珍稀濒危树种─沙冬青体细胞胚胎发生的组织学观察

采用萌发５天的沙冬青（ＡｍｍｏｐｉｐｔａｎｔｈｎｓｍｏｎｇｏｌｉｃｕｓＭａｘｉｍ）为外植体，ＦｌＭＳ为基本培养基。附加２．４一Ｄ１ｍｇ／Ｌ，６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ，诱导子叶和胚根形成愈伤组织。选生长良好的愈伤组织转人分化培养基中诱导胚状体的发生。切片观察表明；沙冬青的体细胞胚是单个获得胚状体发生能力的胚性细胞发育而来，并且胚性细胞有较高的发生频率，在愈伤组织中常具有—至多个发生层带。体细胞胚的发育过程与双子叶植物的胚胎发育过程基本相似。在切片中可同时观察到球形胚、心形胚及于叶胚，并有连体胚，次生胚等畸形胚，这些胚最终不能发育成苗，都在发育的不同阶段退化或解体。其退化方式有两种类型：一种是胚状体在发育到球形胚和心形胚之后失去发育极性呈花状发展；另一种是在原来的胚上又发生新的胚，吸收其营养使其内部解体。     

石刁柏胚状体诱导与影响因素的研究

本试验对石刁柏体细胞胚及花粉胚状体诱导进行了研究。试验表明，不同基因型对胚状体发生频率影响很大，接种材料不同会导致胚性愈伤组织形成上的差异，外源物质及植物激素种类、配比对胚状体诱导、分化起着重要作用。ＭＳ培养基附加６％蔗糖，水解酪蛋白６００ｍｇ／Ｌ，谷氨酰胺７００ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ２．５ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．８ｍｇ／Ｌ，胚性愈伤组织诱导率最高；而ＭＳ＋ＮＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋嘧啶醇０．８ｍｇ／Ｌ培养基，胚状体诱导效果最佳，平均每块愈伤组织形成体细胞胚１．７２个，花粉胚状体１．４６个。     

紫花苜蓿体细胞胚胎发生及其细胞组织学观察

通过对紫花苜蓿（ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）外植体愈伤组织进行诱导及对体细胞胚胎发生过程的组织学观察,得出以下结果：１）外植体在 Ｍ Ｓ附加１．０ｍ ｇ／ Ｌ６－ Ｂ Ａ 和１０．０ｍ ｇ／ Ｌ Ｉ Ａ Ａ 的培养基上愈伤组织生长良好,而愈伤组织转入 Ｍ Ｓ附加５００ｍ ｇ／ Ｌ水解酪蛋白的培养基中胚状体的分化能力较强。２）紫花苜蓿的体细胞胚大多是由单个具胚状体发生能力的胚性细胞发育而来,发育过程与合子胚的发育过程相似。在早期原胚发育过程中胚体外一直包围有厚壁。原胚时期和子叶胚时期出现两次淀粉积累现象。     

石刁柏体细胞胚的培养与植株再生研究

石刁柏的体植体在附加激素的ＭＳ固体培养基上诱导愈伤组织，在愈伤组织的分类选择中获得的胚性愈伤组织，转移到含２，４－Ｄ １￣１．５ｍｇ／Ｌ的液体培养基中悬浮培养繁殖。在继代培养中，将颗粒大于１ｍｍ的愈伤组织，转移到无激素的ＭＳ培养基中诱导体细胞胚发生，提高培养基中琼脂的浓度，可减轻体细胞胚的玻璃化。     

陆地棉胚性愈伤组织诱导和植株再生

以陆地棉“泗棉３号”、“北元２０３１”、“鲁９５５４”为材料进行全固体体细胞培养，获得了胚性愈伤组织和再生植株。起始愈伤组织阶段，用含２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ和２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，ＺＴ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基效果较好；进入胚性愈伤组织诱导阶段，在含ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上胚性愈伤组织诱导频率较高。     

荔枝体胚发生及成苗研究

以荔枝不同器官为外植体诱导出愈伤组织，在中２，４－Ｄ，１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋５％蔗糖的ＭＳ培养基上 细胚胚性愈伤组织系；胚性愈伤组织高浓度２，４－Ｄ（５－８ｍｇ／Ｌ）在黑暗中激发诱导培养后，转移到去除２，４－Ｄ，含低浓度ＮＡＡ和ＩＢＡ的ＭＳ培养基上，体胚发育成熟。     

脱毒甘薯组织快繁技术的研究

剥取脱毒甘薯只带一叶一心大小的茎尖分生组织接种在ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡ固体培养基上,待其成活后,将其转管接种在ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ固体培养基上,进行胚性愈伤组织的诱导,挑选状态好的胚性愈伤组织转移到ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ的液体中,进行振荡培养,建立胚性细胞悬浮培养系。经过一段时间的悬浮培养,选择其中较大的胚性愈伤组织接种在ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ固体培养基上进行胚性愈伤组织的增殖及体胚的诱导,４周后将体胚及愈伤组织转移到ＭＳ＋１．０ｍｇ／ＬＡＢＡ的固体培养基上,诱导形成丛生芽,继而形成小植株,将小植株切下转移到不加任何激素的ＭＳ固体培养基上诱导生根,生长发育成完整植株。通过悬浮培养方法可以在短时间内繁殖大量的脱毒试管苗。     

柠条锦鸡儿愈伤组织的培养与分化

取柠条的子叶和胚轴切段作为外植体,接种于含不同激素的７种ＭＳ培养基上诱导愈伤组织发生,确定最佳愈伤组织培养基为ＭＳ＋６－－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ,２,４－－Ｄ２ｍｇ／Ｌ。在ＭＳ＋６－－Ｂ１ｍｇ／Ｌ,ＩＡＡ１０ｍｇ／Ｌ的培养基上生长的愈伤组织中,在距愈伤组织表面一定距离处常形成分生组织带,很像形成层带。分生组织带内部的细胞分化产生排列不规则的长形管状细胞,分生组织带两侧的细胞分裂产生正常的愈伤组织细胞。生长在ＭＳ＋６－－ＢＡ０．５／Ｌ,２,４－－Ｄ２ｍｇ／Ｌ的培养基上的愈伤组织中可分化出胚性细胞（团）,这样的愈伤组织转移至无激素培养基后,胚性细胞（团）可进一步分化出原胚、球形胚、心形胚、子叶胚和试管苗。     

龙眼胚性细胞系的建立与保持

本研究比较了生长调节剂、ＡｇＮＯ３、活性炭、碳源、基本培养基、光照度、胚发育时期以及基因型等对龙眼幼胚培养诱导愈伤组织的影响。从幼胚培养中，诱导出多种类型的愈伤组织，经继代培养并筛选，获得松散、生长旺盛、胚胎发生能力极强的松散型胚性愈伤组织。该类型胚性愈伤组织适宜建立悬浮细胞系和分离原生质体，并且转移至含体积分数为０．０５椰子汁的ＭＳ固体培养基上，形成大量的胚状体。采用在附加１ｍｇ·Ｌ＾－１２，４     

枸杞髓部细胞悬浮培养及胚状体发生

应用枸杞髓部组织进行离体培养，建立细胞系，诱导胚状体发生。结果在含不同激素的４种ＭＳ培养基上都诱导出了愈伤组织，诱导频率在５６．７％￣９５．７％，其中以ＭＳ＋６ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３％培养基诱导出的愈伤组织颗粒小，分散性能好，此愈伤组织在２－３次继代培养后，转入液体培养基中进行振荡培养，２４ｈ后获得大量单细胞，经过多次继代培养，建立稳定的单细胞悬浮率。悬浮细胞在液体培养基     

籼稻体细胞胚胎发生形态鉴别的研究

以籼稻品种秋桂矮１１发芽种子的功芽基部为外植体，以Ｎ６培养基附加２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ和脯氨酸０－４０ｍｍｏｌ／Ｌ诱导愈伤组织，对愈伤组织进行了立体解剖，扫描电镜观察和ＧＭＡ塑料薄切片观察。结果表明，愈伤组织可分为胚性、中间型和非胚性３大类，胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织在外观特征和内部结构方面都存在显著差异，前者明显分化成６类细胞，其中包括传递细胞；后者分化程度低，且没有观察到传递细胞，中间型愈伤组     

薇甘菊组织培养及体细胞胚胎发生的研究

研究了4种外植体、10种不同浓度激素组合对薇甘菊(Mikania micrantha H.B.K.)离体再生的影响,并对胚性愈伤组织中的体细胞胚发生发育过程进行了组织细胞学观察.结果表明,所用不同浓度激素组合的培养基均能诱导薇甘菊外植体产生愈伤,培养基以MS+6BA 1 mg/L为最宜;不同种类的愈伤组织再分化结果有明显差异,生长良好的胚性愈伤组织转入分化培养基后可诱导体细胞胚的发生.薇甘菊体细胞胚胎发生的形式为单细胞内起源.体细胞胚起源于胚性愈伤组织的胚性细胞,胚性细胞经过一次不均等分裂产生两个细胞,即胚细胞和胚柄细胞.然后依次经过具胚柄的多细胞原胚,再经过球形胚、心形胚、鱼雷胚阶段,发育成具有子叶的成熟胚状体,然后长成为再生植株.     

百合幼胚的离体培养和植株再生

为了探索百合幼胚离体培养的最佳胚性生长条件及植株再生途径,以授粉后３５ｄ的百合幼胚为外植体,进行了幼胚胚性生长,愈伤组织的诱导,愈伤组织不定芽、不定根的分化和再生植的移栽试验,结果表明;在含有１ｍｇ／ＬＩＡＡ〈１ｍｇ／ＬＧＡ３,６００ｍｇ／ＬＣＨ的ＭＳ培养基上培养,蔗糖含量为６－８％时,百合幼胚胚性生长最好,１ｍｇ／ＬＩＡＡ,１ｍｇ／ＬＧＡ３,６００ｍｇ／ＬＣＨ的ＭＳ２基上培养,蔗糖含量为６－８％     

从烟草花药和花序轴切段培养物上获得花状结构

以烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）的花药和花序轴切段作为外植体，接种在补加有ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ或ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的培养基上，含前者激素组合的培养基，能使花药的 生较多的俞伤组织子可使部分花药的花粉直接形成胚状体，直接长成小植株，面 含后者激素的培养基上，花药体细胞愈伤组织和花粉胚状体较少，但可从体细胞愈伤组织上直接分化出数朵花状结构；同时，接     

小麦成熟胚愈伤组织诱导及分化的研究

以小麦成熟胚为外植体，在ＭＳ＋２．４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ培养基上，愈伤组织诱导率为８３．１％；不同品种间诱导率有较大的差异，但愈伤组织的质量与诱导率的高低无关，在ＭＳ＋ＫＴ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ培养基上，分化率可达４４．４％。     

从烟草花药和花序轴切段培养物上获得花状结构

以烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）的花药和花序轴切段作为外植体，接种在补加有ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ或ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的培养基上，含前者激素组合的培养基，能使花药的体细胞产生较多的愈伤组织，也可使部分花药的花粉直接形成胚状体，直接长成小植株．而在含后者激素的培养基上，花药体细胞愈伤组织和花粉胚状体较少，但可从体细胞愈伤组织上直接分化出数朵花状结构；同时，接种在该激素组合上的花序轴切段，也可从该切段上直接分化出数朵花状结构     

龙眼胚性细胞系的建立与保持

本研究比较了生长调节剂、ＡｇＮＯ３、活性炭、碳源、基本培养基、光照度、胚发育时期以及基因型等对龙眼幼胚培养诱导愈伤组织的影响．从幼胚培养中，诱导出多种类型的愈伤组织，经继代培养并筛选，获得松散、生长旺盛、胚胎发生能力极强的松散型胚性愈伤组织．该类型胚性愈伤组织适宜建立悬浮细胞系和分离原生质体，并且转移至含体积分数为０．０５椰子汁的ＭＳ固体培养基上，形成大量的胚状体．采用在附加１ｍｇＬ－１２，４－Ｄ的ＭＳ培养基与附加１ｍｇＬ－１２，４－Ｄ、０．５ｍｇＬ－１ＫＴ和５ｍｇＬ－１ＡｇＮＯ３的ＭＳ培养基交替继代培养，该类型胚性愈伤组织可长期保持     

葡萄风信子体细胞胚再生体系的建立及抗生素敏感性试验

【目的】建立葡萄风信子体细胞胚再生体系,通过外部形态判断愈伤组织的类型,并探索胚性愈伤组织对头孢霉素和潮霉素的敏感性。【方法】以多年生葡萄风信子‘蓝穗’的盛花期叶片为试验材料,通过正交试验筛选胚性愈伤组织诱导时适宜的植物生长调节剂质量浓度及配比;石蜡切片法观察不同愈伤组织内部的细胞结构,诱导具有胚性的愈伤组织形成体细胞胚,进而获得再生植株;在培养基中加入头孢霉素或潮霉素,观察2种抗生素对胚性愈伤组织生长和体细胞胚发生的影响。【结果】葡萄风信子胚性愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.1mg/L TDZ,在该培养基上诱导率高达100%。石蜡切片观察发现,外观质地紧密、节状或块状的愈伤组织为胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上可诱导形成体细胞胚,在光照条件下体细胞胚伸长并生根,最后形成成熟小鳞茎。头孢霉素质量浓度超过500mg/L时,葡萄风信子胚性愈伤组织的生长和体细胞胚的发生受到强烈抑制;引起胚性愈伤组织褐变的潮霉素临界质量浓度为90mg/L。【结论】建立了葡萄风信子体细胞胚再生体系,90mg/L潮霉素可作为区分转化与非转化葡萄风信子胚性愈伤组织的有效选择压。     

籼稻离体胚培养中体细胞胚胎发生的研究

成熟稻胚在含2,4-D的MS培养基上产生胚性愈伤组织以及在胚性愈伤组织表面形成许多瘤状突起的原胚状体,组织学研究表明在诱导培养的不同时期,胚性愈伤组织的细胞分裂产生单核胚性细胞、2细胞、4细胞、多细胞及球形胚。随后移到不含2,4-D的分化培养基上培养,胚性愈伤组织产生与水稻合子胚结构相似的成熟体细胞胚状体。结果表明:2,4-D是胚性愈伤组织诱导的必要激素,但抑制球形胚的发育成熟。不同激素处理结果:Br明显抑制植株再生。研究生理生化指标结果表明:在愈伤组织生长分化过程中不同激素处理Br抑制氧化物酶活性;体细胞胚状体在形成、成熟阶段,酶活性及酶带相应增强和增多;当胚状体萌发形成植株时,酶活性及酶带相应下降和减少,随诱导培养时间延长植株再生率降低。     

国庆1号温州蜜柑原生质体培养再生植株

通过对国庆1号温州蜜柑Guoqing No．1(citrus wnshiu)原生质体培养获得的愈伤组织，经体细胞胚发生途径再生植株的研究。结果表明，两步法建立的国庆1号胚性愈伤组织悬浮系，分离的原生质体产量高、活力强，在MA培养基上培养20d时，可获得颗粒性强，具有体细胞胚发生能力的细胞团。这些细胞团在甘油(MT 质量分数2％甘油)培养基上可以获得最好的胚状体诱导效果。但诱导出的小胚状体不能进一步发育，需及时转入液体乳糖(MT 质量分数5％乳糖)培养基上振荡培养20～30d。然后将长至1.0～2.0cm的胚状体转入固体乳糖培养基上，可促使其进一步发育成墨绿色的正常胚状体，最终在生芽培养基上诱导其再生植株。