多黏菌素E对鸡源性大肠杆菌和沙门菌的PAE及其机制初探

从发病鸡的粪便中分离出具有多重耐药性的大肠杆菌O18和鸡白痢沙门菌O2,检测多黏菌素E的最小抑菌浓度(MIC)和抗生素后效应(PAE),测定多黏菌素E接触过的细菌各组乳酸脱氢酶(LDH)和γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)活性变化、电镜观察细胞膜形态、巨噬细胞吞噬细菌数量和细菌对Caco-2的黏附力。多黏菌素E作用后,菌液中LDH和γ-GT活性显著性增高(P0.01),细菌胞膜出现破损或缺失,细菌形态改变,被巨噬细胞吞噬的菌量明显增多(P0.01),细菌对Caco-2的黏附力显著下降(P0.01)。多黏菌素E对鸡源性多重耐药菌株存在PAE,推测其产生机制为破坏细菌细胞膜,改变细菌形态,促进巨噬细胞对细菌的吞噬能力增强,降低细菌对细胞黏附力。     

甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的抗菌活性

【目的】 研究甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的抗菌活性，为临床合理使用甘草查耳酮A抗感染治疗提供依据。【方法】 采用微量肉汤稀释法和平板计数法测定甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）和最小杀菌浓度（minimum bactericidal concentration，MBC）；平板计数法测定1MIC、2MIC、4MIC和8MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌的杀菌效果；吸光光度法测定1/16MIC、1/8MIC、1/4MIC和1/2MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生长的影响；结晶紫染色法测定1/8MIC、1/4MIC、1/2MIC和1MIC的甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制效果以及1/4MIC、1/2MIC、1MIC和1MBC甘草查耳酮A对生物被膜的清除效果；建立小鼠皮肤刀伤模型和皮肤脓肿模型评价甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌感染小鼠的治疗效果。【结果】 甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌临床分离菌株具有良好的抗菌活性，MIC和MBC分别为3.125和12.5 μg/mL。时间-杀菌曲线结果显示，2MIC和1MIC组在6 h内铜绿假单胞菌数量逐渐减少，之后基本维持在1×10⁵ CFU/mL左右；8MIC和4MIC组铜绿假单胞菌的数量一直处于下降趋势，并且分别在14和16 h后均无菌落形成。1/16MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生长影响不明显，而1/8MIC、1/4MIC和1/2MIC甘草查耳酮A可抑制细菌生长。1MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生物被膜形成的抑制率约为70%，1MBC甘草查耳酮A可清除约50%预形成的生物被膜。体内试验结果表明，甘草查耳酮A有助于铜绿假单胞菌感染小鼠刀伤的创口愈合，并减少皮肤脓肿。与对照组相比，甘草查耳酮A和氨苄西林组脓肿中的细菌数量均极显著减少（P<0.01）。【结论】 甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌具有良好的体外和体内抗菌活性，可进一步用于临床治疗铜绿假单胞菌感染制剂的研发。     

致水貂出血性肺炎铜绿假单胞菌胞外产物生物活性及免疫保护力分析

胞外产物在细菌致病过程中发挥重要作用,为探索胞外产物在铜绿假单胞菌致病过程中的作用,首先从铜绿假单胞菌培养液提取其出其胞外产物,利用小鼠模型分析其致病性,并通过细胞证实了该产物对巨噬细胞功能的抑制作用,进一步测定其胞外产物的酶活性并利用LC-MSMS方法对铜绿假单胞菌胞外产物蛋白成分和功能进行分析。结果表明,铜绿假单胞菌胞外产物对小鼠有致病性,能够显著抑制巨噬细胞吞噬细菌活性,其具有淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、卵磷脂酶活性和溶血活性可能在这一过程中发挥关键作用。LC-MSMS分析鉴定所提纯的胞外产物中有153种蛋白成分,涉及多种酶类、细胞结构蛋白和功能性蛋白。用低剂量胞外产物免疫动物对于铜绿假单胞菌感染具有较明显的保护率,可达90%。本试验为揭示铜绿假单胞菌致病机理,研制新型疫苗奠定基础。     

厚朴酚对猪链球菌的抑制作用及对其感染巨噬细胞的影响

为研究厚朴酚对猪链球菌的抑制作用及对其感染巨噬细胞的影响,本试验在不同时间点检测空白组和厚朴酚组的猪链球菌生长曲线和细胞膜通透性;巨噬细胞分为空白组、猪链球菌组和厚朴酚25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组,检测各组细胞活性、吞噬细菌数量和炎症因子水平。结果显示:厚朴酚可使猪链球菌生长幅度降低约68.6%,并改变细菌细胞膜通透性;三个厚朴酚组均可显著提高染菌巨噬细胞活性、吞噬细菌数量和降低炎症因子水平(P0.01);其中100μmol/L厚朴酚组可使染菌巨噬细胞活性提升26.8%,吞噬细菌数量增加5倍,炎症因子水平降低70%左右。     

栀子苷对铜绿假单胞菌毒力因子及生物膜的影响

细菌群体感应控制细菌毒力因子的分泌,抑制群体感应成为抗感染的新途径。本研究通过测定栀子的主要成分栀子苷对铜绿假单胞菌生长的影响,并检测其对铜绿假单胞菌群体感应调控的毒力因子及生物膜形成的影响,结果发现栀子苷的MIC为12.5 mg/m L。在亚抑菌浓度下,栀子苷能抑制铜绿假单胞菌总蛋白酶、弹性蛋白酶、绿脓菌素的分泌以及生物被膜的形成。推测栀子苷通过抑制铜绿假单胞菌群体感应而实现抗感染作用。     

多西环素对大肠埃希氏菌的抗生素后效应试验观察

本试验的目的是观察多西环素对大肠埃希氏菌临床分离株的体外抗菌效果,以及其抗生素后效应(PAE)。试验采用标准肉汤二倍试管稀释法测定体外最小抑菌浓度(MIC),并在MIC的基础上采用菌落计数法分别测定多西环素0.5、1、2、4倍MIC时对细菌的PAE。结果显示,多西环素对临床分离株的MIC为16μg∕m L,在0.5、1、2、4倍MIC时对大肠埃希氏菌临床分离株的PAE分别为0.5 h、1 h、2.5 h和3.5 h。结果表明,多西环素对大肠埃希氏菌临床分离株有明显的PAE,且PAE随药物浓度增大而延长。     

兽药天地

<正> 抗生素后效应系指细菌与抗生素短暂接触后在抗生素被清除的情况下细菌生长仍受抑制的现象。近年来抗生素后效应研究发现许多抗生素的抗菌活性与药物的高峰浓度密切相关,有明显的剂量(浓度)依赖性,体内抗生素不必始终维持在有效血药浓度之上。在 PAE 期中的细菌许多特征发生了改变,使得在治疗中可以延长给药间隔,减少用药剂量,从而减少不良反应的发生;并可降低用药费用。1 β-内酰胺类抗生素多数β-内酰胺类抗生素对 G~+球菌有较明显的 PAE 且呈浓度依赖性。对 G~+杆菌的 PAE 属部分剂量依赖性,且药物浓度降低时,使细菌形成丝状体,其 PAE很短或为负值,在高浓度时使细菌成为球状体,产生明显的 PAE。如头孢孟多,头孢唑林,头孢哌酮,萘夫西林,青霉素的浓度大于最低抗生素(MIC)或最低杀菌浓度(MBC),接触时间为1.1～3.8小时时,对金葡菌的 PAE 分别是3.9、1.2～4.5、4.6、3.0、1.4小时。对粪肠球菌,青霉素类和碳青霉烯类在4倍 MIC 以上时显示较长的PAE,而头孢菌素类很小。对铜绿假单胞     

铜绿假单胞菌ExoS蛋白的研究进展

ExoS是铜绿假单胞菌通过Ⅲ型分泌系统靶向输入真核细胞的毒性蛋白之一,该蛋白有助于细菌进入宿主细胞,逃避机体免疫系统的攻击,并抑制细胞分裂、导致细胞凋亡,在铜绿假单胞菌的致病机制中发挥重要作用。文章对近年来有关ExoS蛋白的研究做一简要综述,为难治性铜绿假单胞菌感染治疗提供理论依据。     

水貂铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

对河北某水貂养殖场送检的6只具有出血性肺炎症状的病死水貂脏器进行细菌分离鉴定、致病性试验及药物敏感性分析,为临床诊断和用药提供参考依据。通过细菌分离纯化、形态学观察、生化鉴定及PCR鉴定,共分离到6株铜绿假单胞菌;小鼠致病性试验结果显示,6株铜绿假单胞菌均能使小鼠发病死亡;西药药敏试验结果显示,6株铜绿假单胞菌均对多西环素、阿米卡星、恩诺沙星敏感,对卡那霉素、头孢拉定等9种抗生素耐药;中药药物试验结果显示,6株铜绿假单胞菌均对诃子、乌梅、五味子极度敏感,对女贞子、夏枯草等12种中药耐药。     

阿莫西林纳米粒对沙门菌的体外抗菌后效应

为指导兽医临床中应用阿莫西林纳米粒治疗沙门菌病的给药方案,利用显微镜直接计数法测定了阿莫西林纳米粒对沙门菌的体外抗菌后效应(PAE)。结果表明:阿莫西林纳米粒在(0.5～4)×MIC的药物浓度范围内对沙门菌产生的PAE约在1.6～4 h,且PAE与药物浓度呈正相关,4×MIC时的PAE值较长,与1×MIC和0.5×MIC时均差异极显著(P<0.01),与2×MIC时差异显著(P<0.05)。结果说明,临床应用阿莫西林纳米粒治疗沙门菌病时,除了考虑药效学指标和药动学参数外,还应考虑PAE因素,可适当延长给药间隔时间。     

氟苯尼考及其与多西环素联合的体外抗菌作用

对氟苯尼考 (Florfenicol)及其与多西环素 (Doxycycline)联合的体外抗菌活性、杀菌动力学曲线和抗菌后效应(PAE)作了研究。结果表明 :氟苯尼考对鸡大肠杆菌等 9种标准菌株最小抑菌浓度 (MIC)为 0 .2～ 1.6 mg/L ,与氯霉素相似或略低 ,比甲砜霉素低 1/2～ 1/80 ;对耐氯霉素、甲砜霉素的鸡大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌和猪大肠杆菌临床分离株仍有较强抗菌作用 ;对鸡大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌动力学曲线与甲砜霉素相似 ,表现为低浓度抑菌 (小于 4 MIC值 )、高浓度缓慢杀菌 ;对鸡大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的 PAE显著长于甲砜霉素 (P<0 .0 5 ) ,呈浓度依赖性 ,对鸡大肠杆菌的 PAE(1.4 5～ 2 .0 7h)显著长于对金黄色葡萄球菌 (0 .4 8～ 1.18h)。棋盘法测得氟苯尼考与多西环素联合对鸡大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌均为无关作用 ,对前 3种菌的部分抑菌浓度(FIC)指数值为 1.5 ,联合时的氟苯尼考 MIC值比其单独时减小了 1/2。氟苯尼考以 1∶ 2与多西环素联合时 ,对鸡大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌速率与氟苯尼考单药相比均有所增加 ,当浓度大于或等于 4 MIC时呈现出协同作用 ;对鸡大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的 PAE与单药 PAE的较大值相近 ,与相应浓度的单药相比均表现为无关作用。     

鸡源铜绿假单胞菌的分离、鉴定及其杀灭试验

从外观呈黄绿色的鸡肉中分离到1株细菌,经过形态学观察、ATB细菌鉴定仪鉴定为铜绿假单胞菌。用分离出的细菌人工感染小白鼠,以每只2.4×107个菌的剂量皮下注射,48 h内小白鼠全部死亡(10/10);0.2 mL培养物原液肌肉注射2只豚鼠,1只死亡。试验比较了不同温度和2种常规商品化消毒剂不同稀释浓度对铜绿假单胞菌的杀灭效果,结果表明该株铜绿假单胞菌经100℃作用10 m in或经0.05%的新洁尔灭溶液作用5 m in,即可100%被杀灭,而龙安84消毒液对铜绿假单胞菌的杀菌效果不确实。     

可治疗多重耐药革兰氏阴性菌的多黏菌素

目前,兽医临床上产生的多种耐药菌已至少对β-内酰胺类、碳青霉烯类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类中的3种药物耐药,耐药菌的出现为临床治疗带来了极大困难,使人们陷于基本无药可治的被动局面,而多黏菌素对多种抗生素耐药的革兰氏阴性菌仍然敏感,是治疗多重耐药的铜绿假单胞菌β和鲍氏不动杆菌感染疗效较好的药物。     

铜绿假单胞菌抗体制备及抑菌作用

研究铜绿假单胞菌抗体对铜绿假单胞菌生长的抑制作用。制备兔抗铜绿假单胞菌抗体,纯化后加入液体和固体培养基中,接种沙门菌和铜绿假单胞菌混合物,对沙门菌进行选择分离。试验表明,添加抗体后能够成功抑制铜绿假单胞菌的生长,而不影响沙门菌的分离。将200μL和400μL铜绿假单胞菌抗体添加入相应培养基中,能够抑制铜绿假单胞菌的生长,而达到筛选沙门菌的目的。     

黄藤素对铜绿假单胞菌QS毒力因子的影响

为了研究黄藤素对铜绿假单胞菌群体感应系统中毒力因子表达的影响,试验使用亚抑菌浓度的黄藤素(6.25×10~(-2)g/m L、3.13×10~(-2)g/m L)作用于铜绿假单胞菌,并测定亚抑菌浓度的黄藤素对铜绿假单胞菌生长曲线、外毒素A、绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶的影响。结果表明:在亚抑菌浓度条件下,黄藤素对铜绿假单胞菌的生长均无明显影响,但能明显下调铜绿假单胞菌群体感应系统中外毒素A、绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶的表达。说明黄藤素能够通过影响铜绿假单胞菌群体感应系统中毒力因子的表达来影响铜绿假单胞菌生物膜的形成,发挥抗病抑菌的作用。     

连翘提取物对铜绿假单胞菌群体感应系统的影响

为了研究连翘提取物对铜绿假单胞菌群体感应系统的影响,试验采用紫色杆菌CV026初步观察连翘提取物的群体感应抑制作用,并将不同浓度的连翘提取物与铜绿假单胞菌共同培养,通过测定铜绿假单胞菌生长曲线、生物被膜、鼠李糖脂、绿脓素及蹭行运动的变化,进一步研究连翘提取物对铜绿假单胞菌群体感应系统的抑制作用。结果表明:连翘提取物在亚抑菌浓度下能够降低紫色杆菌紫色菌素的分泌;连翘提取物浓度低于250 g/L时,可抑制生物被膜形成、鼠李糖脂及绿脓素的分泌并减弱铜绿假单胞菌蹭行运动能力,并呈浓度依赖性。说明连翘提取物对铜绿假单胞菌的群体感应系统起抑制作用。     

肠炎沙门菌SPI-19编码的Hcp基因缺失株的毒力相关功能研究

为研究肠炎沙门菌SPI-19编码的Hcp基因在肠炎沙门菌感染中的毒力作用,利用Red同源重组系统对2株肠炎沙门菌(国内标准株50336和国际参考株SD-2)SPI-19的Hcp基因进行敲除,成功构建了50336ΔHcp和SD-2ΔHcp基因缺失株,并构建了回补株50336ΔHcp/pHcp和SD-2ΔHcp/pHcp。分析比较缺失株与野生株对人肠上皮细胞系Caco-2黏附和侵袭能力,以及在鸡巨噬细胞HD11的存活能力。结果显示:缺失Hcp基因后,肠炎沙门菌50336对Caco-2细胞黏附和侵袭数量分别下降39.1%和47.9%;SD-2对Caco-2细胞黏附和侵袭数量分别下降46.5%和58.9%。吞噬作用2h后,50336ΔHcp和SD-2ΔHcp与野生株相比在HD11的存活量下降了35.7%和37.2%,差异显著。通过Real Time-PCR试验分析,与野生株相比,Hcp基因缺失后fliC、sefA、ompA,ompC这4个重要粘附因子编码基因的表达量显著下降。试验表明,肠炎沙门菌SPI-19编码的Hcp基因对肠炎沙门菌的毒力具有增强作用。     

致仔猪肠壁囊泡性脓肿铜绿假单胞菌的生物学特性研究

为研究猪肠壁囊泡性囊肿的可能病原,从发病猪肠道囊泡分离细菌,从11头发病死亡猪肠壁囊泡分离到1株共同性的细菌,对其进行了细菌生化鉴定和16sRNA测序,结果鉴定该株细菌为铜绿假单胞菌。通过药敏试验和小鼠攻毒试验,证实该株细菌具有多重耐药性和强致病性。本研究首次报道了铜绿假单胞菌致仔猪肠壁裳泡性脓肿的病例,并证明了假铜绿单胞菌强的致病作用,为深入铜绿假单胞菌对畜禽养殖的威胁及条件致病菌的变异奠定基础。     

硫酸黏菌素对培养分离的土壤优势细菌的影响

随着抗生素在畜禽养殖业上的广泛应用,药物残留对生态环境的潜在隐患日益突出.为了了解硫酸黏菌素在环境中残留对土壤细菌数量和耐药性的影响,本实验对硫酸黏菌素作用35 d后用纯培养法分离的土壤细菌进行了计数,并对作用70 d后的土壤优势细菌进行了抗菌药物敏感性试验.结果表明,实验组的土壤细菌总数均低于对照组,且培养分离的细菌数量与药物浓度成反比;在供试的13种抗菌药中,硫酸黏菌素敏感菌对其中的11种药物的敏感性与硫酸黏菌素耐药菌差异显著（P＜0.05）.     

蒙药特润舒都乐对正常小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

目的:观察和探讨蒙药特润舒都乐的作用机理与调节巨噬细胞吞噬功能的相关性。方法:对30只ICR小鼠随机分为空白组,模型组,特润舒都乐组,每组各10只。除空白组外,其余各组采用腹腔注射大肠杆菌方法复制蒙医"粘疫"热症模型。特润舒都乐组于造模后2h灌特润舒都乐0.1 ml/10 g,每日2次,连续5d。于末次灌胃2h后处死小鼠,抽取腹腔洗液,离心,计数巨噬细胞数。与5%鸡红细胞悬液孵育45min,固色,染色,油镜下记数,计算吞噬百分率和吞噬指数。结果:模型组与空白组比较腹腔巨噬细胞游出数量明显增加(P0.05),吞噬指数较空白组有显著性差异(P0.05);特润舒都乐组与模型组比较巨噬细胞游出数量无显著性差异(P0.05),腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数明显提高(P0.05)。结论:特润舒都乐明显增加腹腔巨噬细胞的吞噬功能,特润舒都乐的治疗作用可能与巨噬细胞吞噬功能有关。