PCR方法在PCV2和PRRSV检测上的应用

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)分为两个基因型:PCV1和PCV2。PCV1无致病性,广泛存在于猪群中;PCV2具有致病性,能引起多种疾病综合征,如断奶后仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)、猪呼吸道疾病复合症(porcine respiratory diseasecom     

猪圆环病毒病的流行病学及防制措施

猪圆环病毒(PCV)是目前发现的一种最小的动物病毒,已知有两个血清型,即PCV1和PCV2.据报道,PCV1对猪无致病性,但能使其产生血清抗体,而PCV2对猪具有致病性,是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原体.已被各国的兽医与养猪业公认为是继猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)之后,新发现引起猪免疫障碍的重要传染病之一.     

猪圆环病毒疫苗的研究进展

猪圆环病毒2型(PCV 2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征(PMW S)的主要病原。自1991年在加拿大猪群中暴发以来,PMW S给全世界养猪业造成了巨大的经济损失。PCV 2还与增生性坏死性肺炎、母猪繁殖障碍、猪皮炎与肾病综合征和猪呼吸道疾病综合征相关[1]。据估计,PCV 2相关性疾病(PCV     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是迄今发现的最小的动物病毒之一.PCV具有PCV1和PCV2两种基因型.PCV1无致病性.PCV2有致病性,它不仅是断奶猪多系统衰竭综合症(Post -weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原(Bolin等,2001;McNeilly等,2001),而且是其他诸多传染病的病原之一.世界各国的兽医与养猪业者认为它是继猪繁殖与呼吸道综合征之后新发的重要的猪传染病,引起了国内外学者的广泛关注.     

猪圆环病毒2型的分子致病机理研究进展

猪圆环病毒(Porcine Circovims,PCV),为圆环病毒科圆环病毒属成员,是迄今发现的最小的动物DNA病毒.该病毒基因组为单股环状DNA,无囊膜,粒子呈20面体对称,直径17～20hm.根据PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列,将PCV分成PCV1和PCV2两种基因型.PCVl无致病性,包括PCVPK-15及其他流行于猪群但无致病性的分离株,广泛存在于猪原代细胞系及猪群中;PCV2具有致病性.PCV2与近年来在世界各国普遍发生的断奶仔猪多系统衰竭综合征(PostweaningMuhisystemic WastingSyndrome,PMWS)密切相关.该病主要以进行性消瘦和多系统病理损伤为特征,已给全球养猪业造成相当严重的经济损失.PCV2还可以造成育肥猪皮炎与肾炎综合征(Porcine Dermatitis和Nephropathy Syndrome,PDNS),并与怀孕母猪的繁殖障碍、新生仔猪的先天性震颤(Congenital Tremos,CT)、新生仔猪腹泻病、增生性坏死性肺炎(Proliferative 和NecmtizingPneumonia,PNP)的发生密切相关.     

猪圆环病毒2型全序列分析及感染性克隆的构建

猪圆环病毒2型(PCV2)是一种无囊膜的单股负链环状DNA病毒.猪圆环病毒是1974年由德国学者Tischer[1]等首次从猪肾传代细胞(PK-15)的污染物中分离到的,1982年被命名为猪圆环病毒.猪圆环病毒分为两个血清型:PCV1和PCV-2.其中PCV2具有致病性,能引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(post weaning multisytemic wasting syndrome,PMWS),并能导致母猪繁殖障碍和引起免疫抑制,给养猪业造成了严重的经济损失,已经引起了世界各国的广泛重视.     

猪圆环病毒2型分离毒株全基因组克隆与序列分析

猪圆环病毒(PCV)为圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属成员,单股环状DNA病毒,为已知的最小动物病毒之一[1]。PCV存在两种血清型,即PCV1和PCV2,两者的细胞培养物均不产生细胞病变。PCV2首先由Allan等[2]从患断奶猪多系统衰竭综合征(PMWS)的猪群中分离到,被证明为PMWS的重要病原     

猪圆环病毒感染与断奶仔猪多系统衰竭综合征

1974年 ,德国学者 Tischer等 [1 ] 从 PK- 15 (ATCCCCL31)细胞的污染病毒中检出一种形态学上与细小核糖核酸病毒相似的小球形病毒和乳多泡病毒样病毒粒子 ,并于1982年将其命名为猪圆环病毒 (porcine circovirus,PCV) [2 ] 。目前已知 PCV有 PCV- 1和 PCV- 2 2个血清型。PCV- 1来源于 PK- 15细胞 ,为非致病性 PCV(nonpathogenic PCV,np PCV ) [3 ] ;PCV- 2与断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning m ultisystem ic wasting syndrom e,PMWS)密切相关 ,又称 PMWS相关 PCV[3 ] (PMWS- associated PCV,pmws- PCV)。 PM…     

猪圆环病毒Ⅱ型及疫苗研究现状

猪圆环病毒分为Ⅰ型和Ⅱ型。PCV1无致病性,而猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)却具有致病性,能引起猪表现多种临床症状。PCV2是引起仔猪断奶多系统衰竭综合征的主要病原。自1991年在加拿大猪群中暴发以来,PMWS已经波及全球,给全世界养猪业造成了巨大的经济损失。PCV2还与增生性坏死性肺炎、母猪繁殖障碍、猪皮炎与肾病综合征和猪呼吸道疾病综合征相关。PCV2感染性疾病引起的死亡率增高、饲料报酬降低,加上我国规模化主场饲养管理水平相对较为落后,所     

猪圆环病毒病的综合防控措施

猪圆环病毒(PCV)是一种无囊膜的单股环状DNA病毒,根据抗原性和基因型的不同,可分为猪圆环病毒l型(PCV1)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)。其中PCV1普遍认为无致病性,而PCV2和PCV3可造成断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS),猪皮炎与肾病综合征(PDNS),断奶猪和育肥猪的呼吸道病综合征(PRDC),仔猪的先天性震颤(CNS)等疾病,同时会引发免疫抑制,诱发其他疫病暴发,给养猪业带来巨大经济损失。主要对猪圆环病毒病的病原、流行状况、诊断方法及防控措施进行了综述。     

联合表达PCV2 ORF2和PPV VP2基因病毒样颗粒获得及免疫原性

将包含有完整阅读框架,长1 740、705 bp的PPV VP2基因、PCV2 ORF2基因分别插入真核表达栽体pPI-2.EGFP,构建了重组质粒pPI-2.EGFP.VP2.ORF2.观察由脂质体介导转染重组质粒后的Vero细胞,结果最早在转染后20 h左右出现荧光,36 h达到高峰;对转染细胞进行电镜检测,结果观察到病毒样颗粒存在.为证实所获病毒样颗粒是否为重组颗粒,将纯化后的病毒样颗粒免疫仔猪,检测其血中T淋巴细胞的动态变化以及血清抗体水平.结果免疫仔猪的CD3+、CD4+T淋巴细胞在外周血淋巴细胞中的比率均有一定程度的升高;CD8+T淋巴细胞在免疫后7～14 d有所下降,之后再升高.抗体检测结果表明,免疫动物血清中有较高水平的PPV、PCV2特异性抗体.结果表明重组质粒pPI-2.EGFP.VP2.ORF2获得成功表达并形成重组病毒样颗粒,且该颗粒具有良好的免疫原性.     

H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响

研究了H2O2与Fe2+等金属离子产生的自由基胁迫对桑树生理特性的影响,旨在为桑树的抗逆栽培提供理论参考。以桑树叶片为材料,研究H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响。结果表明:经H2O2-Fe2+、H2O2-Cu2+和H2O2-Zn2+3种体系溶液处理的桑.OH含量分别提高34.38%、8.14%和5.43%;O2.-含量分别降低78.77%、54.75%和63.84%;1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)清除率分别降低44.60%、57.34%和54.64%;超氧化物歧化酶(SOD)活性分别提高44.45%、36.02%和28.28%;多酚氧化酶(PPO)活性分别降低68.18%、86.58%和54.78%;过氧化氢酶(CAT)活性分别降低97.46%、96.57%和68.02%;过氧化物酶(POD)活性分别降低22.22%、提高7.42倍和66.67%。H2O2与Fe2+等的协同作用破坏了桑细胞内自由基动态平衡,导致自由基含量提高,保护酶活性受到显著影响。     

猪圆环病毒2型ORF2基因克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

猪圆环病毒2型（Porcine　circovirus　type　2，PCV2）是仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PWMS）的病原。它不但可以引起断奶仔猪发生衰竭、死亡，更为严重的是PCV2的感染可以造成免疫抑制，引起其他各种病原的继发感染，造成的间接损失难以估计。目前，PCV2己经成为严重阻碍养猪业发展的主要病原之一。     

二型圆环病毒ORF2基因的序列分析

通过PCR扩增，对两株分离到的2型猪圆环病毒的ORF2基因进行了扩增，将获得的PCR产物分别与T载体连接，获得了两个毒株的ORF2基因阳性克隆。序列分析表明，与其它中国分离株同源性高达99%，同处于一个基因簇，但和中国BF分离株同源性却只有92.3%。而荷兰分离的NL-PMWS-2株与中国分离株的同源性却在99%以上，表明中国流行的PCV-2和国外分离株有密切关系。     

Pathology of 2-alkyl and 2-hydroxy naphthoquinone toxicity in rats

Abstract Extract The oral administration of 2-methyl-1, 4-naphthoquinone (menadione) to rats caused oxidative destruction of the erythrocyte. Heinz body formation occurred in erythrocytes, lowered PCVs and haemoglobin Occurred in blood, with splenic and hepatic erythroclasis, and iron conservation in the spleen, liver and kidney. These effects diminished when increasingly large alkyl substitutions of the methyl group of thi naphthoquinone were made. No effect was caused by the 2-decyl derivative.     

猪圆环病毒2型ORF2基因的表达及活性研究

根据猪圆环病毒2型(PCV-2)基因序列设计1对特异性引物,PCR扩增PCV-2去核定位信号(nuclear localization signal,NLS)的Cap蛋白基因(oRF2),经Bam H Ⅰ/HindⅢ双酶切后将其克隆到表达载体pQE30中并转化大肠埃希菌JM109,采用IPTG进行诱导表达,采用自行创新的纯化方法对表达的融合蛋白进行纯化,Western blot鉴定纯化后的重组Cap蛋白(rCap)活性.结果表明,成功克隆了无核定位信号的ORF2基因,其分子质量大小为579 bp;表达的rCap蛋白大小为24.1 ku左右,与预期大小相一致;经纯化后的rCap蛋白纯度在95%以上;Western blot鉴定结果表明,Cap蛋白可以和抗PCV-2抗体反应,具有很好的抗原性.本研究为进一步建立以Cap蛋白为包被抗原的PCV-2间接ELISA诊断方法以及PCV-2疫苗的研究奠定了基础.     

Pathology of 2-alkyl and 2-hydroxy naphthoquinone toxicity in rats

Extract

The oral administration of 2-methyl-1, 4-naphthoquinone (menadione) to rats caused oxidative destruction of the erythrocyte. Heinz body formation occurred in erythrocytes, lowered PCVs and haemoglobin Occurred in blood, with splenic and hepatic erythroclasis, and iron conservation in the spleen, liver and kidney. These effects diminished when increasingly large alkyl substitutions of the methyl group of thi naphthoquinone were made. No effect was caused by the 2-decyl derivative.     

猪圆环病毒2型ORF1和ORF2基因的克隆与表达

根据GenBank猪圆环病毒2型基因序列,设计合成两对特异性引物,对厦门株-1进行PCR扩增,得到ORF1和ORF2基因。将PCR产物酶切后,插入到pET-22b载体中,构建原核表达载体pET-22b/ORF1、pET-22b/ORF2,转化大肠杆菌BL21(DE_3),经IPTG诱导表达,收集茵液进行SDS-PAGE分析。确定重组蛋白主要以包涵体的形式表达,包涵体洗涤溶解后,采用Ni~(2 )离子金属螯合亲和层析柱纯化蛋白,逐步透析法进行复性。Western blot和ELISA分析结果表明Rep蛋白和Cap蛋白均能与猪圆环病毒2型阳性血清发生特异性反应。     

PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建

根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因序列,分别设计一对引物,应用PCR和RT-PCR扩增出PCV-2 ORF2基因和PRRSV ORF5基因。将PCR产物ORF2经Nhe Ⅰ／EcoRⅠ双酶切回收后插入真核表达载体pIRES得到pIRES-ORF2,RT-PCR产物ORF5经NotⅠ／XbaⅠ双酶切回收后插入pIRES-ORF2构建重组质粒pIRES-ORF2／ORF5。对此质粒中的插入片段,进行PCRRT-PCR及双酶切鉴定,同时对插入序列进行测序分析,表明SD1株ORF2与国内多种毒株的同源性为99％,pIRES-ORF2ORF5转移载体ORF5基因的核苷酸推导氨基酸与北美洲原型（VR-2332株）氨基酸同源性为99％。此重组表达载体的成功构建,为进一步研究PCV-2ORF2及PRRSV ORF5编码蛋白的生物学活性及研究猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二联核酸疫苗奠定了基础。