新生牛血清促细胞生长活性检测方法的建立与应用

牛血清是医药生物技术产品中重要的原辅材料之一,做好牛血清的质量控制是提高生物制品质量的重要环节。本研究通过应用PK15、BHK21和ST三种兽用生物制品研制中常用的细胞作为载体,选用国内同等价位5个不同厂家生产的新生牛血清作为比较对象,采用细胞倍增时间测定法、细胞克隆形成率测定法、细胞三次连续传代培养法、MTT比色法和微量终点稀释法五种血清质量鉴定的方法进行比较,检测新生牛血清的促细胞生长活性,最终确定了MTT比色法作为便捷高效快速筛选新生牛血清的检测方法。     

不同生长时期牛血清对细胞培养效果的影响

[目的]为了检测不同生长时期的牛血清的细胞培养效果,从而在今后的实验中更加合理地选择牛血清进行细胞培养。[方法]实验采用两组采自不同年龄段的牛血清对Sp2/0—Ag14细胞进行培养,并对细胞生长的细胞数量、细胞形态等定期进行测定及观察并绘制出细胞生长曲线,计算出细胞倍增时间,以比较两组牛血清细胞培养的效果。实验分为两组:一组为3月龄采血的牛血清(A组),另一组为14日龄采血的牛血清(B组)。[结论]结果表明,应用两组牛血清培养的Sp2/0—Ag14细胞的培养倍增时间分别为A组牛血清17.8h和B组牛血清17.1h;表明B组牛血清的细胞培养效果优于A组牛血清。     

如何做好新生犊牛血清的生产管理和质量监控

进行动物细胞、器官或组织的培养时，大多都需要在培养基中添加必需的新生犊牛血清或者胎牛血清。由于价格上新生犊牛血清比胎牛血清要低得多，并且也足以满足一些常规培养的要求，因此，新生犊牛血清制品在很长一段时间内会拥有广阔市场，生产这一产品会带来很大经济效益。由国家药品监督管理局颁布的《中国生物制品生产用主要原辅材料质控标准》(2000年版)，首次登录了“牛血清”条目，     

谈新生牛血清的质量控制

新生牛血清是指出生14h之内的未吃初乳的犊牛血清,也有人称之为小牛血清、犊牛血清等.由于它未受初乳影响,具有丰富的营养物质,抗体、补体中的有害成分最少,因而在生物学领域中得到了广泛应用,特别是在生物制品的生产制造过程中得到了大量应用.     

用供卵牛血清体外培养牛胚胎试验

牛受精卵的培养及移植一般用牛胎血清、犊牛血清、新生犊血清和去势牛血清等。这些血清对受精卵发育的有效性差异很大,使用前需进行试验。本试验以供卵牛血清,培养新鲜和解冻后的胚胎,比较其发育效果。     

某些因素对牛和小鼠类胚胎干细胞分离与培养的影响

以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料 ,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离 ;在 ES细胞分离与克隆中 ,以 15 %～ 2 0 %犊牛血清为宜 ,在 DMEM(L)培养基中添加 0 .1μmol/LNa2 Se O3 0 .1mmol/Lβ-巯基乙醇 10 μg/L IGF 10 0 0 IU/m L L IF,能显著提高牛 ES细胞分离与克隆效率 ;在TCM199、DMEM(高糖 )和 DMEM(低糖 ) 3种培养基中 ,低糖 DMEM更适宜于牛 ES细胞的分离 ;优秀胚胎形成的团状 ICM更适宜于分离与克隆 ES细胞 ,在 37℃用低浓度消化液处理 ICM或 ES细胞集落 ,再以机械将其离散为细胞小块 ,ES细胞克隆效率最高。     

健康牛血清游离氨基酸的分析

使用日立835-50型氨基酸分析仪对30头健康牛血清的游离氨基酸进行了分析。犊牛血清的游离氨基酸的总含量比成牛血清多50mg/1000ml;每种游离氨基酸的浓度也是不一样的,有的是成牛高,有的是犊牛高。因此,如果用多份成牛和犊牛血清进行组织培养,效果可能会好。     

牛血清的研究进展

一、引言1.牛血清的研究进展。随着现代生物技术如基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术等广泛在生物制品的生产、研究中应用,对细胞培养过程中培养基的质量要求越来越高,目前培养基中的主要成分中,动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要的的作用。在动物血清中,牛血清的应用又是最为广泛的,所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材     

牛血清的研究进展

一、引言1.牛血清的研究进展。随着现代生物技术如基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术等广泛在生物制品的生产、研究中应用,对细胞培养过程中培养基的质量要求越来越高,目前培养基中的主要成分中,动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要的的作用。在动物血清中,牛血清的应用又是最为广泛的,所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材     

牛血清中非特异性因子对貉传染性肠炎病毒增殖的抑制作用

7例从丹麦进口的成牛血清,5例本地成牛血清、3例初生犊牛血清及1例胎牛血清对貉传染性肠炎病毒核内包涵体形成抑制率(平均值)分别为71.6％、77.1％、5.8％及23.4％,30例从丹麦进口成年牛血清、12例本地成年牛血清、12例初生犊牛血清及1例胎牛血清对REV的红细胞凝集抑制价平均分别为1:72.4、1:68、1:54.6及1:64。在有牛血清存在的情况下,应用组织培养增殖病毒时,REV的红细胞凝集价明显下降。牛血清中的抑制因子对猫胎肾细胞株具有亲和性。该抑制因子不是来自抗REV或者与REV有交叉反应的某种病毒的抗体,而是种非特异性抑制因子。     

仔猪血清与胎牛血清培养猪耳缘成纤维细胞的比较性研究

采用组织块贴壁培养法,分别用10%仔猪血清和10%胎牛血清DMEM培养基进行猪耳缘成纤维细胞原代、传代培养。结果表明,两组成纤维细胞生长及形态、贴壁率、生长曲线、细胞增值能力均无差异。仔猪血清能完全能替代胎牛血清对猪耳缘组织成纤维细胞进行培养。     

60Coγ射线辐照的犊牛血清对细胞培养及病毒增殖的影响

现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程,这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系。这些技术几乎都是以细胞培养作为载体而发展起来的,特别是在生物医药领域,细胞培养更具有特殊的作用,更是起到了不可替代的基础性作用。犊牛血清是细胞培养中最重要的培养基,它具有促进细胞增殖和诱导细胞分化等生物学功能,犊牛血清中的外源病毒会影响到生物制品的质量与     

新生牛血清中大肠杆菌噬菌体检测方法的建立

本研究用大肠杆菌标准噬菌体株选择确定的大肠杆菌C-3000作为宿主菌,采用增殖法和噬斑法与双层琼脂平板法,对多个厂家的新生牛血清进行了大肠杆菌噬菌体检测,建立了兽用生物制品细胞培养用新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测方法。     

浅论新生牛血清病毒检测

<正>近年来,生物制品在生产以及应用方面取得了不小的进展,与社会生活的联系也愈发紧密。由于新生牛血清中病毒来源广、种类多,因此针对新生牛血清的病毒检测十分必要。本文通过研究新生牛血清病毒检测的特点和概况,简要分析了常用的病毒检测方法,以期提高牛血清中病毒的检出率,提高我国生物制品质量以及行业水平。1新生牛血清病毒检测概况1.1新生牛血清的定义新生牛血清指的是在一段时间未进食的牛身上经过采血以及除菌过滤后制成的血清,常用于     

胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒2型毒株分离及脱脂奶粉中抗体的检测

本研究旨在对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）进行分离及鉴定。利用BVDV抗原和抗体检测试剂盒检测,提取胎牛血清中的病毒RNA,用5'-UTR巢式PCR进行扩增,PCR扩增产物连接pMD19-T进行测序分析。胎牛血清样品接种MDBK细胞,进行细胞传代培养,通过细胞分离培养、直接免疫荧光抗体检测对实验室进口胎牛血清样品进行病毒分离及鉴定,应用DNAStar对BVDV 5'-UTR、N^pro与GenBank中公布的瘟病毒参考株进行多序列比对,采用Mega 6.0进行遗传进化分析。同时通过包被脱脂奶粉进行间接ELISA检测其中的BVDV抗体。结果显示,胎牛血清中BVDV抗原和抗体均为阳性,并且从胎牛血清中成功分离到一株新的牛源BVDV,命名为BVDV-GC株,该病毒株在MDBK细胞上进行增殖培养时未能引起细胞病变;5'-UTR与N^pro PCR扩增为阳性,扩增产物大小均与预期相符;直接免疫荧光检测荧光信号为阳性;病毒滴度为10^-3.6TCID₅₀/0.1 mL;遗传进化分析表明,该分离株与USMARC-60779（BVDV-2）株有较近的亲缘关系,同属于BVDV-2型毒株;通过包被脱脂奶粉和商品化的ELISA试剂盒进行检测,结果表明脱脂奶粉中存在BVDV抗体。本研究从进口胎牛血清中分离出1株BVDV-2型非致细胞病变病毒,从脱脂奶粉中检测到BVDV抗体,表明进口胎牛血清和脱脂奶粉中都存在BVDV抗原和抗体污染,本研究为后续试验分析提供参考。     

冷冻保护剂和胎牛血清对牛成纤维细胞冷冻效果的影响

以甘油与DMSO为冷冻保护剂,添加5%-20%胎牛血清的DMEM为基础冻存液,对鲁西黄牛皮肤成纤维细胞进行冷冻保存,结果表明:①同浓度DMSO为冷冻保护剂效果优于同浓度的甘油(P<0.05),但添加50%血清时并不明显(P>0.05),可能与较高血清浓度有关,血清对冻存细胞的影响高于冷冻保护剂的作用。②血清浓度一定时,DMSO和甘油浓度在10%-15%时,冻存效果较好。③当甘油与DMSO浓度一定时,血清浓度越高冷冻保存效果越好。④甘油与DMSO浓度一定时(DMSO浓度5%除外),添加10%和20%血清效果无差异(P>0.05)。因此,在实际应用中,考虑成本等因素,血清浓度达到10%时就已经能达到一般试验要求。     

牛血清中蛋白组分初步分析及其对细胞培养的影响

为探讨牛血清中蛋白组分对细胞培养的影响,应用凝胶过滤层析对不同牛血清进行初步组分分析,并应用MTT比色法衡量不同牛血清的促细胞生长作用.结果表明,蛋白组分大小相对较为一致的新生牛血清、商品血清1、2、5(一个波峰)与蛋白组分差异较大的成年牛血清、商品血清3、4(两个或者两个以上波峰)的促细胞生长作用相比较差异显著(P相似文献   

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞,通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力,进而对血清质量作出评价。结果表明,自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96),并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05),具有较好的重复性;而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

不同品种牛血清对3T3L1前脂肪细胞增殖与分化的影响

研究不同品种牛血清对3T3-L1细胞增殖与分化的影响,采用模型细胞体外培养法模拟牛脂肪组织生长环境,为牛大理石纹肉早期选择提供一种可能性的方法。抽取17头秦川牛和28头秦杂牛血清,先制备没灭活和灭活血清组培养细胞,MTT法检测细胞增殖相对数,油红O检测脂肪含量,再用不同品种牛血清培养细胞,检测细胞增殖相对数和脂肪含量,以及用比色法测定三磷酸甘油脱氢酶(GPDH)和脂肪酸合成酶(FAS)活性。结果表明,灭活血清培养细胞的增殖相对数量在分化培养第2和4天与分化脂肪含量在第2、4、6和8天都极显著高于没灭活血清组 (P＜0.01);秦杂牛血清培养细胞的数量在第2和4天显著高于秦川牛 (P＜0.05),秦川牛血清培养细胞分化的脂肪含量在第8天显著高于秦杂牛 (P＜0.05),其他天数没有显著性差异 (P＞0.05);分化第8天的细胞内GPDH和FAS酶活两牛种间没有显著性差异 (P＞0.05)。结果显示自制血清灭活比没灭活的更利于细胞的培养;牛血清品种是影响前脂肪细胞增殖与分化的因素,秦杂牛血清可能更有利于前脂肪细胞的增殖,而秦川牛血清可能更有利于前脂肪细胞的分化,但仍需进一步研究。     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞，通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力，进而对血清质量作出评价。结果表明，自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96)，并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05)，具有较好的重复性；而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。