进行LAMP扩增,对扩增反应进行优化,并检测其敏感性、特异性。所建立的方法最佳反应时间为60min,具有良好的特异性,与同属的其它病毒无交叉反应。该方法对CPV的最低检出量为9.3×10-5ng/μL,其敏感性是PCR的100倍。结果表明,该方法特异性强、敏感性高,并且操作简便、检测成本低,检测时间短,在CPV的综合防治和早期诊断方面具有很高的实用价值。     

口蹄疫病毒分子生物学检测方法研究进展

口蹄疫是一种高度传染的病毒性疫病,及早诊断意义重大。分子生物学检测方法在口蹄疫病诊断和病毒分型过程中具有许多优势,已经广泛应用。作者对实时荧光PCR法、多重PCR法、核酸杂交法、基因芯片法、环介导等温扩增法及核酸序列依赖扩增法等进行分析和比较,对各种方法的检测效率、灵敏度、优缺点及国内外的研究情况进行综述,为口蹄疫病毒分子生物学检测方法的应用与深入开发提供参考。     

鸭圆环病毒LAMP可视化检测方法的建立

根据GenBank中DuCV基因序列,在保守区设计了6条特异性引物,并对反应条件进行优化,建立了一种适用于鸭圆环病毒（DuCV）的环介导等温扩增快速检测方法（LAMP）。该方法对H9亚型禽流感、小鹅瘟、鸭瘟、鸭肝炎、鸭副黏病毒均无扩增反应;且扩增反应只需在常规水浴锅中进行,1小时内即可完成反应;对DuCV模版DNA的最小检测限为10龟,灵敏度是一步法PCR的1000倍。本研究建立的LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,适合在基层进行DuCV的快速检测。     

猪瘟病毒NASBA-RT-LAMP快速检测方法的建立

本研究基于核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)和反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种针对猪瘟病毒的,快速、灵敏、特异的两步法检测技术。该方法的检测灵敏度与反转录巢式PCR(RT-NestPCR)相当,最低能检测出46 pg/μL的病毒RNA。该方法的建立为猪瘟病毒的快速诊断提供了新思路。     

禽新型黄病毒RT-LAMP检测方法的建立

根据环介导等温扩增技术(LAMP),建立了一种适用于禽新型黄病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)快速检测方法。根据禽新型黄病毒E蛋白基因序列,在保守区设计了一套针对禽新型黄病毒基因8个区域的6条特异性引物,并对反应条件进行优化。结果表明该方法对NDRV、GPV、MDRV、NDV、ILTV、FPV均无扩增反应,并可通过反应液是否有沉淀或向反应液中加入荧光染料来对结果进行可视化观察;扩增反应只需要在常规水浴锅中进行,45min内可完成反应;该方法对禽新型黄病毒RNA的最小检测限为1pg,灵敏度是一步法RT-PCR方法的100倍。本研究建立的RT-LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,适合在基层进行禽新型黄病毒的快速检测。