作物种子DNA的提取及分子标记分析

为寻找适用于分子标记快速检测作物种子DNA的方法.本研究采用改良CTAB法、SDS法和碱提法分别提取4种农作物(玉米、水稻、大豆和高粱)种子DNA,用于RAPD、SSR标记检测.结果表明CTAB法较SDS法更适合于提取玉米胚和高粱种子DNA用于RAPD检测;碱提法提取大豆和水稻种子DNA纯化后,用于RAPD检测得到清晰扩增条带.三种DNA提取方法对作物种子提取的DNA均适用于SSR标记检测.根据分子标记方法选择不同DNA的提取方法提取作物种子DNA,才能快速获得准确有效的分子标记检测结果.     

不同方法提取大豆基因组DNA的效果比较

[目的]采用不同方法对大豆基因组DNA进行提取,为大豆基因组DNA的提取提供参考。[方法]采用CTAB法、SDS法和高盐低pH值法对大豆基因组DNA进行提取,对提取的DNA进行光密度、紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳和DNA限制性内切酶图谱等的检测。[结果]光密度和光谱检测结果表明,SDS法的提取量和纯度均优于CTAB法和高盐低pH值法;琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,SDS法提取的基因组DNA谱带较CTAB法和高盐低pH值法提取的基因DNA谱带粗、亮、重复性好;限制性内切酶检测结果表明,3种方法所得基因组DNA均能被胁谢Ⅲ和EcoRI酶切,但SDS法所得基因组DNA的酶切效果最好。l结论ISDS法的提取效果明显优于CTAB法和高盐低pH值法。     

不同提取条件对DNA质量的影响

以大豆、玉米的茎、叶片为材料,采用酚-氯仿法提取DNA。通过不同提取条件获得DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测,发现适当的水浴时间为90m in到120m in;改变离心转速对DNA质量的影响不明显。     

三种豆科植物总DNA提取方法的比较

以菜豆、蚕豆、黄豆的幼嫩叶片及其种子为材料,采用高盐低pH值法、SDS法和改良CTAB法3种不同的DNA提取方法提取其总DNA,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。分析比较各种方法的提取效率,从中找出最适的DNA提取方法。结果表明,对于大豆、蚕豆、黄豆的幼嫩叶片,无论从得率上还是质量上看,高盐低pH值法均明显优于其它两种方法。     

高粱总DNA不同提取方法的比较

[目的]探索高粱总DNA的快速、高效提取方法,为将其导入水稻提供大量、高质量的DNA。[方法]以高粱幼叶为材料,分别采用SDS法、CTAB法、尿素法和NaOH法提取高粱总DNA,并对不同方法提取DNA的纯度、浓度和产量进行检测。[结果]尿素法提取DNA纯度和质量最好,SDS法和CTAB法次之,NaOH法最差。采用尿素法、SDS法、CTAB法和NaOH法分别可从1g高粱样品中提取到约292.00、21.75、152.25和243.75μg的DNA。4种方法提取的高粱总DNA的琼脂糖凝胶电泳结果表明NaOH法不能有效提取高粱总DNA,其他3种方法在提取高粱总DNA时能较好地保证其完整性。高粱总DNA分子量约为50KB。[结论]尿素法提取DNA的纯度最好、产率最高,是一种理想的高粱总DNA提取方法。     

三种玉米DNA提取方法探究

采用改良CTAB法、改良SDS法、快速提取法分别以玉米种子、黄化苗叶片、正常生长期绿色叶片为材料提取细胞总DNA。结果表明用3种不同方法提取的DNA纯度符合分子生物学实验要求。不同部位的材料、不同的提取方法，DNA得率不同。玉米干种子优适用于在快速提取法中提取DNA；改良CTAB法、SDS法宜从玉米黄化苗叶片和正常绿色叶片中提取DNA。     

两种转基因大豆基因组DNA提取方法的比较

转基因大豆基因组DNA的提取是进行大豆油脂代谢研究的必要环节之一,所以提取质量好、数量多的基因组DNA是进行转基因研究最基础的一步.本研究采用CTAB法和SDS法分别从大豆幼嫩叶片中提取其基因组DNA,并用1％琼脂糖凝胶电泳进行观察比较,建立了快速、有效提取大豆叶片基因组DNA的方法.本研究发现,CTAB法分离的DNA...     

玉米基因组DNA不同提取方法及提取部位的比较研究

分别探讨CTAB法和SDS法对玉米不同部位基因组DNA的提取效果。综合比较了2种方法提取的DNA浓度、纯度及完整性,结果表明SDS法是比较适合玉米基因组DNA提取的方法;同时比较了以玉米叶片、幼根和成熟胚为材料提取的DNA质量,发现以新鲜叶片为材料提取的DNA浓度和纯度较高,更适合用于玉米基因组DNA的提取。     

高盐低pH值法提取大豆不同组织DNA的效果

以大豆品种吉农18和吉林47的叶片、种子和鼓粒期鲜豆荚为材料,利用优化的高盐低pH值法提取大豆基因组DNA,同时采用改良的SDS法和CTAB法进行提取,并对DNA的纯度、浓度及提取质量进行比较分析。结果表明,在以大豆种子和鼓粒期鲜豆荚为材料时,高盐低pH值法提取基因组DNA的效果最佳,其纯度及浓度均高于改良的SDS法和CTAB法,且该方法具有成本低、步骤简单、时间短、不使用或少用有毒试剂等优点,是一种高效、快速、经济的大豆基因组DNA提取方法。     

水稻纹枯菌总 DNA 提取方法的比较

DNA的浓度,尤其是DNA的纯度严重影响后续基因组酶切等结果。为寻找一种高质量的水稻纹枯菌总DNA的提取方法,采用CTAB法、CTAB改良法、SDS法、蜗牛酶法、蛋白酶K法5种方法分别提取水稻纹枯菌总DNA。通过紫外吸光度测定DNA的纯度和浓度、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增、限制性内切酶酶切反应及Southern杂交评价DNA的质量,最终得出蛋白酶K法是获取高质量水稻纹枯菌基因组DNA的最佳方法。     

改良一步法提取植物RNA·DNA和蛋白质的研究

[目的]利用改良的一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质。[方法]采用CTAB试剂对Biozol抽提法进行改良,用一步法分别对玉米（Zea mays L.）、大豆（Glycine max L.）、苜蓿（Medicago sativa L.）和黄瓜（Cucumis sativus L.）4种作物根的RNA、DNA和蛋白质进行共提取,并对其HO-1和CDPK1基因及HO-1蛋白质进行鉴定。[结果]经紫外分光光度计测定和琼脂糖凝胶电泳分析证明获得的RNA和DNA样品纯度较高;HO-1和CDPK1基因的RT-PCR结果呈阳性;所提取的蛋白质也可用于Western blot分析;整个提取过程只需3h。[结论]该方法实用性较强,具有广泛的应用价值。     

5种主要农作物DNA快速提取方法研究

以玉米、小麦、大豆、高梁,水稻的种子和幼苗的4种处理组织为材料,利用碱煮法对DNA提取程序进行了研究,建立了一种简单、快速的DNA提取程序。该程序提取的DNA可用SSR引物进行扩增,扩增产物质量良好,并且能满足这5种常见作物的分子标记研究。     

改良一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质的研究

[目的]利用改良的一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质。[方法]采用CTAB试剂对Biozol抽提法进行改良,用一步法分别对玉米（Zea maysL.）、大豆（Glycine maxL.）、苜蓿（Medicago sativaL.）和黄瓜（Cucumis sativusL.）4种作物根的RNA、DNA和蛋白质进行共提取,并对其HO-1和CDPK1基因及HO-1蛋白进行鉴定。[结果]经紫外分光光度计测定和琼脂糖凝胶电泳分析证明获得的RNA和DNA样品纯度较高;HO-1基因和CDPK1基因的RT-PCR结果呈阳性;所提取的蛋白质也可用于Western blot分析;整个提取过程只需3h。[结论]该方法实用性较强,具有广泛的应用价值。     

南美蟛蜞菊根系分泌物中2种化学物质的化感潜力

采用水培法收集南美蟛蜞菊(Wedelia trilobata)根系分泌物,GC-MS分析鉴定得出其根系分泌物中存在邻苯二甲酸二异丁酯、硬脂酸甲酯、棕榈酸甲酯和邻苯二甲酸二异辛酯。采用不同质量浓度硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯对玉米、黄豆、黄瓜、水稻4种农作物种子进行处理,以探究硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯对4种农作物种子萌发和幼苗生长的影响,进而分析这2种物质的化感潜力。结果表明,质量浓度为0~2 000mg/L时,这2种物质均呈现出不同程度的化感作用,均可在一定程度上抑制玉米、黄豆、黄瓜、水稻的发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数。其中,硬脂酸甲酯对黄豆的胚根、胚芽的生长无显著的影响,但对玉米、黄瓜、水稻的胚根、胚芽的生长均有显著的抑制作用;棕榈酸甲酯对这4种作物胚根、胚芽的生长均有显著的抑制作用。     

适于SSR-PCR的农作物基因组总DNA高通量提取方法的建立

[目的]建立一种新的、通用、快速的农作物基因组总DNA提取方法,为应用分子标记技术研究遗传多样性及变异提供方便.[方法]分别从甘蔗、水稻、玉米、花生和大豆5种作物中提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA质量进行检测,然后每种作物分别选取两对SSR引物进行PCR扩增,用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增结果.[结果]采用该提取方法,不同作物产生的纯DNA在100.0~160.0 g/g,提取DNA的A260/A280比率在1.80~1.95.此外,电泳凝胶未出现可见的RNA污染,每个作物基因组DNA单一条带非常清晰,DNA结构完整,质量较高,适用于分子标记的研究.应用SSR分子标记进行PCR扩增,重复性、稳定性好,经琼脂糖凝胶电泳检测,条带清晰且分辨率较高.[结论]建立的DNA提取方法为直接将叶片剪碎后装入EP管中,加入提取缓冲液进行DNA提取,省去了用液氮研磨的过程.与传统的DNA分离方法相比,新建立的DNA提取方法具有高通量、简单、快速、经济效益高等优点.     

桫椤科植物DNA提取方法研究

[目的]探讨桫椤科植物DNA提取的最优方法。[方法]采用经过改良的SDS法和CTAB法对3种桫椤科植物进行基因组DNA提取,用紫外分光光度计测定其在波长260和280nm处的吸光值,并根据A260nm/A280nm的比值分析其DNA的纯度。将提取的基因组DNA进行叶绿体trnL-trnF非编码区序列扩增和ISSR分析。[结果]改进的CTAB法所提出的DNA较纯净,所获得DNA样品的A260nm/A280nm比值在1.750～2.050范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示条带清晰。[结论]改良的CTAB法更适合桫椤科植物DNA的提取。     

普遍适用于农作物基因组DNA的提取方法及提取值得注意的几个问题

介绍了一种普遍适用于水稻、玉米、马铃薯、油菜、小麦等农作物材料基因组DNA的提取方法,并就在提取过程中遇到的问题,如RNA去除不干净,蛋白质或酚残留、DNA色素较深以及DNA机械剪切严重等,提出了相应的解决办法.     

介导玉米DNA的水稻高秆变异株AFLP分析

用AFLP分子标记技术,对花粉管介导玉米总DNA获得的2个高秆水稻变异植株C(HN28)和D(HN31)进行分析,揭示水稻变异植株和亲本间在DNA水平的差异,为进一步研究变异机制提供数据。首先对64对AFLP选扩引物进行筛选,优选出11对选扩引物,它们均能够在2个变异植株中扩增出较多清晰的DNA差异带。对变异植株和对照中的DNA图谱进行分析,结果显示,变异植株C、D、受体水稻B与阳性对照玉米A之间的DNA图谱相似率分别为38.30%、38.58%和32.99%,水稻变异植株C、D和受体水稻B的DNA图谱相似率分别为90.04%和85.84%,说明变异植株与受体水稻基因组DNA存在显著差异,变异植株与阳性对照玉米基因组DNA相似率明显高于受体水稻。变异植株C检测到12条与对照玉米一致的目的带,变异植株D检测到11条与对照玉米一致的目的带。说明变异植株C、D基因组中可能存在有玉米DNA片段,变异性状的差异可能是介导玉米DNA引起。