亚硒酸钠对人早幼粒白血病细胞（HL—60）的影响

以人早幼粒白血病细胞为实验对象，研究了亚硒酸钠对细胞的影响。结果发现：５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠可以抑制ＨＬ－６０细胞生长，但１１．６μｍｏｌ／Ｌ以上浓度时对细胞的毒性加重。     

亚硒酸钠对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的影响

目的：观察亚硒酸钠对人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）的生长和分化的影响,探讨微量元素硒的抗癌机制。方法：以人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）为实验对象,设立对照、２．９、５．８、８．７、１１．６、１７．３、２３．１、２８．９μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠８个实验组,分别在加药处理后１～５ｄ,每日收获细胞,利用台盼蓝排除法确定活细胞数并进行统计学处理,以观察加药后对ＨＬ－６０细胞生长的影响;收获的细胞做细胞涂片,用Ｗｒｉｇｈｔ－Ｇｉｅｍｓａ染色液染色,观察硒对细胞形态分化的作用。与此同时,利用硝基四唑蓝（ＮＢＴ）还原实验,观察亚硒酸钠对ＨＬ－６０细胞功能分化的影响。结果：亚硒酸钠处理细胞后１～２ｄ,除２８．９μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠外,所有浓度的亚硒酸钠对ＨＬ－６０细胞生长未见影响。在加药３ｄ后,２３．１μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠可抑制细胞生长。处理４ｄ后,除２．９μｍｏｌ／Ｌ浓度外所有浓度亚硒酸钠组均表现出对ＨＬ－６０细胞生长的抑制。在处理５ｄ后细胞受抑制更加明显,但高浓度的亚硒酸钠对ＨＬ－６０细胞有较大的细胞毒作用。５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠对ＨＬ－６０细胞主要是抑制生长作用,而非细胞毒性作用。在用各种浓度的亚硒酸钠处理的细胞     

亚硒酸钠和维甲酸联合对HL-60细胞生长、分化的影响

目的：观察亚硒酸钠和维甲酸联合作用对ＨＬ－６０细胞生长、分化的影响,探讨两者的联合效应和作用机制。方法：以人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）为实验对象,设立对照、５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠、０．０１μｍｏｌ／Ｌ、０．１μｍｏｌ／Ｌ和１μｍｏｌ／Ｌ维甲酸（ＲＡ）以及５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠和０．１μｍｏｌ／ＬＲＡ两者联合６个实验组,分别在加药处理后１～５ｄ,每日收获细胞,利用台盼蓝排除法确定活细胞数并进行统计学处理,以观察加药后对ＨＬ－６０细胞生长的影响;收获的细胞做细胞涂片,用Ｗｒｉｇｈｔ－Ｇｉｅｍｓａ染色液染色,观察硒和ＲＡ对细胞形态分化的作用。与此同时,利用硝基四唑蓝（ＮＢＴ）还原实验,观察药物对ＨＬ－６０细胞功能分化的影响。结果：５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠和０．１μｍｏｌ／ＬＲＡ联合可显著抑制ＨＬ－６０细胞生长,且对细胞的毒性并无增加,强于两者的单独作用。两者联合可明显诱导该细胞向粒系细胞分化,处理５ｄ后有７２％的细胞分化成熟,联合对细胞的分化作用与１μｍｏｌ／ＬＲＡ（１０倍）的效果基本相同。而单用０．１μｍｏｌ／Ｌ维甲酸只有３９％的细胞分化成熟。ＮＢＴ还原实验表现出类似结果。文中讨论了硒与ＲＡ联合作     

亚硒酸钠和维甲酸联合对HL-60细胞DNA与蛋白质合成和细胞周期的影响

目的：观察亚硒酸钠和维甲酸联合作用对ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ与蛋白质合成和细胞周期的影响,探讨两者的联合效应和作用机制。方法：以人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）为实验对象,设立对照、５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠和０．１μｍｏｌ／Ｌ维甲酸（ＲＡ）以及两者联合四个实验组,分别在加药处理后１～４ｄ收获细胞。利用３Ｈ－脱氧胸苷（３Ｈ－ＴｄＲ）和３Ｈ－亮氨酸（３Ｈ－Ｌｅｕ）参入实验以及流式细胞仪式进行分析。结果：５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠和０．１μｍｏｌ／ＬＲＡ联合可显著抑制ＨＬ－６０细胞的ＤＮＡ和蛋白质等生物大分子的合成,联合作用强于两者单独作用。流式细胞仪分析的细胞周期结果表明：单独硒组的ＨＬ－６０细胞在Ｇ２＋Ｍ期和Ｓ期有一定的阻滞;维甲酸的作用主要是阻滞Ｇ１期向Ｓ期移行,使Ｇ１期细胞蓄积,但该剂量单独作用较小;联合组主要表现在Ｇ１阻滞作用要大于单独ＲＡ组的作用,而对细胞的毒性作用并未增加。结论：生物大分子的合成和细胞周期分析方面的实验初步阐明了亚硒酸钠和维甲酸抑制ＨＬ－６０细胞增殖和诱导分化以及联合效应强于各自的单独应用机制。硒与维甲酸的联合具有潜在的临床应用价值。     

三种天然抗氧化剂对早幼粒白血病细胞(HL-60)的生长抑制作用研究

目的：天然抗氧化剂的抗肿瘤作用已逐步被认识。用茶多酚、丹酚酸Ｂ和知母宁三种天然抗氧化剂进行ＭＴＴ实验,观察和比较它们对ＨＬ－６０细胞生长和增殖的影响。试图为系统研究天然抗氧化剂的抗癌作用、自由基与肿瘤的关系提供一些实验依据。方法：取对数生长的ＨＬ－６０细胞,以１×１０８／Ｌ细胞浓度接种于５ｍＬ培养瓶中,同时加药物培养。３种药物均设５个剂量组（终浓度５～８０ｍｇ／Ｌ）及空白对照组（乙醇）和阳性对照组（维甲酸）。药物处理４ｄ后取细胞进行ＭＴＴ实验（５个平行孔）,计算细胞相对存活率。实验结果经方差分析、各实验组与对照组均值比较,并计算ＩＣ５０及９５％可信区间。结果：实验结果显示,在体外,茶多酚、丹酚酸Ｂ和知母宁在５～８０ｍｇ／Ｌ浓度范围内对ＨＬ－６０细胞存活和增殖均有一定的抑制作用,且呈明显的剂量依赖关系。茶多酚、丹酚酸Ｂ和知母宁的ＩＣ５０及９５％可信区间分别为１７．７ｍｇ／Ｌ、１２．７～２４．８ｍｇ／Ｌ,２２．５ｍｇ／Ｌ、１５．５～３２．６ｍｇ／Ｌ和１７．１ｍｇ／Ｌ、１１．９～２４．５ｍｇ／Ｌ。结论：茶多酚、丹酚酸Ｂ和知母宁三种天然抗氧化剂对ＨＬ－６０细胞生长的抑制作用,可能与其抗氧化性质有关。虽然,它们的ＩＣ     

速冻中低温保护剂浓度对小鼠胚胎发育的影响

用快速冷冻方法，冷冻小鼠的２－细胞胚、４－细胞胚、８－细胞胚、桑椹胚和囊胚，低温保护液分别含有０．５，１．５，２．５，４ｍｏｌ／Ｌ丙二醇，含１０％的犊牛血清和０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖，对于８－细胞以前的小鼠胚胎，快速冷冻保存时丙二醇的浓度在２．５ｍｏｌ／Ｌ和４ｍｏｌ／Ｌ时效果较好，随着小鼠早期胚胎（囊胚以前）的发育，抗低温冷冻的能力加强。     

速冻中低温保护剂浓度对小鼠胚胎发育的影响

用快速冷冻方法，冷冻小鼠的２－细胞胚、４－细胞胚、８－细胞胚、桑椹胚和囊胚，低温保护液分别含有０．５，１．５，２．５，４ｍｏｌ／Ｌ丙二醇，含１０％的犊牛血清和０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖。对于８－细胞以前的小鼠胚胎，快速冷冻保存时丙二醇的浓度在２．５ｍｏｌ／Ｌ和４ｍｏｌ／Ｌ时效率较好。随着小鼠早期胚胎（囊胚以前）的发育，抗低温冷的能力加强。     

硒对玉米叶片衰老的调节作用

０．１－１．０μｍｏｌ／ＬＮａ２ＳｅＯ３处理不同程度地延缓了下米连体叶片的衰老，其中１μｍｏｌ／Ｌ效果最好。３０℃黑暗条件下，１μｍｏｌ／ＬＮａ２ＳｅＯ３处理，玉米离体叶的Ｈ２Ｏ２和丙二醛含量低于对照，变化平稳；过氧化氢酶活性和比活力，处理比对照变化平稳，可见以适当浓度硒处理玉米叶片可以降低其Ｈ２Ｏ２水平，减轻膜脂过氧化，延缓衰老。     

镉磷在小麦细胞内的积累和分布特性及其交互作用

采用小麦悬浮细胞系研究镉、磷在细胞中的积累和分布特性及交互作用。共设置两组试验：一组设４个镉水平（０,５０,１００,１８０μｍｏｌ／Ｌ）和１个磷水平（２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）,主要研究镉对磷在细胞内积累和分布的影响;另一组设３个镉水平（０,５０,１８０μｍｏｌ／Ｌ）和２个磷水平（０．５,２．５ｍｍｏｌ／Ｌ）,以研究镉、磷的交互作用。细胞在含有不同镉、磷浓度的ＭＳ培养基中处理７ｄ。结果表明,介质中镉抑制     

土施硒肥与茶叶含硒量和产量的关系

在低硒茶园进行土施亚硒酸钠试验，结果表明，在土施亚硒酸钠３．３３、６．６６和１３．３２μｇ／ｋｇ的情况下，茶树含硒量随施硒剂量的提高而增加，但有一定的滞后现象。适量的硒对茶树生长有促进作用，与对照相比，土施硒肥可增产６．８％－１８．４％。     

大鼠骨髓干细胞的分离、培养和诱导生成内皮祖细胞的研究

目的探讨大鼠骨髓干细胞的体外分离、培养和诱导生成内皮祖细胞的的可行性,并检测其表型和功能。方法取大鼠长骨骨髓细胞,第3代细胞传代后加用终质量浓度10μg/L的血管内皮生长因子（VEGF）的细胞因子,培养3 d后行内皮细胞特异性成分鉴定。结果（1）免疫组化染色鉴定：P3代CD133呈中度阳性表现,CD34呈弱阳性表现;经VEGF诱导后表达明显增强。（2）流式细胞仪细胞计数鉴定：P3代CD133、CD34阳性细胞率分别为97.3%、55.5%;经VEGF诱导后CD133、CD34阳性细胞率分别为91.4%、78.6%。（3）P3代VEGF诱导后乙酰化低密度脂蛋白（ac-LDL）、荆豆凝集素（UEA）双染鉴定：经VEGF诱导的P3代细胞ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性率（70.2±5.1）%,未经VEGF诱导后的P3代细胞ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性率（20.4±3.8）%。（4）RealTime-PCR检测第3代VEGF cell和三代cell的内皮细胞特异性成分表达：P3 VEGF cell血管内皮生长因子受体2（VEGF-R2）浓度是P3cell的2.22倍。结论用贴壁筛选法和VEGF细胞因子培养大鼠骨髓干细胞可以获得较高纯度的内皮祖细胞（EPCs）,该细胞具有内皮祖细胞的特性,可用于进一步向内皮细胞分化的研究与应用。     

山羊卵巢间质细胞分离方法的比较

【目的】比较体外条件下不同分离山羊卵巢间质细胞(ovarian interstitial cells)方法的效果。【方法】采用热消化法、冷消化法、单一酶消化法(热消化法,用Ⅰ型、Ⅳ型、Ⅺ型胶原酶和2.5g/L胰蛋白酶+0.2g/L EDTA)及2步酶消化法分离山羊卵巢间质细胞。【结果】热消化法得到的细胞数量较冷消化法多,且试验所用时间缩短,但细胞活率降低。单一酶热消化法中,以1g/LⅪ型胶原酶效果最佳,适合体外培养。2步酶消化法以先胰蛋白酶后Ⅺ型胶原酶组的效果最佳,卵巢组织消化时间及体外培养首次换液时间均较短,适合于体外培养。【结论】采用1g/LⅪ型胶原酶单一酶热消化法或先胰蛋白酶后Ⅺ型胶原酶2步酶消化法,分离山羊卵巢间质细胞的效果均较好,可作为试验用卵巢间质细胞的理想分离方法。     

氨对悬浮培养幼仓鼠肾细胞(BHK-21)生长代谢的影响

【目的】研究在幼仓鼠肾细胞(BHK-21)悬浮培养过程中,不同浓度氨对其生长代谢的影响。【方法】用添加0,1.8,2.5,5.5,8.0和15.0 mmol/L氨的培养基培养BHK-21细胞,每隔12 h取样1次,用细胞计数仪进行细胞计数,测定细胞活力,采用AO/EB双染色法和Annexin V-FITC/PI流式细胞仪2种方法检测细胞的凋亡情况,同时测定细胞培养过程中葡萄糖、氨和乳酸浓度的变化。【结果】在BHK-21细胞连续培养过程中,当氨的添加浓度低于1.8 mmol/L时,其对细胞的生长几乎不产生抑制作用,细胞活性、细胞总数与对照组差异不显著,未出现细胞聚集成团现象;当氨添加浓度达到15.0 mmol/L时,BHK-21细胞直接进入死亡期;当氨的添加浓度为2.5~8.0 mmol/L时,氨对细胞生长的抑制作用由弱变强,这种抑制作用在细胞培养至24 h开始出现。另外,随着氨添加浓度的增加,葡萄糖的消耗量减少,细胞代谢产生的乳酸和氨降低。【结论】氨对悬浮培养的BHK-21细胞的生长和代谢有显著影响。     

一种有效分离及在体外扩增成年小鼠精原干细胞的方法

尝试建立一种简便有效的成年小鼠精原干细胞分离培养及扩增的方法。从单只成年小鼠的睾丸中经过两步酶消化法分离精原干细胞,并在去除间质细胞、纯化后的支持细胞饲养层上培养与扩增,获得稳定增殖的精原干细胞系。此方法可显著提高建系成功率,保证细胞系的单一基因型,显著降低体外培养精原干细胞的成本。为成体基因来源的转基因动物的制作和疾病模型的建立提供技术支持。     

山羊胚胎心肌细胞分化发育的超微结构研究

利用透射电镜观察了山羊胚胎心肌细胞分化发育过程中超微结构的变化。结果表明 :2 6日龄的山羊胚胎心肌细胞内肌节初步形成。随着胚胎发育 ,心肌细胞的肌节逐步完善 ,心肌细胞内的线粒体数量逐渐增多 ,排列规则 ,线粒体嵴逐渐变密 ,心肌细胞之间的连接也随着胚胎的生长发育逐渐形成和加强 ;2 6日龄山羊胚胎心肌内可见粗面内质网 ;34日龄的山羊胚胎心肌细胞胞浆内可见肌浆网、肌膜下池、横小管和二联管已形成 ;山羊胚胎心肌细胞内糖原颗粒丰富 ,随着胚胎日龄的增长 ,胞质内散布的糖原颗粒呈减少的趋势 ,而肌丝之间的糖原颗粒呈增加趋势 ;2 6日龄的山羊胚胎心房肌内出现少量特殊颗粒     

免疫小鼠脾脏中抗原提呈细胞的快速分离

应用胶原酶消化脾脏、 Ｂ Ｓ Ａ 梯度离心富集低浮密度细胞和 Ｆ Ａ Ｃ Ｓ分选细胞法,自小鼠脾脏中分离出高纯度树突细胞、吞噬细胞和 Ｂ淋巴细胞。分离的 ３ 种细胞样品中分别含 ９７％ 树突细胞、９６％ 吞噬细胞和 ９９％ Ｂ淋巴细胞。而纯化前,树突细胞和吞噬细胞在低浮密度细胞中仅分别占 ６５％ 和 ３５％ , Ｂ 淋巴细胞占脾细胞的 ４２％ 左右。该程序简便、快速、准确,在一个工作日内可制备大量细胞, 并适用于其他淋巴组织中抗原提呈细胞的纯化。     

南方鲶SME－Ⅰ细胞系的建立及其生物学特性的研究

用半消化法和组织块法接种南方鲶晚期胚，经４０多代连续培养，建立了ＳＭＥ－Ⅰ鲶鱼细胞系。该细胞系为贴附性上皮样细胞。细胞内微丝束丰富，平行排列伸到伪足，但质膜下不很密集。细胞最适在含１５％～２０％小平血清的１６４０培养基中生长，适温２８～２９℃，ｐＨ６．５～７．２，群体倍增时间为５８．６ｈ，已增殖到１０￣８个的水平。细胞染色体数为正常二倍体２ｎ＝５８，但有不少异倍化细胞。该细胞系已可用于鱼类生物工程研究和进入细胞资源库保存。     

鱼类干细胞育种技术回顾与展望

鱼类是优质动物蛋白的重要来源,其中养殖鱼类占重要地位,而通过选择育种、杂交育种等传统方法和分子辅助育种、基因编辑等新技术培育优良品种是鱼类养殖业健康持续发展的关键.近年来,鱼类干细胞技术特别是细胞移植和诱导技术快速发展,为鱼类优良品种培育提供了新的技术途径.介绍了鱼类干细胞育种的现状及应用,总结了鱼类干细胞育种技术面临...     

仔猪肠黏膜上皮细胞体外培养及其对小檗碱适应性的研究

为了体外分离培养和鉴定仔猪肠粘膜上皮细胞,探讨小檗碱对体外培养的仔猪肠粘膜上皮细胞的安全剂量。本试验取刚出生未吃初乳的仔猪小肠的回肠段,用胰蛋白酶和胶原酶Ⅳ进行消化处理,获得原代仔猪肠粘膜上皮细胞,用免疫组化法对培养的仔猪肠粘膜细胞进行鉴定,用MTT检测法测定硫酸小檗碱对仔猪肠粘膜上皮细胞的安全浓度。结果表明:免疫组化法分离培养的细胞膜呈棕黄色,为粘膜上皮细胞。硫酸小檗碱对体外培养的仔猪肠粘膜上皮细胞的安全浓度为20μmol/L。     

家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养及鉴定

为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分析细胞纯度。结果表明,家兔子宫内膜上皮细胞培养24 h后大部分贴壁,培养3 d左右形成单层细胞集落,呈角蛋白阳性,细胞圆形或椭圆形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达96%以上;子宫内膜基质细胞培养0.5 h后即有贴壁,培养2 d后呈单层细胞集落状生长,呈波形蛋白阳性,细胞多边形或梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达95%以上;平滑肌细胞培养24 h后大部分贴壁,6~7 d融合成片,呈α-平滑肌肌动蛋白阳性,细胞大都长梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达98%以上。说明该方法能够成功分离并得到高产量、高纯度、高增殖能力的子宫内膜细胞及平滑肌细胞。