牛卵母细胞的成熟与激活

本文综述了牛卵母细胞生长成熟过程和卵母细胞激活的形态学变化,并从分子调控机制上进行探讨。卵母细胞成熟经历了四个阶段：（１）减数分裂启动及在核网期的阻滞;（２）卵母细胞生长期;（３）减数分裂的恢复;（４）减数分裂在ＭⅡ停滞。一些细胞因子和小分子物质参与并调控这一过程的完成,卵母细胞激活的形态学标志是释放第二极体并形成原核,其实质是形成减数分裂向有丝分裂的转变。     

生殖激素的生理功能

1促黄体素 促黄体素（LH）和促卵泡素（FSH）协同作用可促进卵巢血液加速，卵泡最后成熟并分泌雌激素。发情后期，在FSH作用的基础上LH突发性分泌引起成熟卵泡排卵，黄体形成。这种生理机能的出现，孕激素的作用是很重要的。LH通过卵泡壁细胞的环磷酸腺苷（cAMP）促进了孕激素的合成，孕激素则能刺激卵泡壁细胞的蛋白分解酶、胶原水解酶的合成，由于这种酶的出现，分解了卵泡壁细胞而引起排卵。因此，有的动物在排卵前血液中孕激素的含量也相应地升高，排卵后小剂量的LH有利于黄体的维持。     

TACE激酶在猪排卵过程中的作用机制

促黄体激素(LH)诱导猪卵泡排卵过程包括卵泡壁的破裂、颗粒细胞黄体化、卵丘细胞扩展和卵母细胞减数分裂成熟。LH受体主要在排卵前卵泡的颗粒细胞中表达,排卵刺激后表达水平明显降低。颗粒细胞和卵丘细胞表达的EGF样因子可以激活EGFR-MAPK3/1在这2种细胞中的通路。EGF样因子是由信号序列、跨膜区域和EGF区域组成,并且由特异性酶刺激释放EGF区域与EGFR互作诱导排卵过程。TACE/ADAM17是一种EGF样因子的蛋白水解酶,在FSH/LH刺激的颗粒细胞和卵丘细胞中表达并激活EGFR-MAPK3/1通路。应用特异性抑制剂或siRNA抑制技术而降低TACE/ADAM17的表达活性,则会抑制颗粒细胞黄体化、卵丘细胞扩展以及卵母细胞的成熟过程。因此,TACE/ADAM17是诱导猪排卵过程的主效基因。     

甘氨酸对水貂GV期卵母细胞冷冻保存效率的影响

试验旨在探究玻璃化冷冻及培养过程中添加甘氨酸（glycine，Gly）对水貂GV期卵母细胞冷冻解冻后存活率、核发育、线粒体和皮质颗粒分布的影响。试验分为3组：对照组（没有进行冷冻处理）、冷冻组和Gly添加处理组（1 mmol/L Gly）。对玻璃化冷冻解冻后的水貂GV期卵母细胞分别进行平衡恢复3 h和体外成熟培养，采用免疫荧光标记法检测各组GV期卵母细胞线粒体分布的差异及MⅡ期皮质颗粒分布的变化。结果显示，Gly添加处理组卵母细胞在解冻后3 h的存活率与冷冻组相比差异不显著（P>0.05），但显著低于对照组（P<0.05）；Gly添加处理组卵母细胞的减数分裂恢复率显著高于冷冻组（P<0.05），但与对照组相比差异不显著（P>0.05）。免疫荧光结果显示，Gly添加处理组的GV期卵母细胞线粒体正常分布率显著高于冷冻组（P<0.05），但Gly添加处理组和冷冻组的GV期卵母细胞线粒体正常分布率均显著低于对照组（P<0.05）。皮质颗粒分布结果显示，水貂GV期卵母细胞在冷冻后体外成熟培养至MⅡ期时，Gly添加处理组皮质颗粒的正常皮质区分布比例显著高于冷冻组（P<0.05），但Gly添加处理组与冷冻组的正常皮质区分布比例均显著低于对照组（P<0.05）。结果表明，添加Gly可以提高冻融后水貂卵母细胞的减数分裂恢复率，降低冷冻对其线粒体及皮质颗粒的损失。     

哺乳动物卵母细胞非整倍体产生机制的研究进展

雌性生殖细胞进行减数分裂时易发生染色体分离错误而产生非整倍体卵母细胞,其受精后会产生非整倍体胚胎,导致出生缺陷或胚胎致死,是影响哺乳动物繁殖的重要因素。卵母细胞在第一次减数分裂前期发生同源染色体联会,此时DNA双链断裂引发重组。重组时缺乏交叉、重组事件数量的减少及交叉靠近端粒或着丝粒导致染色体发生同向分离或不分离,从而产生非整倍体卵母细胞。减数分裂期间,当染色体的端粒共向于同一极或没有完全附着在纺锤体微管上时,纺锤体组装检查点（spindle assembly checkpoint,SAC）被激活,E3泛素连接酶APC/Cyclome （APC/C）沉默,保护分离酶抑制蛋白（securin）和细胞周期蛋白B （cyclin B）不被降解,从而抑制分离酶和染色体的分离。直到所有染色体与纺锤体实现稳定的双极定向并正确排列到赤道板上,SAC关闭,染色体正确分离。卵母细胞中SAC蛋白缺失,导致SAC不能有效地监测端粒在纺锤体上的正确附着,发生染色体分离错误,从而产生非整倍体卵母细胞。因此,通过现代分子技术手段解析非整倍体卵母细胞所涉及的机制是保护哺乳动物生育的重要目标。作者主要介绍了卵母细胞减数分裂的特点,详细阐述了卵母细胞非整倍体发生的染色体分离错误的分子机制,以期为开发卵母细胞非整倍体的治疗手段提供参考。     

不同促性腺激素添加方式对猪卵母细胞的影响

在卵母细胞体外成熟培养过程中,培养基中添加激素与否及其激素添加的先后顺序是影响猪卵母细胞核成熟和质成熟的一个重要因素。本试验将猪卵母细胞分别在FSH→不含激素、FSH→LH、FSH＋LH→不含激素中培养48h（培养第20～22h后换液）,并于成熟培养的第24h（未换液）、48h将卵母细胞进行荧光染色,观察其生发泡内染色质构型及卵母细胞核成熟情况。实验表明：1）在IVM的前24h,添加FSH＋LH组的GV Ⅳ期卵母细胞比例低于只添加FSH组,但差异不显著（8．99％vs17．19％,P〉0．05）;2）在FSH存在的情况下,IVM的前期和后期添加LH能促进卵母细胞发生GVBD;3）FSH＋LH培养24h后转入不含激素培养基组,卵母细胞的核成熟比率显著高于添加FSH组和先添加FSH培养24h后转入添加LH组（64．36％vs20．45％、36．62％、41．98％,P〈0.05）。     

蛋白激酶C在哺乳动物卵母细胞第1次减数分裂成熟过程中的调节作用

蛋白激酶C（PKC）是一个广泛分布在真核细胞中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族。它在卵母细胞的生发泡破裂（GVBD）、染色体凝集、MⅠ期纺锤体组装和第一极体排放等过程中起着重要的调节作用。PKC的活性变化调节着GVBD的发生，GVBD标志着第1次减数分裂的启动。PKC活性在卵母细胞成熟过程中逐渐升高，在第1次减数分裂中/后期转变时活性下降，使卵母细胞得以释放出第一极体，至此卵母细胞完成第1次减数分裂进入第2次减数分裂。作者就PKC在卵母细胞第1次减数分裂成熟过程中的作用综述如下。     

G蛋白偶联受体50在牦牛卵母细胞体外成熟过程中的表达与亚细胞定位研究

试验旨在研究G蛋白偶联受体50（G protein-coupled receptor 50,GPR50）在牦牛卵母细胞体外成熟过程中的表达与定位规律,为进一步解析卵母细胞成熟的分子机制及理解牦牛繁殖的特异性提供依据。通过牦牛卵母细胞体外成熟培养,利用免疫荧光染色监测不同时间点（0~24 h）纺锤丝形态和核相的变化,确定牦牛卵母细胞减数分裂4个时期,包括生发泡期（germinal vesicle,GV）、生发泡破裂期（germinal vesicle break down,GVBD）、第一次减数分裂中期（metaphase Ⅰ,MⅠ）与第二次减数分裂中期（metaphase Ⅱ,MⅡ）的时间点。在此基础上,通过实时荧光定量PCR检测GPR50基因在牦牛卵母细胞成熟过程中的动态表达量,免疫荧光染色检测GPR50蛋白在卵母细胞成熟过程中的的亚细胞动态定位情况。结果表明,牦牛卵母细胞体外成熟0 h时90%处于GV期,6 h时94%处于GVBD期,16 h时92%细胞处于MⅠ期,24 h时94%处于MⅡ期。实时荧光定量PCR结果表明,GPR50基因在牦牛卵母细胞GV期即有表达,并在GVBD、MⅠ、MⅡ期成熟过程中逐渐升高,在MⅡ期达到顶峰,且极显著高于GV与GVBD期（P<0.01）。GPR50蛋白在牦牛卵母细胞GV期时集中在膜上表达,并随着成熟进程的发展在细胞质和细胞膜均大量表达,在MⅡ期高亮度弥散表达。以上结果表明,GPR50基因参与牦牛卵母细胞减数分裂过程并发挥重要作用,为研究GPR50在牦牛卵母细胞成熟过程中的作用及机制提供了依据。     

罗同丘细胞对小鼠卵母细胞体外成熟及其后续发育的影响

观察了卵丘细胞共培养对小鼠生发泡期部分裸露（PNO）和裸卵（NO）成熟和发育能力的影响；分别用小鼠、大鼠、猪的卵丘细胞与小鼠PNO和NO进行了共培养。检测了小鼠PNO和NO的减数分裂能力、生发泡构型、受精和胚胎发育能力。结果，PNO、NO的减数分裂能力显著（P〈0．05）低于卵丘完整复合体（COCs）的减数分裂能力。COCs中SN型卵母细胞比率显著高于PNO和NO中SN型卵母细胞比率（P〈0．05），大部分PNO和NO的卵母细胞核型为NSN型。与对照组相比，与小鼠或大鼠卵丘细胞共培养的小鼠PNO和NO的减数分裂能力没有显著提高，但是与猪卵丘细胞共培养却可以提高小鼠PNO和NO的减数分裂能力。结果表明，猪卵丘细胞能促进小鼠卵母细胞的体外成熟，但并不影响小鼠卵母细胞的受精和胚胎发育。     

MPF和MAPK在卵母细胞成熟过程中的作用

在卵母细胞减数分裂成熟过程中,MAPK和MPF起着关键性的作用。这两种蛋白激酶的相互作用影响着整个动物界卵母细胞减数分裂成熟过程,包括促进生发泡破裂、抑制减数分裂过程中的DNA复制、调节染色体的分离、维持MII期阻滞、诱发第2次减数分裂恢复等。本文对卵母细胞减数分裂成熟过程中MPF和MAPK的作用和相互调节进行了综述。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活研究进展

孤雌激活是指处于第2次减数分裂中期卵母细胞不经过雄性配子的作用,而在某些理化因素的刺激下恢复并完成减数分裂,进行有丝分裂发育到胚胎的过程.卵母细胞的激活是以Ca2+为第二信使,成熟促进因子(MPF)、细胞分裂素活化蛋白激酶(MAPK)、细胞静止因子(CSF)等细胞因子综合作用的结果.卵母细胞激活是核移植的关键技术,也是研究哺乳动物受精机制及发育机理的有效方法.现介绍卵母细胞孤雌激活的机制以及卵母细胞孤雌生殖激活方法.     

哺乳动物的卵母细胞成熟机理

卵母细胞的成熟(包括细胞核成熟和细胞质成熟)是完成正常受精及早期胚胎发育所必须的,是指卵母细胞获得完成减数分裂、为受精及胚胎发育做好准备的能力。在哺乳动物,这一过程非常复杂,有许多问题至今仍没搞清。 一、卵母细胞减数分裂能力的恢复 在大多数哺乳动物,出生前后卵原细胞停止有丝分裂,进入减数分裂,并停滞于第一次减数分裂前期的双线期。性成熟以后,每一繁殖周期都有一批卵母细胞在迄今未知的某些信号的作用下,进入生长期,卵母细胞体积快速增加。接近生长期结束时,获得减数分裂的能力,但仍停滞于双线期。在许多动物,该期细胞核明显,称为生     

钙振荡在哺乳动物卵母细胞受精过程中的作用

哺乳动物的精子和卵母细胞由减数分裂产生，其遗传物质减半，功能高度特化。精卵结合后，染色体数恢复，获得发育的全能性，重启有丝分裂，开始个体的生长。受精时，精子引起卵母细胞内的钙离子（Ca²⁺）以一定的频率波动，称为钙振荡。Ca²⁺周期性的变化，驱动下游蛋白的活动，完成卵母细胞的激活。作者主要介绍了受精时钙振荡启动的机制，以及其持续时间、振幅、频率对哺乳动物卵母细胞正常受精的影响；同时，讨论了Ca²⁺在卵母细胞内外运输的通道和钙振荡发生和维持的机制；分析了钙振荡对卵母细胞的细胞周期恢复和母源mRNA翻译的调控作用和机制。目前，关于卵母细胞激活事件信号通路的研究已经取得了很大的进展，但每个单独事件所涉及的分子机制尚未完全确定。本综述探讨了哺乳动物受精时卵母细胞内钙信号研究的现状和未来研究的方向，为保障人类生殖健康和提高畜牧繁殖效率提供参考。     

cAMP调节剂对卵母细胞体外成熟效果的调节机制研究进展

卵母细胞体外成熟是家畜体外胚胎生产关键技术之一。卵母细胞的环磷酸腺苷(cAMP)水平能够通过调节核质同步成熟进程影响卵母细胞发育能力,因此,cAMP对卵母细胞体外成熟质量的影响受到广泛关注。本文针对常用的cAMP调节剂及其调节卵母细胞体外成熟的机制进行综述,以期为改善卵母细胞体外成熟效果提供依据。     

uPA对体外成熟牛卵母细胞生发泡破裂的影响

为了探明尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)对体外成熟牛卵母细胞核成熟的可能作用,试验根据uPA及其特异性抑制剂(amiloride)的有效浓度分成4组,即对照组、uPA(0.5 ng/mL)组、amiloride(1μg/mL)组及联合添加(uPA+amiloride)组,然后采用地衣红染色方法分别研究体外成熟培养6 h与12 h后uPA对牛卵母细胞生发泡破裂(GVBD)的影响,采用ELISA方法研究体外成熟培养6 h后uPA对牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)中cAMP水平变化的可能调节作用。结果表明:减数分裂不同时期(GV期、GVBD期及MⅠ~MⅡ期)卵母细胞染色质(体)形态呈现不同特征。卵母细胞在体外成熟培养6 h后各组细胞均处于GV~GVBD期,其中uPA组GVBD期卵母细胞率(12.72%)显著低于对照组(24.83%)与联合添加组(30.42%,P0.05);体外成熟培养12 h后,uPA组GVBD期卵母细胞率(54.81%)显著高于对照组(37.49%)与联合添加组(25.64%,P0.05),uPA组MⅠ~MⅡ期卵母细胞率(44.85%)显著低于对照组(62.51%)与联合添加组(74.36%,P0.05);体外成熟培养6 h后,uPA组cAMP水平显著高于对照组与联合添加组(P0.05)。说明uPA通过上调cAMP水平阻滞牛卵母细胞的减数分裂进程。     

Ca^＋＋与哺乳动物卵母细胞成熟调控机制的研究

哺乳动物卵母细胞的生长发育与减数分裂成熟的调控机制是十分复杂的,激素、生长因子等都参与其中的调控,这些调控往往又与Ca~(++)在卵母细胞减数分裂成熟中的调控作用密切相关。本文着重阐述Ca~(++)在卵母细胞减数分裂成熟中的调控作用。     

兴奋或抑制细胞内PKC或cAMP对不同脉冲频率GnRH刺激下GTH表达水平的影响

观察兴奋或抑制细胞内cAMP和PKC后,LH和FSH对不同脉冲频率GnRH刺激的应答情况,分析LH/FSH表达的受体后信号转导机制。结果表明,使用cAMP的兴奋剂或抑制剂使细胞cAMP含量升高或降低时,显著影响了LH的应答,但对FSH的应答影响不显著;使用PKC的兴奋剂或抑制剂使细胞PKC活性升高或降低时,既显著影响了LH的应答,也显著影响了FSH的应答。两者均随着PKC活性的升降而升降。     

β-神经生长因子在家兔诱导排卵中的研究进展

家兔是刺激性排卵动物,需要性交刺激释放促性腺激素释放激素（GnRH）,引发促黄体生成素（LH）增加,从而诱导成熟卵母细胞的排卵,但其排卵机制尚未完全明晰。在家兔的人工授精中,由于缺少性交的刺激,肌注或阴道内输入GnRH及其类似物被用来诱导排卵,然而这些化合物通常会对家兔繁殖产生不利影响,因此需要一种新的方法来取代激素刺激。β-神经生长因子（β-NGF）是新发现的在雌性生殖生理学中发挥作用的最有前途的物质之一,β-NGF及其受体广泛存在于家兔生殖系统中并具有重要的生理作用。同时β-NGF本身就存在于动物的精液中,且很有可能是兔的一种天然促排卵因子,使用β-NGF或许能够减少激素或其他药物的使用。作者简述了β-NGF促进家兔排卵作用及研究现状,主要从β-NGF及其受体在家兔生殖系统中的表达、β-NGF系统在诱导家兔排卵中的物种特异性,以及β-NGF诱导家兔排卵的作用机制等方面进行分析,旨在为研究家兔刺激排卵机理提供思路与理论基础,并促进β-NGF在家兔辅助生殖技术中的应用。     

微丝调控卵母细胞减数分裂成熟的分子机制研究进展

卵母细胞在与精子融合形成合子前会经历2轮减数分裂。与有丝分裂不同的是,2次减数分裂都是不对称的,最终会产生1个大体积的具有全能性单倍体卵母细胞和2个小体积的注定退化的极体。肌动蛋白丝作为卵母细胞中的细胞骨架,与分裂过程中的囊泡转运、细胞核定位、纺锤体迁移与锚定、极体排出和染色体分离等生物学事件存在重要联系。本文以哺乳动物为模型,总结了肌动蛋白在卵母细胞减数分裂成熟过程中的重要调节机制与信号通路,以期为进一步研究卵母细胞成熟过程的调控机制提供参考。     

利用激素诱导青年母猪发情及人工授精的受胎效果观察

孕马血清促性腺激素（血促性素）PMSG具有促卵泡素（FSH）和促黄体素（LH）的功能,主要是FSH功能,能促卵泡发育、成熟。人绒毛膜促性腺激素（绒促性素）hCG具有促黄体素（LH）和促卵泡素（FSH）的功能,主要是LH功能,能促卵泡成熟、排卵。二者协调可以使处于卵巢静止的青年母猪卵泡发育、成熟、排卵。