放线菌菌株AH-1的分离鉴定与抑菌活性研究

为筛选具有农用抑菌活性的微生物,从采自安徽黄山山区的土壤中分离得到一株具有抑制真菌活性的菌株AH-1。通过对其形态和培养特征、生理生化特性和16SrDNA序列分析,确定其为卡那霉素链霉菌。室内活性测定结果表明,该菌株发酵液具有广谱、较强的抗植物病原真菌活性,其对小麦根腐病菌和苹果褐腐病菌的菌丝生长抑制率高达94.4%和95.7%。抑制孢子萌发生测结果表明,AH-1菌株发酵液抑制玉米大斑病和马铃薯干腐病菌孢子萌发的EC50分别为15.81mg/L和10.17mg/L。推测,该菌株发酵液中可能含有广谱农用抑菌活性物质,值得深入研究。     

深海链霉菌拮抗香蕉枯萎病菌活性菌株的筛选及鉴定

为寻求防治香蕉枯萎病的药物新资源,从90株深海链霉菌中筛选到拮抗香蕉枯萎病病原菌的活性菌株,通过其菌块及发酵液抑制香蕉枯萎病病原菌菌丝生长和孢子萌发活性筛选法,对活性菌株220362进行形态、细胞壁成份及16SrRNA基因序列鉴定。结果表明:筛选获得24株拮抗香蕉枯萎病病原菌活性的深海链霉菌菌株,活性率高达26.7%,其中8株归类为链霉菌粉红类群,3株菌株在20%盐浓度下代谢最佳拮抗香蕉枯萎病病原菌活性物质;菌株220362拮抗活性强,嗜盐性高,产生的拮抗物质稳定,初步鉴定为链霉菌属的1个新种。     

一株链霉菌发酵液对小菜蛾的杀虫作用研究

为了合理开发和利用链霉菌发酵液,通过测定链霉菌菌株HNll8发酵液对小菜蛾卵和不同龄期幼虫的杀虫活性,研究其杀虫作用。结果表明：链霉菌菌株HNlt8发酵液对小菜蛾卵无作用,对2龄和3龄小菜蛾幼虫防效较好,校正死亡率平均值达到70％以上,可以确定该菌株具有一定的杀虫活性。     

蔬菜根结线虫生防菌的筛选

采用河北农业大学植物病害生物防治实验室已经筛选到的、对多种病原菌具有颉颃作用的120株链霉菌和50株芽孢杆菌,筛选对蔬菜根结线虫有防治作用的菌株,结果表明,Z-L-2、Z-L-17、Z-L-19、Men-myco-93-19、Men-myco-93-38、Men-myco-93-63等6株链霉菌,其发酵液稀释4倍后对根结线虫二龄幼虫的校正致死率均在90%以上。6株链霉菌发酵液用于盆栽防治黄瓜根结线虫病,菌株Z-L-2发酵液的防效为最高,达到75%,地上部和地下部鲜重与对照相比,分别增加89.4%和66.67%;0.5%阿维菌素1 000倍液的防效为8.3%,地上部和地下部鲜重分别增加了46.3%和63.9%。     

黄瓜疫霉菌拮抗菌的筛选及鉴定

为更好的防治黄瓜疫病,从湖南、贵州等地采集的土壤样品中分离到放线菌106株,采用平板对峙法及发酵液抑菌试验筛选对黄瓜疫霉菌(Phytophthora melonis)具有拮抗活性的放线菌。结果表明,106株放线菌中有26株对黄瓜疫霉菌有抑制作用,抑菌带达到5 mm及以上的有5株,其中2号菌株的拮抗作用最明显,发酵液稀释5倍后对黄瓜疫霉菌的菌丝生长抑制率仍达76%。对2号菌株进行培养性状、生理生化特征鉴定及16S r DNA序列分析,初步将其鉴定为绛红褐链霉菌(Streptomyces purpeofuscus)。     

链霉菌“新_1”的特性及抗菌作用

一九七七年自江苏省新洋试验站盐碱土中分离一株链霉菌,编号新1,经鉴定是白黄链霉菌 Streptomyces alloflavus 的一个新变种。室内测定,它是一株对多种植物病原细菌和植物病原真菌具有拮抗作用的广谱抗生菌,拮抗性强。其发酵液中抗生性物质的活性也较稳定。应用其发酵液、粗提液或培制的抗生菌剂对棉花枯萎病和水稻白叶枯病进行的盆栽和田间小区试验,取得一定防治效果,而且对植株不产生药害,是具有实践价值的一个菌株。     

龟裂链霉菌菌株MY02发酵液中抗菌物质的稳定性测定

本实验室分离获得的链霉菌菌株MY02发酵液对植物病原真菌均表现良好的抑茵活性。对其在不同条件下的稳定性进行测定结果表明,茵株MY02发酵液在中性及偏碱性的条件下稳定,室温条件下存放半年后活性开始下降,存放1年后其活性丧失过半;菌株MY02发酵液对光稳定,54℃15d菌株MY02发酵液的抑菌活性不下降。     

放线菌H50发酵液抑菌活性及其稳定性测定

将沈阳农业大学微生物研究室分离的1株放线菌H50[链霉菌属(Streptomyces)]分别以植物病原菌真菌12株、细菌3株为供试菌,采用菌丝生长速率法和管碟法测定H50发酵液的抑菌活性以及发酵液的稳定性.发酵液的抑菌活性测定结果表明:H50发酵液对12株供试病原真菌均具有不同程度抑制作用,对其中6种病原真菌菌丝生长抑制率达50％以上,对油菜菌核病菌和黄瓜灰霉病菌的抑制率分别为98.3％和94.9％;H50发酵液对3种供试病原细菌中的枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,抑菌圈直径为12.3mm.发酵液的稳定性检测结果表明:发酵液在80℃处理后抑菌活性开始下降,发酵液在pH值4.0～8.0条件下抑菌活性稳定,可见该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的热、酸、紫外光稳定性,具有潜在的开发价值.     

放线菌P3-2的抗菌活性筛选及发酵液稳定性研究

对贵州高坡地区不同类型的土壤中分离出的256株放线菌进行发酵液拮抗性筛选,得到1株放线菌菌株P3-2。采用菌丝生长速率法,对其抗菌活性进行研究,并在不同条件下测定发酵液的稳定性,结果表明,放线菌P3-2菌株发酵液对14种供试病原菌均具有不同程度的抑制作用,其10倍稀释液对其中9种病原真菌菌丝生长的抑制率达到85%以上,尤其对油菜菌核病菌和黄瓜灰霉病菌的抑菌效果最好,抑制率达到100%。发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液对热、酸和紫外线均较稳定,对碱稳定性较差。该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定的研究开发价值。     

海洋放线菌B5菌株发酵液抗菌谱及稳定性研究

B5菌株是从山东威海浅海海域分离得到的一株放线菌,经初步鉴定为链霉菌属（Streptomyces）.其发酵液对15种病原真菌进行室内杀菌活性生测,结果表明,B5菌株发酵液对13种供试真菌的菌丝生长抑制率均在80%以上;其发酵液对3种病原细菌进行室内杀菌活性生测,结果表明,B5菌株发酵液对3种供试细菌的抑菌圈直径均在15mm以上.发酵液经80℃处理6h,活性仅丧失了18.2%.在酸性条件下活性稳定,但在碱性条件下活性不稳定.捷克八溶剂系统纸色谱测定结果表明,该发酵液的主要活性物质为碱性水溶性抗生素.     

内生真菌2K3代谢产物抗菌活性研究

研究了从苦皮藤根皮中分离的一株编号为2K3内生真菌代谢产物的杀菌活性。生物测定结果表明，2K3菌株菌丝体的甲醇和乙酸乙酯提取物对多种植物病原真菌具有较强的抑菌活性。其中，甲醇提取物的抑菌活性比乙酸乙酯提取物强，在1 000μg/mL浓度下对烟草赤星病菌、马铃薯干腐病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌、玉米大斑病菌的菌丝生长抑制率均大于90%；抑制孢子萌发法试验结果表明，2K3菌株菌丝体的甲醇提取物对烟草赤星病菌玉米大斑病菌和马铃薯干腐病菌的EC50分别为59.4μg/mL、96.5μg/mL和132.5μg/mL；管碟法生测结果表明，2K3菌株菌丝体的甲醇提取物对枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌的抑菌圈直径分别为20 mm和27 mm；盆栽试验结果表明，2K3菌株菌丝体的甲醇提取物在2 000μg/mL浓度下对小麦白粉病的治疗和保护作用均在70%以上。     

烟草野火病菌拮抗细菌的筛选及其应用研究

从牡丹江烟草科学研究所试验田采集不同品种的健康烟叶30份,利用稀释分离法分离到287株细菌,采用平板对峙法筛选出对烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)具有拮抗作用的菌株14株.拮抗性最好且稳定的菌株Y32经生理生化特性和16S rDNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).为测定拮抗细菌Y32在烟草叶片中的定殖能力,对Y32进行利福平抗性诱导试验.结果表明,利福平抗性诱导后该菌株对野火病菌的抑制作用显著低于原始菌株,并且在培养基上菌落呈透明状,无法计数,因此,利福平抗性标记不适于Y32在烟草叶片中的定殖能力研究.发酵优化试验结果表明,拮抗细菌Y32最佳实验室发酵配方为:氮源1%(酵母膏 蛋白胨=5 3),葡萄糖0.1%,NaCl 0.3%,KNO30.5%;最佳培养条件为:发酵温度28℃,培养基pH 7.0~7.5,接种量4%,装液量为250 mL三角瓶中装液50 mL.田间试验结果表明,发酵条件优化后Y32防效达到71.6%,显著高于发酵条件优化前和对照药剂甜叶桔,具有进一步研究价值.     

放线菌A19菌株次生代谢产物的初步研究

【目的】对放线菌A19菌株发酵液中的次生代谢产物进行初步研究,以了解其抑菌活性及其稳定性。【方法】采用抑制菌丝生长法、管碟法、盆栽试验等方法,测定了A19菌株发酵液的抑菌活性和发酵液中有效成分的热稳定性及酸碱稳定性;并以活性追踪为指导,采用大孔吸附树脂、硅胶柱层析、高效液相色谱等技术对其有效成分进行了分离。【结果】室内生测发现,A19菌株发酵液对10种供试病原真菌均有明显的抑制作用,其中对小麦根腐病菌的抑制效果最好,抑制率达100%;对枯草牙孢杆菌、金黄色葡萄球菌和L-链球菌3种病原细菌也有较好的抑制作用,其中对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,抑菌圈直径达到21 mm。盆栽试验表明,A19菌株发酵液对小麦白粉病有一定的保护作用和治疗作用,防治效果分别为54.3%和65.0%。A19菌株发酵液对热稳定,对酸碱不稳定。从A19菌株的发酵液中分离得到15-1,15-2和15-3 3种化合物,其中15-2鉴定为7-羟基-3异丁基六氢吡咯[1,2-α]吡嗪-1,4-二酮。【结论】放线菌A19菌株发酵液抗菌谱较广,具有较好的研究价值。     

人参锈腐病拮抗细菌的筛选鉴定

为获取对毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans(Zinss.)Scholtan)防治效果优良的菌株,从人参根际土壤中分离到113株细菌,采用平板对峙法筛选出13株拮抗性良好的拮抗细菌,生长速率法对经过滤和灭菌的菌株发酵液进行抑菌谱测定,采用盆栽试验研究其对人参锈腐病的防治效果及其人参植株促生效果。SZ-2菌悬液对毁灭柱孢菌的抑制率达88.80%,同时具有广谱抑菌能力。盆栽试验结果表明,菌株SZ-2对人参锈腐病的防治效果为68.50%;其对人参植株具有一定促生作用,经其处理后的人参平均植株高度、整株鲜质量、整株干质量、根长、根鲜质量和根干质量均有不同程度的增加,其中整株干质量、根干质量和根长增长量高达79.39%、131.51%和86.90%;与对照组相比具有显著差异(P0.05)。经形态学、生理生化特征、16SrDNA及gyrB基因测序等分析,确定菌株SZ-2为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus),在GenBank中序列登录号为KC511107。     

紫花苜蓿根腐病生防菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

【目的】筛选获得对紫花苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株,并对其发酵条件进行优化,为紫花苜蓿根腐病生物防治提供菌株资源。【方法】以青藏高原的紫花苜蓿根际土壤为研究对象,以紫花苜蓿根腐病5种病原菌为靶标,利用稀释涂布法分离细菌;利用平板对峙法筛选对苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株;利用平板对峙法和菌丝生长速率法测定拮抗菌株对5种苜蓿根腐病病原菌的抑菌活性;通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析确定拮抗菌株的分类地位;利用单因素试验和正交试验对拮抗菌株发酵条件进行优化。【结果】从紫花苜蓿根际土壤中共分离纯化出92株细菌,从中筛选出16株对供试病原菌具有较强拮抗作用的菌株,其中菌株LJ3-1的抑菌效果最强,且具有广谱抑菌活性。对菌株LJ3-1发酵滤液的抑菌活性测定结果显示,其发酵滤液对供试病原菌的抑制率为44.9%~77.4%。结合菌落形态特征、生理生化测定和16S rDNA序列分析结果,将菌株LJ3-1鉴定为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。对菌株LJ3-1的发酵条件优化结果显示,其最适发酵培养基组分为3%葡萄糖、 1%酵母浸粉和0.5% NaCl;最适发酵条件为初始pH 6.5~7.0、培养温度35 ℃、 250 mL锥形瓶装液量80 mL、接种量3%、培养时间36 h、转速180 r/min。在优化后的发酵培养条件下,菌株LJ3-1对燕麦镰刀菌 （Fusarium avenaceum）的抑菌活性由76.5%提高至89.3%。【结论】菌株LJ3-1对紫花苜蓿根腐病5种病原菌均具有良好的拮抗作用,可作为研制苜蓿根腐病生物防治菌剂的候选菌株。     

一株抗南方根结线虫长形赖氨酸芽孢杆菌的分离鉴定及应用

【目的】筛选对南方根结线虫具有良好活性的生防菌株,为杀线虫制剂的研制与应用提供理论依据。【方法】采用平板稀释法对从抗线虫黄瓜根系附近采集的土壤样品进行芽孢杆菌分离,通过浸渍法筛选出杀线活性高且稳定的菌株,结合形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析对活性菌株进行分类鉴定,并通过离体、盆栽及田间试验对分离菌株防治南方根结线虫的效果进行验证。【结果】筛选出1株具有较高杀线虫活性的芽孢杆菌C1,经鉴定菌株C1为长形赖氨酸芽孢杆菌（Lysinibacillus macroides）。杀线活性测定结果表明,菌株C1发酵上清液对南方根结线虫卵孵化的相对抑制率为74.50%、对雌虫孵化的相对抑制率为95.17%、对2龄幼虫的24和48 h校正死亡率分别为98.83%和100.00%,且杀虫活性稳定;盆栽试验发现,菌株C1发酵液50倍稀释液对番茄南方根结线虫的防效为73.24%;田间防病试验结果显示,菌株C1发酵液50倍稀释液对黄瓜南方根结线虫病的防效达82.67%,且产量较清水对照增产20.0%。【结论】菌株C1不仅对南方根结线虫病具有良好的防治效果,且能促进作物生长,可作为生物农药和肥料在农业生产中开发利用。     

油菜菌核病拮抗细菌筛选及菌株BX-7的生防作用研究

从油菜根围土壤中分离出156株细菌,通过对峙实验的初步筛选,有10株细菌对油菜菌核病菌有一定的拮抗作用。菌株BX-7对油菜菌核病菌的菌丝生长有明显的抑制作用,对峙培养的油菜菌核病菌菌丝边缘由白色变为淡黄色,经过显微镜观察发现菌丝发生断裂、肿大或畸形等。菌株BX-7的挥发性产物和无菌发酵液均对油菜菌核病菌菌丝的生长有抑制作用。挥发性产物对菌丝生长的抑制率最高为74.09%。无菌发酵液随培养时间的不同其抑制效果有显著差异,在培养96 h时达到最佳。油菜叶片离体测定和盆栽试验结果表明,菌株BX-7的菌悬液和无菌发酵液均对油菜菌核病有较好的抑制作用,菌悬液处理的防效优于无菌发酵液。     

放线菌HJ1-2菌株发酵液抑菌谱及稳定性的研究

采用菌丝生长速率法、管碟法和活体组织法测定发酵液的抑菌活性,在不同条件下测定发酵液的稳定性,捷克溶剂系统纸层析法鉴别发酵液中抗生素类型.发酵液的抑菌活性测定结果表明,放线菌HJ1-2菌株发酵液对20种供试病原真菌均具有不同程度抑制作用,其10倍稀释液对其中10种病原真菌菌丝生长的抑制率达到80%以上;供试7种细菌中放线菌HJ1-2菌株发酵液对白菜软腐病菌的抑制作用最强,抑菌圈直径为17.75 mm;放线菌HJ1-2菌株发酵液对油菜菌核病和番茄灰霉病的抑制率分别为100 %和71.39 %.发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液对热、酸和紫外线均较稳定,发酵液在80℃处理后抑菌活性开始下降,发酵液在pH3～9条件下抑菌活性稳定.捷克溶剂系统纸层析法测定表明,发酵液中主要抑菌活性物质为大环内酯类抗生素.该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值.     

Study on Biological Control Of Rhizoctonia solani via Trichoderma

Strain T02-25 was selected from approximately 30 rhizosphere isolates of Trichoderma species isolated from roots of crops. Its biological activity against Rhizoctonia solani was determined for the control efficacy to pepper seedling blight caused by R. solani in the field. The assay methods were treating R. solani sclerotia by Trichoderma conidial suspension (106cfu ml-1) and scattering Thichoderma rice bran over the pepper root medium. The results showed that T02-25 was active against R. solani in both ways, and its control efficacy was 82.7% and 78.0%, respectively. In addition to comparison of the efficacy of the two application methods, the relationship of different factors in the control efficacy of Trichoderma against R. solani was discussed.