苹果潜隐病毒的温室鉴定

本文介绍苹果潜隐病毒在温室内的鉴定结果和所需时间。根据这一试验资料,可以把已知的三种苹果潜隐病毒的鉴定由田间改在16～27℃的温室内进行。从而,将在木本指示植物上进行鉴定所需的时间,由1～3年缩短到2～5周,鉴定结果准确、效果好。并初步选出Radiant(光辉)可以取代Spy227(司派227),作为茎痘病毒的指示植物。     

梨病毒温室鉴定技术研究

１９９３—１９９５年，在１６—２８℃温室内采用８种木本指示植物对４种梨病毒进行鉴定的结果表明，用Ａ２０、杂种、Ｃ７／１和弗吉尼亚小苹果分别作梨环纹花叶病毒、梨脉黄病毒、矮化病毒和苹果茎沟病毒的指示植物，其检出率分别达９０．０％、１００％、８７．０％和９７．０％。４种梨病毒温室鉴定所需时间由田间鉴定的１．５—２．０年缩短为２—３个月。     

几种木本指示植物对苹果潜隐病毒敏感性的研究

苹果潜隐病毒的鉴定和检测,主要是靠木本指示植物的症状反应。国际上虽然提出了几种鉴定苹果潜隐病毒的标准木本指示植物,但是,由于指示植物症状表现因病毒株系及气候条件的不同而有很大差异,所以,各国都在筛选适合于本国条件的指示植物。我们为了提出适于我国苹果潜隐病毒鉴定的最佳指示植物,于1989～1991年在田间对几种国外引进的木本指示植物的症状反应敏感性,进行了试验,现将试验结果总结如下:     

阿克苏地区枣树花叶伴随病毒A(JuMaVA)的分子检测

[目的]明确枣树花叶伴随病毒A的田间侵染动态,探索出病害防治的关键时间节点.[方法]以枣树花叶伴随病毒A全基因组序列为靶标设计序列特异性引物,建立枣树花叶伴随病毒A分子检测技术,并应用于枣树花叶伴随病毒A田间侵染动态的追踪检测与分析.[结果]该检测技术对枣树花叶伴随病毒A检测的最低质量浓度为4.168 pg·μL-1,...     

柑橘褪绿矮化相关病毒LAMP检测体系的建立

根据GenBank登录的柑橘褪绿矮化相关病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)的移动蛋白(MP)基因序列设计了一组特异性引物,经体系优化,建立了CCDaV的环介导等温核酸扩增(LAMP)检测方法。结果显示该方法能特异扩增CCDaV,与其他5种柑橘病原物(柑橘衰退病毒、柑橘碎叶病毒、柑橘裂皮病类病毒、温州蜜柑萎缩病毒和柑橘黄龙病菌)不发生反应;灵敏度为PCR的100倍,与实时荧光PCR的灵敏度相同。用LAMP方法对50个田间样品进行检测,与PCR和实时荧光PCR的检测结果一致,证明该方法可用于田间样品的检测。该LAMP检测方法可特异、灵敏、快速地对CCDaV样品进行检测。     

温州蜜柑船形叶病因研究再报

试验表明我国田间温州蜜柑上的船形叶多数不是由温州蜜柑萎缩病毒（ＳＤＶ）所致，其中部分具有嫁接传染性，经ＥＬＩＳＡ检测带柑桔衰退病毒（ＣＴＶ）。用ＣＴＶ接种温州蜜柑，可致船形叶症状。推测我国田间温州蜜柑船形叶症状主要系ＣＴＶ所致。     

采用RT—PCR技术检测苹果病毒

研究建立了危害仁果类果树的苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的RT—PCR检测体系。其检测灵敏度高,专一性强,为仁果类果树的病毒检测提供了一种分子生物学检测方法。应用该体系对田间的苹果树携带上述三种病毒的情况进行了调查,发现单独感染率和复合率均很高,达84.2%～100%。     

江苏省番茄黄化曲叶病毒和褪绿病毒复合侵染的分子检测

2014年对江苏地区的番茄黄化曲叶病进行调查时发现,采自南京温室大棚的17份表现矮化,上部叶片上卷、变小、叶缘黄化,下部叶片脉间褪绿、上卷、变厚症状的番茄病株样本中除了感染烟粉虱传双生病毒外,还有一种长线形病毒,序列分析结果显示烟粉虱传双生病毒为番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV),长线形病毒为番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)。同时还对发病棚室中采集的烟粉虱进行了两种病毒的检测,结果两种病毒在烟粉虱体内都有检测到。     

苹果常见病毒病害田间指示植物检测试验小结

“农业部与山东省联建山东国家级果树无病毒苗木繁育基地烟台脱毒检测中心”1991年开始由农业部牵头投建,省果茶站代管。5年来,我所先后由联邦德国、中国果树所(兴城)等处引进一批果树病毒病害检测用木本指示植物与草本指示植物及一批果树无病毒材料。为了验证这些引进指示植物及无病毒材料的可靠性,试验总结规范化的指示植物田间检测技术规程及常现应用的可行性,择样进行了本试验。现将试验情况简结如下。     

江苏省番茄黄化曲叶病的病原分子诊断

 2007年冬季在江苏省兴化市和南京市一些日光温室大棚中发生了一种新的番茄病毒病,主要表现为植株矮缩,叶片上卷,叶缘黄化等,危害十分严重。为明确其病原,对田间表现典型症状的20份病样进行了分子检测,结果全部检测到粉虱传双生病毒;对其中12份进行序列同源性分析,发现其同源性超过98%,说明其极可能是一个分离物;将该序列与Genbank进行BLAST分析,发现其与番茄黄化曲叶病毒的同源性最高,达99％。     

柑橘黄化脉明病毒RT-LAMP检测方法的建立

柑橘黄脉病由柑橘黄化脉明病毒（Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV）引起,是中国近年来新发生的一种柑橘病害。根据CYVCV的外壳蛋白基因序列设计了一组特异性引物,经过一系列条件优化,建立了该病毒的RT-LAMP检测方法。结果显示该方法能特异扩增CYVCV,与其他6种柑橘病原物（柑橘衰退病毒、温州蜜柑萎缩病毒、鳞皮病毒、柑橘裂皮病类病毒、柑橘碎叶病毒和柑橘黄龙病菌）不发生反应;灵敏度为RT-PCR的10倍;田间样品的检出率为63.33%,与RT-PCR的结果一致,适用于田间样品的检测。在产物中加入荧光染料SYBR GreenⅠ直接用肉眼观察就可判断样品是否感染CYVCV,可省去电泳分析的时间。该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单、快速等特点。     

温州蜜柑船形叶病因研究再报

试验表明我国田间温州蜜柑上的船形叶多数不是由温州蜜柑萎缩病毒（ＳＤＶ）所致，其中部分具有嫁接传染性，经ＥＬＩＳＡ检测带柑桔衰退病毒（ＣＴＶ）。用ＣＴＶ接种温州蜜柑，可致船形叶症状。推测我国田间温州蜜柑船形叶症状主要系ＣＴＶ所致。     

柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的二重RT-PCR检测体系的建立与应用

选用柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)和柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)两种病毒外壳蛋白保守序列及内参基因Ubiquitin的特异性引物,优化影响二重RT-PCR反应的Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度和退火温度,建立了针对两种病毒的一步法二重RT-PCR检测体系。二重RT-PCR获得CYVCV、CTV及Ubiquitin的特异性片段大小分别为614、373和194 bp,克隆测序和序列对比结果显示它们与已报道的病毒序列具有较高的同源性。该体系最低能从40 ng·μL~(-1)总核酸中检测出CYVCV,从4 ng·μL~(-1)总核酸中检测出CTV,其灵敏度与单一RT-PCR检测灵敏度一致。利用该体系对33份田间样品进行检测,CYVCV和CTV感染率分别为54.5%和66.7%,复合侵染率高达36.4%。该一步法二重RT-PCR技术体系可用于大量田间样品中CYVCV和CTV的快速同步检测。     

葡萄4 种病毒多重RT-PCR 检测体系的建立

 以复合感染4种病毒的‘红地球’（Red Globe）葡萄样品为试材,对影响多重PCR的dNTPS浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化,建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3（Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3）、沙地葡萄茎痘相关病毒（Grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV）、葡萄病毒B（Grapevine virus B,GVB）和葡萄病毒A（Grapevine virus A,GVA）的多重RT-PCR方法。灵敏度测验结果显示,多重RT-PCR与单一RT-PCR检测灵敏度基本一致。多重RT-PCR获得的特异性片段大小分别为905、546、460和196 bp,经过克隆、测序及序列比对,表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对7个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果表明,所建立的多重RT-PCR技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。     

胶东半岛地区葡萄病毒病田间调查和血清检测

2008年8—9月对胶东半岛葡萄主产区15个葡萄园的病毒病发生及危害情况进行了田间调查,采集了4个酿酒葡萄品种共计44份葡萄样品,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法进行病毒血清学检测。从样品中分别检出葡萄斑点病毒(GFKV)、葡萄卷叶病毒1(GLRaV-1)和葡萄卷叶病毒3(GLRaV-3),检出率分别为6.82%、2.27%和40.91%。蛇龙珠样品中3种病毒均被检出,总检出率达60.71%;赤霞珠样品中检出了葡萄卷叶病毒3和葡萄斑点病毒,总检出率为36.46%。蓬莱地区葡萄样品中3种病毒均被检出,检出率达55.56%,龙口地区病毒检出率也达到了52.17%。     

广东佛山地区田间烟粉虱的隐种鉴定及带毒率检测

对广东佛山地区田间烟粉虱隐种种群动态及其携带番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）和番茄褪绿病毒（To CV）的情况进行了检测。烟粉虱隐种鉴定结果表明，三水区烟粉虱种群全部为MED隐种，禅城区、南海区、顺德区为MED和MEAM1种群混合发生。烟粉虱带毒率检测结果表明，采集自佛山6个地点的烟粉虱田间种群均携带TYLCV和To CV。除南海区狮山镇石门中学外，其余5个地点烟粉虱种群TYLCV带毒率均超过50%。除南海区丹灶镇金沙上安村外，其余5个地点烟粉虱种群To CV带毒率均达到100%。由烟粉虱传播的TYLCV和To CV在佛山地区的迅速扩张需引起高度重视。     

番茄幼苗黄化曲叶病毒检测带毒率

2009年番茄黄化曲叶病毒病在北京市首次发生,且给生产造成严重损失,为了解番茄苗期带毒率以便进行综合防控,2010年2～3月份在顺义区、大兴区、通洲区、平谷区番茄育苗温室采集即将定植及已定植1～2 d的番茄幼苗植株进行黄化曲叶病毒分子检测。共检测番茄幼苗样品645株,检出阳性样品226个,番茄幼苗带毒率为35.04 %。调查检测结果表明,被侵染的番茄幼苗不表现明显症状,病毒含量明显低于表现典型症状的成株番茄。根据检测结果,初步预测2010年北京市早春温室番茄黄化曲叶病毒病有可能较大程度发生。     

番茄幼苗黄化曲叶病毒带毒率检测

2009年番茄黄化曲叶病毒病在北京市首次发生,且给生产造成严重损失,为了解番茄苗期带毒率以便进行综合防控,2010年2～3月在顺义区、大兴区、通州区、平谷区番茄育苗温室采集即将定植及已定植1～2d的番茄幼苗植株进行黄化曲叶病毒分子检测。共检测番茄幼苗样品645株,检出阳性样品226个,番茄幼苗带毒率为35.04%。检测结果表明,被侵染的番茄幼苗不表现明显症状,病毒含量明显低于表现典型症状的成株番茄。根据检测结果,初步预测2010年北京市早春温室番茄黄化曲叶病毒病有可能较大程度发生。     

应用多重RT2PCR检测百合无症病毒和百合斑驳病毒

 根据病毒外壳蛋白基因序列, 设计了2对检测百合无症病毒(LSV) 、百合斑驳病毒(LMoV)的引物, 对扩增条件进行优化, 建立了同时检测LSV和LMoV的多重RT-PCR检测方法。此方法可特异地从带有LSV和LMoV的样品中扩增出2条带LSV (876 bp) 、LMoV (662 bp)。灵敏性测定结果表明, 该双重PCR可从稀释10⁴ 组织中检测出病毒, 具有与单一PCR相同的灵敏性。扩增产物测序表明, LSV扩增产物与其它分离物核苷酸同源性为87.8%～99.3%, LMoV扩增产物与其它分离物的同源性为90.1%～99.5%。     

马铃薯5种病毒多重PCR检测技术的建立及应用

采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯M病毒（PVM）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯A病毒（PVA）和马铃薯S病毒（PVS）的方法。根据 GenBank中PVX、PVM、PVY、PVA及PVS（CP）基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、循环次数、延伸温度、引物组合浓度进行优化,建立了能同时检测5种马铃薯病毒的多重RT-PCR方法。该方法能同时扩增出PVX、PVM、PVY、PVA及PVS特异片段,其大小分别是138、213、369、468和657 bp。测序结果表明,5种病毒的序列与相应参考序列相似性达到97%以上。灵敏度分析结果表明,多重RT-PCR方法能够检测植物组织量为10-3 mg。应用建立的多重RT-PCR检测方法对田间样品和组培苗进行检测,结果显示,该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的5种马铃薯病毒。