哮喘患者12号染色体微卫星不稳定性和杂合性丢失的研究

目的了解广东湛江地区哮喘患者12号染色体微卫星不稳定性（microsatellite instability,MSI）及杂合性丢失（loss of heterozygosity,LOH）情况。方法采用PCR、聚丙烯凝胶电泳及硝酸银染色法对30例哮喘患者和30例健康对照者外周血及痰液DNA中12q13.11-24.31上10个微卫星位点进行检测。结果健康对照者未发现任何微卫星改变现象。30例哮喘患者中,8例（26.7%）患者痰液DNA有一个或多个位点发生微卫星改变（包括MSI和LOH）。结论湛江地区哮喘患者痰液DNA中12号染色体上可检测到MSI和LOH现象。微卫星改变可能与哮喘之间存在一定的相关性,MSI和LOH可能在哮喘发病机制中起一定的作用。     

爆发鸡马立克氏病后部分微卫星不稳定性的研究

选取45个微卫星位点,对爆发马立克氏病的4只患鸡的淋巴细胞和正常的组织及3号鸡的肿瘤组织,提取核酸,利用45个所选微卫星引物进行PCR扩增,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星不稳定性的变化。研究结果表明,在4只患鸡中有39个微卫星位点发生微卫星不稳定性的变化,其中3号鸡发生变化概率最高,证实同个体的淋巴细胞和肿瘤组织同位点发生MSI变化的符合率达到75.6%。     

长江上游特有鱼类红唇薄鳅微卫星DNA分离及序列特征分析

为筛选出特异性高的红唇薄鳅微卫星位点,采用生物素探针(AC)13杂交和FIASCO磁珠富集法从红唇薄鳅基因组DNA中分离出一批微卫星序列,并对其序列特征进行分析。结果显示,157个单克隆中,阳性克隆为131个,阳性克隆率为83.44%。排除重复序列后,共得到69条重复类型和重复次数不同微卫星序列,阳性富集率为52.67%。在这些微卫星序列中,共检测到110个微卫星位点,其中90个二碱基重复微卫星位点,14个四碱基重复微卫星位点,6个五碱基重复微卫星位点。二碱基重复中,以AC/TG重复最为丰富(73个位点),四碱基重复中,AAAG重复数目最多(6个位点),只发现了1种五碱基重复TCTTC(6个位点)。微卫星重复次数在6~10次之间最多(65.45%),20次以上的较少(0.91%)。二碱基重复微卫星的变异系数最大(36.52%),四碱基重复类型的变异系数最小(26.75%)。红唇薄鳅微卫星以完美型为主(63.64%),复合型次之(23.63%),非完美型最少(12.73%)。筛选出的这些微卫星位点将对红唇薄鳅及近缘种微卫星分子标记开发和应用提供依据。     

福建黄兔微卫星标记的遗传多样性分析

为了从DNA分子水平揭示福建黄兔群体遗传多态性和遗传结构,选择16个微卫星标记检测了40只福建黄兔的遗传变异及多态性。结果表明,在福建黄兔群体中,16个微卫星位点共检测到了100个等位基因,各位点的等位基因数在3～13,平均等位基因数为6．25个,平均有效等位基因数为4．2652。各位点平均基因频率取样方差V（pij）为8．7611×10^-3。16个微卫星位点观察杂合度（Ho）在0．4893～0．8801,平均H。为0．7227;各位点期望杂合度（He）在0．4959～0．8914,平均He为0．7324;各位点多态信息含量（PIC）变动范围为0．3814～0．8679,平均PIC为0．6766,其中有14个位点处于高度多态（PIC〉0．5）,16个微卫星位点的平均固定指数（F）为0．0132。经卡方检验,在这16个微卫星位点上,群体偏离Hardy-Weinberg平衡的程度不大。     

用微卫星引物对近交系小鼠进行遗传监测

目的 :近交系小鼠广泛地应用于医学和生物学研究领域 ,无品系污染是其基本要求 ,采用 1 0对微卫星引物对 BALB/ C-nu-nu、DBA/ 2、SCID、T73 9、TA2 、6 1 5六种近交系小鼠进行遗传监测 ,试图寻找相关品系遗传监测的基因位点和应用于实际监测。方法 :在确定实验材料符合要求的情况下 ,采用聚合酶链式反应扩增短串联重复序列 ,选择多态性位点作为相关品系的遗传监测标记。结果 :除 1个位点表现为单态性外 ,其余9个微卫星位点表现出多态性 ,其中 D2 Nds3、D3Mit1 5、D3Mit1 7、D3Mit1 8等 4个位点多态性显著 ,这 4个位点适宜用于小鼠遗传监测。上述结果说明微卫星 DNA多态性标记适用于近交系小鼠遗传监测 ,有助于遗传监测从表现型过渡到 DNA水平。     

刺参CT/AG微卫星标记的筛选

利用5’锚定引物PCT筛选刺参的CT/AG微卫星分子标记,测序的43个克隆子中,42条序列含有微卫星DNA序列,阳性克隆比率达到97.7%。去除重复序列后,共检测到56个微卫星位点,分布于26条序列中,其中25条序列检测到2个或2个以上微卫星位点。对所有筛选到的微卫星位点进行分类统计后表明,核心序列为（CT/AG）的有51个（91.1%）,5个位点为其他类型的重复。结果表明：刺参CT/AG微卫星标记在刺参基因组中含量较丰富,5’锚定引物法在筛选特定标记的同时,还筛选了其他类型的微卫星标记,具有较强的筛选效率。     

利用多态微卫星标记进行体细胞核移植山羊的遗传鉴定

微卫星广泛用于体细胞核移植动物的遗传同一性鉴定.本研究选取36个微卫星位点, 首先以2只无亲缘关系的鲁北白山羊个体对这些位点进行PCR扩增和多态性分析,筛选出10个高度多态的位点;然后对3只体细胞核移植山羊进行各位点的基因型分析.结果表明,每只核移植山羊与其供核细胞的基因型完全相同,而与受体母羊的基因型在多数位点上均不同 (克隆羊C1、C2和F与其受体母羊的基因型在10个位点中分别有9、10和10个位点不同), 证明这3只体细胞核移植山羊均由体细胞克隆而来,与受体母羊无遗传关系.     

固始白鹅遗传多样性微卫星标记分析

［目的］对固始白鹅的遗传多样性进行微卫星标记分析。［方法］利用11个微卫星标记对固始白鹅进行遗传检测,筛选出多态性较好的微卫星位点,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析这11个微卫星位点在固始白鹅中的遗传变异,计算了微卫星位点的等位基因频率、杂合度、多态信息含量和有效等位基因数。［结果］8个位点在固始白鹅上有较好的多态性,平均每个座位检测到4.25（3～6）个等位基因,平均杂合度为0.597（0.273～0.695）,平均多态信息含量为0.635（0.530～0.769）,平均有效等位基因数为3.3447（2.3830-4.9840）。［结论］为固始白鹅的保种和选育工作提供参考依据。     

长毛兔微卫星标记初步分析

为在长毛兔群体中实施标记辅助选择，检测了200只长毛兔的sat13、so133、sat4、so144等4个微卫星位点，结果表明，这4个微卫星位点都具有高度的多态性，sat4位点杂合度（H）和多态信息含量（PIC）最高，分别为0.8920与0.8790。sat13和so144位点等位基因数为7个，而sat4和so133位点分别有10个等位基因。     

多重PCR法在微卫星标记中的效果观察

通过建立一种同时检测3个位点（MCW0083、MCW0037、LEI0166）的多重PCR方法,在同一样品中同时扩增这3个微卫星位点。混合扩增产物与各位点单引物PCR法扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,用BandScan软件分析各微卫星位点的等位基因大小。多重PCR方法扩增出的DNA片段与单PCR扩增的结果表明,每个个体标记等位基因的片段大小差异不大,初步认为该方法是可行的。     

三疣梭子蟹微卫星标记的筛选及特征分析

微卫星序列包含有多种重复单元,在其两碱基重复的类型当中,CT／GA重复类型在功能基因组中比例较高。三疣梭子蟹是重要的养殖品种,对遗传种质的分析需要开发大量的分子标记,本文利用5’锚定引物PCT筛选三疣梭子蟹的CT／AG微卫星分子标记,测序的41个克隆子中,35条序列含有微卫星DNA序列,阳性克隆比率达到85．4％,共检测到55个微卫星位点,分布于20条序列中,其中19条序列检测到2个或2个以上微卫星位点。对所有筛选到的微卫星位点进行分类统计后表明,核心序列为（CT／AG）的有27个（50％1,27个位点为其他类型的重复。结果表明三疣梭子蟹CT／AG微卫星标记在三疣梭子蟹基因组中含量较丰富,5’锚定引物法在筛选特定标记的同时,还筛选了其他类型的微卫星标记,具有较强的筛选效率。     

鸡胚成纤维细胞感染马立克氏病病毒后部分染色体上微卫星不稳定性研究

研究鸡胚成纤维细胞（CEF）感染马立克氏病毒（MDV）后部分染色体（5,6,7,8,9）微卫星的变化。CEF感染马立克氏病超强毒RB1B株后,提取正常鸡胚成纤维细胞和感染病毒的成纤维细胞DNA,应用5,6,7,8,9号染色体上的43个微卫星引物进行PCR扩增,产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测。结果表明43个微卫星标记有38个表现出不同程度的微卫星不稳定性,ABR0262发生率最高,为38．10％,ABR0048,ABR0041和MCW0183也较高,为33．33％。21组样品中全部检测到微卫星不稳定性,9号样品微卫星不稳定性发生率最高,为41．86％。11号样品的发生率也较高,为32．56％。表明马立克氏病病毒感染鸡胚成纤维细胞后,可以导致广泛的宿主基因组变化。这些变化是随机的,但是也有一定的规律,而且这些变化可以用微卫星标记来检测。     

短毛切梢小蠹微卫星富集文库的构建与分析

采用生物素-磁珠富集法,构建短毛切梢小蠹微卫星富集文库。在该文库中随机挑选100个克隆作测序分析,结果表明：具微卫星位点的克隆占91％;具有10次以上碱基重复次数的微卫星序列占36％,其中最高碱基重复次数为63次;在这些微卫星序列中,完美型占47．3％,非完美型占24．2％,混合型占16．5％。表明获得的微卫星文库是高质量的文库,完美型的比例高于不完美型和混合型,与真核生物微卫星序列特征相符。     

大菱鲆微卫星标记的分离及其多态性位点检测

以生物素标记的（CA）12为探针进行杂交,借助磁珠筛选出含微卫星的Mbo I酶切片段,构建了大菱鲆Scophthalmus maximus微卫星富集文库,用同位素γ-^23P标记的探针（CA）12进行二次筛选,获得1600个阳性克隆,占59．3％。测序347个序列,得到335个（96．54％）含有微卫星序列的克隆,其中含有微卫星座位378个。完美型的微卫星序列有236个（62．4％）,非完美型的有121个（32．0％）,复合型的有21个（5．6％）,从所得序列中分离和鉴定了32对微卫星标记。利用31尾大菱鲆养殖个体评价微卫星位点,分析表明,10个位点具有多态性。不同位点等位基因数目为3～11不等,期望杂合度（He）和多态信息含量（PIC）变动范围分别为0．5061—0．8995和0．4133～0．8742。本研究中开发的微卫星多态性较高,将为大菱鲆养殖品系的优化、遗传多样性的检测及遗传图谱的构建等打下基础。     

寒地优质水稻不同类型品种适宜栽培密度研究

采用2个不同类型品种空育131和龙粳26为试验材料,研究33.3、25.0、20.0、16.7穴.m-24种不同插植密度对寒地水稻生长发育及产量性状的影响。结果表明:寒地优质水稻分蘖力强的品种其适宜插植密度为30 cm×(16.7~20.0)cm,分蘖力一般的品种其适宜插植密度为30 cm×(10.0~16.7)cm。     

4种楠木AFLP反应体系优化建立

采用核酸电泳缓冲液（TNE）结合十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）提取的高质量楠木Phoebe基因组脱氧核糖核苷酸（DNA）可满足扩增片段长度多态性（AFLP）分析的要求。利用浙江楠Phoebe chekiangensis基因组DNA优化建立楠木AFLP反应体系如下:酶切反应300 ng基因组DNA,0.3 L缓冲液4,0.3 L牛血清白蛋白（100 BSA）,50 nkat EcoR,25 nkat Mse,双蒸水加至30.0 L放置37 ℃恒温箱酶切4 h,聚合酶链式反应（PCR）仪上65 ℃15 min;连接反应20.0 L酶切产物,2.5 L T4缓冲液,666.8 nkat T4 连接酶,5 pmol EcoR接头,10 pmol Mse接头,双蒸水加至25.0 L,16 ℃连接过夜（10 ~14 h）;预扩增反应2.0 L连接产物,2.0 L 10 缓冲液,31.25 nmol镁离子,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,4 pmol脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）,预扩增引物（E＋A,M＋C）各6 pmol,双蒸水加至20.0 L;选扩增反应稀释40倍的预扩产物2.0 L,2.0 L 10缓冲液,31.25 nmol镁离子,4 pmol dNTP,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,选扩增引物（M＋CNN）15 pmol,选扩增引物（E+ANN）12 pmol,双蒸水加至20.0 L。利用上面体系在64对选扩引物中筛出13对适于浙江楠AFLP分析的最佳引物组合。图5表3参24     

中国鲎微卫星引物扩增圆尾鲎DNA的PCR反应体系优化

采用正交设计法,从dNTPs浓度、引物浓度、Mg2＋浓度、Taq DNA聚合酶用量4个因素3个水平出发,优化设计圆尾鲎DNA的PCR反应体系（引物为中国鲎微卫星引物）.并采用直观分析方法分析正交试验结果,最终建立了圆尾鲎SSR-PCR最佳反应体系：总体积20μL,Taq DNA聚合酶1.5 U、dNTPs 0.16 mmol/L、引物0.2μmol/L、Mg2＋2.0 mmol/L;并通过PCR梯度实验进一步优化模板DNA质量浓度、退火温度及退火时间,获得最佳反应条件：模板DNA质量浓度为30 ng/μL,退火温度为48℃,退火时间为20～25 s.对最佳反应体系和反应条件进行了检验,结果显示该反应体系稳定性高、重复性好.     

细胞增殖周期调控因子P15与Cyclin D1在胆囊癌发生发展中的作用

目的 探讨胆囊癌中细胞增殖周期调控因子P15、Cyclin D1的表达及其临床意义.方法 采用RT-PCR和免疫组化法检测15例胆囊癌和56例胆囊炎组织中P15、Cyclin D1 mRNA、蛋白的表达.结果 胆囊癌中P15 mRNA、蛋白表达明显低于胆囊炎(20.0% vs 94.7%,P＜0.01;46.7% vs...