CTC法结合体外受精比较不同方法对绵羊精子体外获能的影响

为比较不同获能方法对绵羊精子的获能效果，新鲜绵羊精液分别经肝素上游法(swim-up)、钙离子载体(IA，A23187)诱导法、Percoll离心法和Percoll离心后肝素孵育法进行精子获能的诱导后与体外成熟的绵羊卵母细胞进行体外受精，并利用金霉素荧光染色（chlortetracycline，CTC）法结合各自相应的体外受精结果对其获能效果进行检验。结果显示上游法处理后精子的获能比例和受精后的卵裂率均高于其它组, 说明肝素上游法可以较好的诱导绵羊精子获能。     

精子不同处理方法对牛卵泡卵母细胞体外受精的影响

本研究探讨了不同精子处理方法对南阳黄牛卵泡卵母细胞体外受精效果的影响。试验一,研究三种不同的精子洗涤方法对卵母细胞体外受精的影响,结果表明:上浮法和Percoll密度梯度离心法所得的卵裂率(58.3%,60.6%)均显著高于直接离心洗涤法(47.2%,P<0.05);上浮法所得囊胚发育率(25.9%)显著高于直接离心法(13.3%,P<0.05);上浮法和Percoll法相比,卵裂率和囊胚率均无显著差异。试验二,研究三种受精液对卵母细胞体外受精的影响,结果表明:BO液组和mTyrode’s液组所得的卵裂率(60.1%,59.3%)均显著高于TCM199液组(48.5%,P<0.05);但三组囊胚率(17.8%、19.6%、14.1%)差异不显著(P>0.05)。     

猪精子及卵子质量对猪体外受精胚胎发育的影响

应用体外受精(in vitro fertilization, IVF)等生物技术可以缩短种猪培育时间,地方猪精液的冷冻保存可以解决保存和运输问题。通过对不同个体冷冻前后的精子质量、获能方式、卵子质量及多精受精率对IVF的影响进行了研究。结果显示:当精子活率从83.26%降至74.20%时,IVF的卵裂率、桑椹胚率显著下降(P0.05)。不同的获能方式对IVF胚胎的卵裂率无显著影响(P0.05)。3层(及以上)卵丘细胞的卵子IVF的卵裂率、桑椹率显著高于3层以下组(P0.05)。冷冻精子的IVF中,2-细胞、4-细胞和囊胚的发育能力显著低于新鲜精子(P0.05),受精后6～12 h的多精受精率也显著高于新鲜精子组(P0.05)。猪体外受精胚胎的发育能力受精子和卵母细胞的影响。无论使用新鲜精液还是冷冻精液的IVF胚胎,在桑椹胚期后的发育能力都会受到阻碍,多精受精可能是原因之一,但具体原因还需要更多的研究。     

利用性控精液体外生产奶牛早期胚胎

实验进行了精子处理方法、洗精液中添加抗生素种类及浓度、常规培养小滴(50μL)中入胚数的筛选,按照不同荷斯坦公牛个体分选的性控精液对体外生产的牛早期胚胎发育潜力的影响。结果表明:离心法处理性控精液效果最优。利用经过分选的性控精液进行体外受精(IVF)后都较易导致污染,且受精后的体外胚胎发育效果都较差。在洗精液中添加10μL/mL头孢哌酮钠的IVF胚胎体外发育较好,囊胚率达到16.9%;且在常规培养小滴中适当减少入胚数,能有效抑制利用性控精液制备的奶牛IVF胚胎自身对培养微滴的污染。利用直接离心法处理精液,在洗精液中添加头孢哌酮钠10μL/mL,可以成功进行牛性控精子的体外受精,但目前的受精效果低于用普通精子的体外受精效果。     

两种不同方法处理牛分离精子对体外受精效果的影响

本试验旨在探讨采用2种不同方法处理牛分离精子对精子活力、浓度及体外受精（IVF）效果的影响。将体外培养成熟卵母细胞随机分为2组,与分别用洗涤法和Percoll法处理牛分离精子进行IVF,并观察处理后各组的精子活率、浓度和IVF后囊胚发育率。结果显示,洗涤法和Percoll法处理后精子活力和IVF后的囊胚发育率均无显著差异,但采用洗涤法处理后分离精子浓度极显著高于Percoll法,可显著提高分离精子利用效率,且方法简便、经济,应优先选择使用。     

添加低剂量大豆卵磷脂稀释液低温保存绵羊精液的优化研究

本实验旨在探讨添加低剂量大豆卵磷脂稀释液对绵羊精液低温保存效果。实验一采用6个浓度(0%、0.25%、0.5%、0.75%、1.0%、1.25%)大豆卵磷脂替代TRIS专利稀释液中卵黄低温保存绵羊精液,在第0、1、4、7、10、12、18天检测精子活率、顶体完整率;实验二选用实验一中最优添加组(0.5%组)和TRIS专利稀释液制成粉剂低温保存绵羊精液,在保存第0、1、4、7、10、12天对精子活率和顶体完整率进行测定,并在保存第10天对绵羊进行人工授精。结果表明:实验一中,0%组从第1天精子活率低于其他组(P<0.05),0.25%组精子活率观测值从第10天开始低于0.25%以上浓度组(P<0.05),0.5%、0.75%、1.0%、1.25%组保存第10天精子活率均大于50%,0.5%组保存第18天精子活率高于1.0%、1.25%组(P<0.05);各组顶体完整率缓慢下降,各时间点均无显著性差异;实验二中,0.5%组与TRIS组在各时间点的精子活率、顶体完整率与受胎率均无显著性差异,保存第10天精子活率均高于50%;0.5%组受胎率为65.49%,略低于TRIS组67.65%(P>0.05)。本实验条件下,绵羊精液低温保存稀释液中添加0.5%大豆卵磷脂替代卵黄效果最佳。     

牛卵泡卵母细胞体外受精和发育的研究

利用屠宰黄牛卵巢作为供试材料 ,对卵巢表面 2～8mm卵泡卵母细胞体外受精(IVF) -受精卵的体外发育 (IVD)进行了系列研究 ,采用上游法、Percoll法和本实验室沿用的直接洗涤法处理牛冻精 ,观察 3种精子处理方法处理牛冷冻精子对卵母细胞体外受精胚胎发育的影响。实验结果 ,就卵裂率指标 ,采用Percoll法处理的精子进行卵母细胞体外受精 ,和上游法及洗涤法分别比较 ,差异均不显著 (P >0 .0 5 ) ;桑囊率指标 ,只有上游法比洗涤法高 ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ,其余差异均不显著。以FERT -TALP液作为受精液采用常规培养方法 ,精卵作用 18～ 2 0h后分开 ,与精卵作用 6～ 8h后分开卵母细胞受精后的 8-细胞发育率及桑囊率变化不大 (P >0 .0 5 ) ;卵裂率指标 ,18～ 2 0h处理组高于 6～ 8h处理组 ,但两组之间差异也不显著。表明 ,在生产中采用FERT -TALP液做为受精液 ,应用上游法处理精子 ,不需要另购试剂 ,精卵孵育时间由 18～ 2 4h缩短至 6～ 8h是可行的 ,其现实意义是可以简化胚胎体外生产的程序 ,节省人力 ,降低成本     

不同染色与冷冻方法对关中奶山羊X、Y精子的分离及应用效果研究

为探究不同Hoechst 33342的染色浓度与冷冻方法对关中奶山羊X、Y精子进行分离及应用效果的影响，本实验采集6只关中奶山羊精液，使用浓度分别为10、11、12、13μL/m L的Hoechst 33342(5 mg/m L)染色液对精液样本进行染色，以流式细胞仪分离X精子和Y精子，应用3种不同冷冻程序冷冻精液，应用体外受精与胚胎发育技术评估关中奶山羊X、Y精液的分离准确性。结果表明：12μL/m L Hoechst 33342染色条件下，奶山羊X、Y精子分离效率达到91.02%，高于10μL/m L和13μL/m L(P<0.01)，最高分选速度为4 134个/s(P<0.05)；公羊个体的精液品质越好，其精子的分离速度越快，但对分离准确率的差异不显著；使用冷冻程序2进行关中奶山羊的X、Y精子冷冻的效果较好（P<0.05）；体外受精48 h后，使用Y精子进行受精的卵细胞的卵裂率高于使用X精子（P<0.05），在胚胎培养第9天，使用Y精子进行受精的卵细胞的囊胚发育率高于使用X精子（P<0.05）。总之，当Hoechst 33342浓度为12μL/m L...     

不同处理方法对牛卵母细胞体外受精效果的影响

在牛体外受精(IVF)过程中,比较不同浓度的牛卵泡液对其卵母细胞的成熟效果,并将成熟的卵母细胞与不同方法获能的精子进行受精,分析其卵丘细胞在受精前后的脱除对卵裂率及囊胚率的影响。结果表明:添加10%的牛卵泡液(BFF)对卵母细胞的成熟有显著的提高作用(P0.05);卵丘细胞在受精后的脱除效果显著优于受精前的脱除(P0.05);上游法和离心法的精子获能方式对IVF没有显著差异,但离心法略优于上游法。     

微流路精子分离器体外受精方法对奶牛体外受精效果的影响

为应用牛性控精液进行体外受精(IVF)获得大量廉价的性控胚胎,本实验利用微流控精子分离器(MFSS)分离有活力的精子,将体外成熟的卵母细胞放置在MFSS的C室进行体IVF,与常用的微滴-IVF法进行对比,检测2种受精方法的受精率和囊胚发育率。结果表明:MFSS-IVF的单精子入卵率和囊胚率(分别为64.38%、40.12%)均显著高于微滴-IVF法(29.02%、24.55%)(P0.05),受精率和卵裂率差异不显著(P0.05)。由以上得出,MFSS-IVF方法可获得较高的单精子入卵率和囊胚发育率,利用MFSS使用奶牛性控精液进行体外受精生产胚胎是可行的。     

不同受精方法对南阳牛卵母细胞体外受精的影响

本研究探讨了用直接离心法、上浮法和perco ll密度梯度离心法等3种方法处理精子对南阳牛体外受精效果的影响。结果表明3种方法处理的精子卵裂率差异不显著(84.2%vs84.5%vs83.6%),但是桑囊胚率perco ll密度梯度离心法和上浮法显著高于直接离心法(17.1%、16.9%vs13.8%)。同时比较了微滴法和微细管法对体外受精效果的影响,表明两种方法受精后的卵裂率差异不显著(84.1%vs81.1%),桑囊胚率微细管法显著高于微滴法(17.8%vs13.4%)。     

提高牛体外性控胚胎效率关键技术研究

为了提高牛体外受精效果,试验从性控冷冻精液体外获能方法及抗氧化剂的添加、体外成熟24h后卵母细胞是否部分脱除卵丘细胞3个方面,研究了影响牛性控精液体外受精效率的关键技术。结果表明,一次离心体外获能法体外受精卵裂率[(68.3±3.7)%]、囊胚率[(30.9±2.3)%]与精子上浮获能法体外受精卵裂率[(67.8±2.6)%]、囊胚率[(29.7±3.7)%]无显著差异(P>0.05),但显著高于二次离心体外获能法体外受精卵裂率[(56.1±4.1)%]、囊胚率[(21.6±4.6)%](P<0.05);获能液和体外受精液添加1.0%抗坏血酸组体外受精卵裂率[(70.2±3.2)%]、囊胚率[(35.0±4.7)%]显著高于不添加组体外受精卵裂率[(60.0±4.5)%]、囊胚率[(28.3±3.6)%](P<0.05);在体外受精前,成熟卵母细胞周围的卵丘细胞脱除情况为部分脱除组体外受精卵裂率[(70.1±4.6)%]、囊胚率[(35.5±3.7)%]显著高于不脱除组体外受精卵裂率[(52.9±4.1)%]、囊胚率[(26.1±3.6)%](P<0.05)。由此可见,性控精液体外受精时,获能方法宜采用一次离心体外获能法或上浮获能法,且精子获能液和体外受精液中宜添加抗坏血酸;体外受精前,成熟卵母细胞部分脱除卵丘细胞对于提高性控精液体外受精胚胎发育率具有重要意义。     

不同稀释液中添加十二烷基硫酸钠对吐鲁番黑羊精液冷冻保存的影响

为改善吐鲁番黑羊精液的冷冻保存效果,提高精液冻后的精子活率,本实验在3种精液冷冻稀释液中添加不同浓度(0、1%、2%)的十二烷基硫酸钠(SDS),TrⅠs-葡萄糖-柠檬酸钠为Ⅰ液,蔗糖-葡糖糖-柠檬酸钠为Ⅱ液,OptⅠdyl稀释液做对照为Ⅲ液。熏蒸冷冻后解冻,用精子分析系统(CASA)和流式细胞仪检测冷冻效果。结果表明:Ⅰ液1%SDS组精子活率最高(65.4%),与Ⅰ液2%SDS组精子活率没有差异,高于其他7组(P<0.05);Ⅲ液1%SDS组畸形率(9.4%)低于Ⅱ液0%SDS组、Ⅱ液2%SDS组和Ⅲ液2%SDS组(P<0.05);Ⅰ液1%SDS组直线运动速率(51.4μm/s)高于Ⅰ液0%SDS组、Ⅱ液2%SDS组和Ⅲ液0%SDS组(P<0.05);Ⅰ液1%SDS组和Ⅲ液1%SDS组的质膜完整率高于Ⅰ液2%SDS组和Ⅱ液1%SDS组(P<0.05),且Ⅰ液1%SDS组最高;Ⅰ液1%SDS组的顶体完整活精子比率高于Ⅱ液1%SDS组(P<0.05),各组的活精子顶体完整率无显著差异;Ⅰ液1%SDS组高线粒体膜电位比率(43.0%)高于Ⅱ液1%SDS组(P<0.05)。因此,采用添加1%SDS的Tris-葡萄糖-柠檬酸钠稀释液配方显著提高了吐鲁番黑羊精液冷冻保存效果。     

不同冷冻方法对甘肃高山细毛羊精液冷冻效果的研究

为了研究甘肃高山细毛羊种公羊精液冷冻保存的效果.将液氮熏蒸距离按1.5、2.0、2.5 cm分为三个组合,每个组合用6.5、7、7.5 min三种时间进行熏蒸处理,对细毛羊种公羊冻精进行对比试验.熏蒸距离为2 cm,熏蒸时间为6.5 min、7 min和7.5 min处理组精子活率分别为24.91±3.31、42.33±3.96和32.83±2.08,与其它各组精子活率相比较好,组间差异显著（P＜0.05）.试验表明,细毛羊种公羊冻精熏蒸距离越近,熏蒸时间应减短,熏蒸距离越远,熏蒸时间应延长.最佳熏蒸距离为2 cm和熏蒸时间为7min,精子活率42.33±3.96.液氮熏蒸细管冷冻法的精子活率（42.33±3.96）,高于液氮熏蒸颗粒法（33.75±5.32）,而二者差异显著（P＜0.05）.液氮颗粒法的顶体完整率（33.75％）和细管法的顶体完整率（39.08％）差异不显著（P＞0.05）.通过调整细毛羊精液稀释液成分、pH值、渗透压,利用简易的液氮熏蒸方法可以完成甘肃高山细毛羊精液冷冻保存.     

牛体外受精胚的发育速度和染色体研究

利用不同个体的牛冷冻精液对屠宰场废弃牛卵巢内卵母细胞进行体外受精,对体外受精胚胎的发育速度和染色体的异常发生进行了研究。结果显示,冷冻精液A组体外受精48h后的卵裂率显著高于冷冻精液B组(P<0.05),2组之间的囊胚形成率差异显著(P<0.05);冷冻精液A体外受精后的胚胎发育速度显著快于冷冻精液B组(P<0.05);染色体分析结果表明,2组胚胎染色体异常发生率无显著差异,异常胚胎均表现为多倍体的发生率较高。     

绵羊体外受精技术条件优化的研究

探讨了卵泡液、受精时间和季节对绵羊卵母细胞体外培养效果的影响。从屠宰场采集羊卵巢,抽取卵巢表面2mm-6mm的卵泡卵母细胞,进行体外成熟培养;卵母细胞成熟后,与处理后的精子共同培养进行受精。结果表明,在卵母细胞成熟培养液中添加绵羊卵泡液（SFF）组的卵裂率和囊胚发育率均优于添加同等浓度的牛卵泡液（BFF）组;受精22、18、12h组的卵裂率分别为64.85%、54.39%、48.72%,受精22h和18h组间差异显著（P〈0.05）,受精22h组和12h组间差异极显著（P〈0.01）。秋季绵羊体外受精的卵裂率和囊胚率均高于夏季,差异显著（P〈0.05）,但秋季与春季相比差异不显著（P〉0.05）。因此,进行绵羊卵母细胞体外成熟培养时,培养液中添加SFF;受精时,精卵共培养时间为22h的效果较好。在绵羊的繁殖季节秋季进行体外受精较春季和夏季的结果好。     

版纳微型猪近交系精子冷冻保存研究

在版纳微型猪近交系（BMI）公猪精液冷冻保存稀释液中添加不同浓度甘油,并对不同解冻液配方和解冻方法进行研究,对比解冻后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率,优化BMI公猪精液冷冻保存方法。结果表明,解冻后,甘油浓度为2%和3%组的精子活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于1%、4%和5%组（P<0.05）;Ⅰ号解冻液解冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率均显著高于Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ号解冻液（P<0.05）;在活力、质膜完整率和顶体完整率方面,40℃ 6 s和50℃ 6 s这两种程序的解冻效果都显著优于38℃ 30 s（P<0.05）。由此可见,2%或3%的甘油作为抗冻保护剂、Ⅰ号解冻液解冻、40℃ 6 s或50℃ 6 s水浴解冻是较为理想的BMI公猪精液冷冻保存方法。     

丁羟基甲苯抗猪精子氧化损伤作用

分别在稀释、离心猪精液中添加0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L丁羟基甲苯(Butylated hydroxytoluene,BHT),15℃保存,检验保存35、d后精子TMS、PMI和NAR(%)、测定MDA浓度;确定并选择最佳BHT浓度用于猪精液冷冻保存,检验解冻后TMS、PMI、NAR和Mt-MP(%)、测定MDA浓度。结果显示:BHT显著提高稀释精液、离心精液各项指标百分率(P0.05),且MDA浓度显著降低(P0.05),BHT最佳浓度分别为0.8、1.6 mmol/L;0.8 mmol/L BHT显著提高冷冻-解冻精液各项指标百分率(P0.05),且MDA浓度显著降低(P0.05)。结果表明,BHT能通过抑制精子质膜氧化损伤,提高猪精液保存效果。