不同铜源对鸡嗉囊Ctr1、Ctr2基因和蛋白表达的影响

试验选择105只1日龄的SPF蛋鸡,随机分为7组,每组15只鸡。对照组饲喂低铜半纯化日粮;试验组为在基础日粮中分别添加铜8 mg/kg的Cu SO4、微米Cu O和纳米Cu O组及在基础日粮中分别添加铜160 mg/kg的Cu SO4、微米Cu O和纳米Cu O组。研究不同水平Cu SO4、微米Cu O和纳米Cu O对鸡嗉囊铜转运蛋白基因Ctr1、Ctr2 mRNA相对表达量及蛋白表达量的影响,探讨纳米Cu O在嗉囊的吸收和转运机制。结果表明:试验至15 d,日粮中添加铜160 mg/kg,Cu SO4组雏鸡嗉囊铜含量和Ctr1蛋白表达量显著高于对照组、微米Cu O和纳米Cu O组(P0.05)。试验至30 d,日粮中添加铜8 mg/kg,Cu SO4和纳米Cu O组雏鸡嗉囊铜含量和平均日增质量显著高于对照组和微米Cu O组(P0.05);Cu SO4组雏鸡嗉囊Ctr1 mRNA相对表达量显著高于对照组(P0.05),Cu SO4组雏鸡嗉囊Ctr1蛋白表达量显著高于对照组和微米Cu O组(P0.05),对照组和微米Cu O组显著高于纳米Cu O组(P0.05);日粮中添加铜160 mg/kg,对照组雏鸡嗉囊Ctr1蛋白表达量显著高于Cu SO4组,Cu SO4组显著高于微米Cu O组,微米Cu O组显著高于纳米Cu O组(P0.05)。日粮中添加铜8和160 mg/kg,各组雏鸡嗉囊Ctr2 mRNA相对表达量无显著差异(P0.05),纳米Cu O组雏鸡嗉囊Ctr2蛋白表达量显著高于对照组、Cu SO4和微米Cu O组(P0.05)。可以看出,日粮中添加Cu SO4和纳米Cu O显著提高雏鸡嗉囊铜含量和平均日增质量,微米Cu O没有明显变化。嗉囊Ctr1对Cu SO4的吸收转运发挥重要的作用,Ctr1与纳米Cu O的吸收转运关联不甚密切,纳米Cu O与Cu SO4的吸收转运方式有较大差异。日粮中添加纳米Cu O显著提高雏鸡嗉囊Ctr2蛋白表达,嗉囊Ctr2与Cu SO4吸收转运关系不明显。     

纳米氧化铜对雏鸡全血和肝脏铜含量及肝脏铜蓝蛋白mRNA表达的影响

选取1日龄SPF白莱航蛋用公雏63只,随机分为7组,1组受试鸡饲喂基础日粮;2～4组受试鸡分别饲喂以硫酸铜、氧化铜和纳米氧化铜的形式添加铜8mg/kg的饲料;5～7组受试鸡分别饲喂以硫酸铜、氧化铜和纳米氧化铜的形式添加铜175mg/kg的饲料。结果显示,日粮中添加铜8mg/kg或175mg/kg时,纳米氧化铜组受试鸡全血、肝脏铜含量显著高于氧化铜组、硫酸铜组和对照组(P<0.05);纳米氧化铜组受试鸡肝脏血浆铜蓝蛋白(CP)mRNA表达量显著高于硫酸铜组和氧化铜组(P<0.05)。试验至30d,日粮添加铜8mg/kg或175mg/kg时,纳米氧化铜组受试鸡血浆CP活性显著高于硫酸铜组和氧化铜组(P<0.05)。表明纳米氧化铜通过提高脏器组织铜沉积、上调铜酶或铜蛋白的基因表达来提高铜酶活性,从而发挥其生物学作用。     

不同剂量纳米氧化铜对肉鸡免疫功能的影响

将180只1日龄健康AA肉仔鸡随机分为6组,每组设3个重复,第1、2、4、6组分别以硫酸铜、氧化铜、纳米氧化铜、纳米铜的形式在基础日粮中添加铜8mg/kg,3组和5组以纳米氧化铜形式在基础日粮中分别添加铜4mg/kg和16mg/kg,研究不同剂量纳米氧化铜对肉鸡免疫功能的影响.结果表明,与硫酸铜、氧化铜组相比,在饲料中以纳米氧化铜形式添加铜8mg/kg和16mg/kg,显著提高肉鸡免疫器官指数、新城疫抗体效价、淋巴细胞转化率和白细胞介素-2(IL-2)活性,以纳米氧化铜形式添加铜4mg/kg未引起机体免疫低下.由此可见,与硫酸铜相比,日粮中添加纳米氧化铜可提高肉鸡免疫功能.     

纳米氧化铜对小白鼠铜表观消化率的影响

选40只20 g左右的健康昆明种小白鼠,随机分为4组.1组饲喂基础日粮;2组在基础日粮中以硫酸铜的形式添加铜10mg/kg;3组在基础日粮中以氧化铜的形式添加铜10mg/kg;4组在基础日粮中以纳米氧化铜的形式添加铜10mg/kg.采用全收粪法,研究纳米氧化铜对小白鼠铜表观消化率的影响.结果显示,硫酸铜组、氧化铜组、纳米氧化铜组小白鼠铜的表观消化率分别为54.74%、48.30%、71.88%,纳米氧化铜组铜的表观消化率显著高于硫酸铜组(P<0.05),极显著高于氧化铜组(P<0.01).试验表明,与添加硫酸铜和氧化铜相比,日粮中添加纳米氧化铜能提高小白鼠铜的表观消化率.     

纳米氧化铜对小白鼠铜表观消化率的影响

选40只20 g左右的健康昆明种小白鼠,随机分为4组。1组饲喂基础日粮;2组在基础日粮中以硫酸铜的形式添加铜10mg/kg;3组在基础日粮中以氧化铜的形式添加铜10mg/kg;4组在基础日粮中以纳米氧化铜的形式添加铜10mg/kg。采用全收粪法,研究纳米氧化铜对小白鼠铜表观消化率的影响。结果显示,硫酸铜组、氧化铜组、纳米氧化铜组小白鼠铜的表观消化率分别为54.74%、48.30%、71.88%,纳米氧化铜组铜的表观消化率显著高于硫酸铜组（P〈0.05）,极显著高于氧化铜组（P〈0.01）。试验表明,与添加硫酸铜和氧化铜相比,日粮中添加纳米氧化铜能提高小白鼠铜的表观消化率。     

纳米氧化铜对鸡肝细胞CP mRNA表达及培养基质中肝酶活性的影响

将培养48h的鸡原代肝细胞随机分为13组,每组3个重复。第1组为对照组,第2～5、6～9和10～13组分别以硫酸铜、氧化铜和纳米氧化铜的形式添加铜2、4、8、16mg/L,继续培养24h后检测上清中AKP、AST、ALT、γ-GT和LDH活性,用实时荧光定量PCR法检测肝细胞CP mRNA表达量。结果显示,以硫酸铜形式添加铜2～16mg/L、以氧化铜形式添加铜8～16mg/L和以纳米氧化铜形式添加铜16mg/L,培养基质中γ-GT活性均显著高于对照组（P〈0.05）;添加铜2mg/L时,硫酸铜组γ-GT活性显著高于纳米氧化铜组（P〈0.05）,添加铜8mg/L时,氧化铜组γ-GT活性显著高于纳米氧化铜组（P〈0.05）。添加铜2mg/L时,硫酸铜和氧化铜组AST和LDH活性显著高于对照组和纳米氧化铜组（P〈0.05）。添加铜2mg/L时,氧化铜组ALT活性显著高于纳米氧化铜组（P〈0.05）。添加铜8mg/L时,硫酸铜和氧化铜组AKP活性显著高于对照组和纳米氧化铜组（P〈0.05）。添加铜2～8mg/L时,肝细胞CP mRNA表达量显著高于对照组（P〈0.05）;添加铜2mg/L时,纳米氧化铜组肝细胞CP mR-NA表达量显著高于氧化铜组（P〈0.05）,氧化铜组显著高于硫酸铜组（P〈0.05）;肝细胞CP mRNA表达量随铜添加量的增加而降低。结果表明,基质中铜达到2mg/L时,纳米氧化铜比硫酸铜、氧化铜更有利于肝细胞生长,纳米氧化铜对体外培养肝细胞的损害作用低于硫酸铜和氧化铜。     

纳米氧化铜对小鼠全血及组织中铜和锌沉积的影响

选取240只体质量约22g健康的昆明种小白鼠,随机分为6组,每组设4个重复.1组饲喂基础日粮,2组在基础日粮中以硫酸铜的形式添加铜10mg/kg,3组在基础日粮中以氧化铜的形式添加铜10mg/kg,4～6组在基础日粮中以纳米氧化铜的形式分别添加铜5、10和20mg/kg.研究不同剂量纳米氧化铜对小白鼠全血和组织中铜及锌含量的影响.试验期30 d.结果表明,试验至15 d,添加纳米氧化铜显著提高小白鼠全血铜含量,显著降低小白鼠肝脏及胫骨锌含量;试验至30 d,添加纳米氧化铜显著提高小白鼠胫骨铜含量.     

不同剂量纳米氧化铜对肉仔鸡生长性能的影响

选180羽1日龄健康AA肉仔鸡，随机分为6组，每组设3个重复。第1、2、4和6组分别以硫酸铜、氧化铜、纳米氧化铜及纳米铜的形式在基础日粮中添加铜8mg／kg，3组和5组以纳米氧化铜形式在基础日粮中分别添加铜4和16mg／kg，试验期42d，研究不同剂量纳米氧化铜对肉鸡生长性能及器官指数的影响。结果表明，与硫酸铜和氧化铜组相比，在饲料中添加纳米氧化铜显著提高肉鸡平均日增质量（P〈0．05），显著降低料重比（P〈0．05），添加纳米铜显著提高1～14d平均日增质量；添加纳米氧化铜和纳米铜对肉鸡病死率无显著影响。     

纳米氧化铜时对小白鼠灌胃接种大肠杆菌致病性的影响

为了研究纳米氧化铜对小白鼠灌胃接种大肠杆菌致病性的影响,试验选择140只体重20 g左右的昆明种小白鼠随机分为7组:1组为正常对照组,饲喂基础日粮;2组为感染对照组,饲喂基础日粮;3组为硫酸铜组,在基础日粮中以硫酸铜的形式添加铜180 mg/kg;4,5,6,7组为纳米氧化铜组,分别在基础日粮中以纳米氧化铜的形式添加铜10,60,120,180 mg/kg.结果表明:3组发病率明显低于2组;3组小白鼠肠道大肠杆菌数量显著少于2组(P<0.05),3,7组显著少于1组(P<0.05).说明日粮中添加高剂量纳米氧化铜能降低大肠杆菌致病性,但效果不如添加相同水平的硫酸铜.     

纳米氧化铜时小白鼠灌胃接种大肠杆菌致病性的影响

为了研究纳米氧化铜对小白鼠灌胃接种大肠杆菌致病性的影响,试验选择140只体重20 g左右的昆明种小白鼠随机分为7组:1组为正常对照组,饲喂基础日粮;2组为感染对照组,饲喂基础日粮;3组为硫酸铜组,在基础日粮中以硫酸铜的形式添加铜180 mg/kg;4,5,6,7组为纳米氧化铜组,分别在基础日粮中以纳米氧化铜的形式添加铜10,60,120,180 mg/kg.结果表明:3组发病率明显低于2组;3组小白鼠肠道大肠杆菌数量显著少于2组(P＜0.05),3,7组显著少于1组(P＜0.05).说明日粮中添加高剂量纳米氧化铜能降低大肠杆菌致病性.但效果不如添加相同水平的硫酸铜.     

纳米氧化铜对小白鼠灌胃接种大肠杆菌致病性的影响

为了研究纳米氧化铜对小白鼠灌胃接种大肠杆菌致病性的影响,试验选择140只体重20g左右的昆明种小白鼠随机分为7组：1组为正常对照组,饲喂基础日粮;2组为感染对照组,饲喂基础日粮;3组为硫酸铜组,在基础日粮中以硫酸铜的形式添加铜180mg／kg;4,5,6,7组为纳米氧化铜组,分别在基础日粮中以纳米氧化铜的形式添加铜10,60,120,180mg／kg。结果表明：3组发病率明显低于2组;3组小白鼠肠道大肠杆菌数量显著少于2组（P〈0．05）,3,7组显著少于1组（P〈0．05）。说明日粮中添加高剂量纳米氧化铜能降低大肠杆菌致病性,但效果不如添加相同水平的硫酸铜。     

日粮铜源和水平对生长猪下丘脑SS、GHRH表达水平的影响

试验选择"军牧1号"断乳仔猪75头随机分成5个组,每组15头(设置5个重复),对照组饲喂基础日粮,硫酸铜的添加量为5 mg/kg, 其余2组分别饲喂在基础日粮基础上添加125 mg/kg硫酸铜和125 mg/kg蛋氨酸铜的试验日粮.结果表明:与添加5 mg/kg硫酸铜相比,日粮中125 mg/kg硫酸铜、125 mg/kg蛋氨酸铜可以使猪下丘脑SS mRNA丰度显著降低(P<0.05),而GHRH mRNA丰度显著提高(P<0.05);SS mRNA丰度与GHRH mRNA丰度呈显著负相关关系(P<0.05).结果说明铜抑制了下丘脑SS mRNA的表达,而提高了GHRH mRNA的表达.     

纳米氧化铜对小白鼠血浆抗氧化机能的影响

选144只20g左右的健康昆明种小白鼠,随机分为6组,每组设4个重复。1组饲喂基础日粮;2组在基础日粮中以硫酸铜的形式添加铜10mg/kg;3组在基础日粮中以氧化铜的形式添加铜10mg/kg;4～6组在基础日粮中以纳米氧化铜的形式分别添加铜5、10、20mg/kg。研究不同剂量纳米氧化铜对小白鼠血浆抗氧化能力的影响,试验期30d。结果表明,添加纳米氧化铜显著提高小白鼠血浆铜蓝蛋白活力(P<0.05),显著提高小白鼠血浆细胞色素C氧化酶活性(P<0.05),显著降低30d小白鼠血浆丙二醛含量(P<0.05)。     

不同铜源化合物在水溶液或细胞培养液中铜离子价态研究

本试验旨在研究硫酸铜、微米氧化铜和纳米氧化铜在水溶液或细胞培养液中解离出的铜离子价态,为进一步研究纳米氧化铜在体内消化道的吸收转运方式提供理论基础。配制铜水平为8 mg/L的硫酸铜、微米氧化铜、纳米氧化铜的超纯水溶液为超纯水对照组,在超纯水对照组基础上分别添加2倍铜摩尔含量的一价铜离子络合剂(BCS)或0.5倍铜摩尔含量的二价铜离子络合剂(EDTO);不同铜源化合物的细胞培养液配制及BCS和EDTO添加方式同超纯水溶液试验,分别于15、30、60、120、240、480 min检测超滤液中铜含量。结果表明:在纳米氧化铜水溶液或细胞培养液中分别添加EDTO、BCS,超滤液中铜含量均分别小于对照组(P0.05),在微米氧化铜、硫酸铜水溶液中或细胞培养液中分别添加EDTO,超滤液中铜含量均分别小于对照组(P0.05);在微米氧化铜、硫酸铜水溶液中或细胞培养液中分别添加BCS,超滤液中铜含量与对照组差异不显著(P0.05)。在水溶液中和细胞培养液中,超滤液中最终解离出的铜离子含量均为硫酸铜组纳米氧化铜组微米氧化铜组(P0.05)。由此可见,在水溶液或细胞培养液中,硫酸铜、微米氧化铜解离产生Cu2+、纳米氧化铜解离产生Cu2+和Cu+。     

不同铜源在蛋鸡腺胃吸收的药物代谢动力学和纳米氧化铜在腺胃肝脏的分布

本试验旨在比较不同铜源在鸡腺胃吸收的药物代谢动力学的特点和纳米氧化铜在腺胃和肝脏的分布状态。将20只8周龄海蓝蛋鸡随机分为4组,每组5只。第1组为对照组,第2～4组为试验组,通过微创外科手术分别向腺胃注射Cu 100 mg/kg·bw剂量的硫酸铜、微米氧化铜、纳米氧化铜,试验期36 h。结果显示,硫酸铜、微米氧化铜和纳米氧化铜经腺胃给药后的药-时浓度曲线趋势类似,均先升高后降低。纳米氧化铜组在试验期内全血铜浓度显著高于对照组(P0.05)。纳米氧化铜组的达峰时间(T_(max))显著低于硫酸铜组和微米氧化铜组(P0.05);纳米氧化铜组的达峰浓度(C_(max))显著高于微米氧化铜组(P0.05)。纳米氧化铜组腺胃和肝脏的肝脏铜含量均显著高于对照组(P0.05),且纳米氧化铜组腺胃铜含量显著高于微米氧化铜组(P0.05)。纳米氧化铜组腺胃组织通过TEM-EDS检测发现了含铜颗粒的存在。由此可见,纳米氧化铜颗粒以内吞途径进入腺胃,其在腺胃内的吸收速率显著高于硫酸铜、微米氧化铜组。     

不同铜源对Caco-2细胞内铜-ATP酶二价金属离子转运体1和金属硫蛋白含量的影响

利用Caco-2细胞模型研究不同浓度硫酸铜,微米氧化铜,纳米氧化铜(铜水平2、4、8、16 mg/L)对细胞铜-ATP酶、二价金属离子转运体1(Divalent Metal Transporter 1,DMT1)、金属硫蛋白(metallothionein,MT)含量的影响。结果显示,培养液中添加铜离子能提高Caco-2细胞铜-ATP酶、MT含量,低浓度铜离子能提高细胞DMT1含量,高浓度铜离子降低细胞DMT1含量。纳米氧化铜对几种铜转运蛋白的作用与硫酸铜类似,但纳米氧化铜对铜-ATP酶、MT、DMT1含量的影响更加明显。     

铜对仔猪血清微量元素水平的影响

为了探讨不同铜源对仔猪生长性能和血清微量元素含量的影响,试验选用体重20 kg左右的军牧1号断奶仔猪75头,随机分成A、B、C、D、E 5组,分别为基础日粮对照组(A组)、基础日粮+125 mg/kg硫酸铜组(B组)、基础日粮+250 mg/kg的硫酸铜组(C组)、基础日粮+125 mg/kg蛋氨酸铜组(D组)、基础日粮+250 mg/kg蛋氨酸铜组(E组),试验期为45 d。在试验第15,30,45天晨饲前空腹采血,分离血清用于测定有关微量元素含量;测定各组猪生长性能。结果表明:日粮添加铜可显著提高血清铜、锌含量(P0.05),对血清铁含量无显著影响(P0.05);125 mg/kg蛋氨酸铜和125 mg/kg硫酸铜的促生长效应较显著(P0.05),且有机铜优于无机铜。说明添加铜对仔猪生长有一定的意义,建议在基础日粮中添加铜125 mg/kg。     

铜对中国荷斯坦奶牛泌乳、肝脏铜代谢蛋白及相关酶基因表达的影响

选取60头产奶量、泌乳天数与胎次相近的荷斯坦奶牛,按随机分配原则分为4组,分别在基础饲粮上添加0,10,15与20 mg/kg铜,试验Ⅰ组(铜水平8.09 mg/kg)、试验Ⅱ组(铜水平18.09 mg/kg)、试验Ⅲ组(铜水平23.09 mg/kg)与试验Ⅳ组(铜水平28.09 mg/kg),每组15头,试验期共90 d。试验表明:与试验Ⅰ组相比,试验Ⅱ、Ⅲ组与Ⅳ组泌乳量显著升高(P<0.05);乳体细胞数极显著降低(P<0.01);随着饲粮铜水平的增加,各试验组乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、非脂固形物与乳总固形物的含量差异不显著(P>0.05)。随着饲粮铜水平的增加,奶牛肝脏铜转运基因铜离子转出蛋白B(ATP7B)与铜蓝蛋白(CP) mRNA的相对表达量极显著提高(P<0.01);与试验Ⅰ组相比,试验Ⅱ组铜代谢MURR1域蛋白质1(COMMD1)mRNA相对表达量提高了9%(P>0.05),Ⅲ组与Ⅳ组分别降低了54%与78%(P<0.01)。含铜酶相关基因相对表达量分析显示,随着饲粮铜水平的增加,超氧化物歧化酶1(SOD1)、赖氨酰氧化酶(LOX)、单胺氧化酶A(MAOA) mRNA相对表达量显著性提高;与试验Ⅰ组相比,试验Ⅱ、Ⅲ与Ⅳ组单胺氧化酶B(MAOB) mRNA的相对表达量分别降低了24%,34%与60%(P<0.01)。综上所述,饲粮中添加铜能够提高奶牛的生产性能,促进机体内铜的代谢与含铜蛋白的合成和提高机体的抗氧化能力。在本试验条件下,泌乳牛饲粮铜水平为18.09～23.09 mg/kg时,既能促进泌乳牛生产性能的提高,又能有效上调泌乳牛肝脏铜代谢蛋白及相关酶基因的表达。     

铜对仔猪血清微量元素水平的影响

为了探讨不同铜源对仔猪生长性能和血清微量元素含量的影响,试验选用体重20 kg左右的军牧1号断奶仔猪75头,随机分成A、B、C、D、E 5组,分别为基础日粮对照组（A组）、基础日粮＋125 mg/kg硫酸铜组（B组）、基础日粮＋250 mg/kg的硫酸铜组（C组）、基础日粮＋125 mg/kg蛋氨酸铜组（D组）、基础日粮＋250 mg/kg蛋氨酸铜组（E组）,试验期为45 d。在试验第15,30,45天晨饲前空腹采血,分离血清用于测定有关微量元素含量;测定各组猪生长性能。结果表明：日粮添加铜可显著提高血清铜、锌含量（P〈0.05）,对血清铁含量无显著影响（P〉0.05）;125 mg/kg蛋氨酸铜和125 mg/kg硫酸铜的促生长效应较显著（P〈0.05）,且有机铜优于无机铜。说明添加铜对仔猪生长有一定的意义,建议在基础日粮中添加铜125 mg/kg。     

赖氨酸铜对仔猪养分利用率的影响

选用 9头纯种大白小阉猪进行为期 1 4天的代谢试验。试验设A、B、C三组 ,A组日粮为基础日粮 (含 1 5mg/kg的铜 ) ,B组日粮为基础日粮 2 0 0mg/kg赖氨酸铜来源的铜 ,C组日粮为基础日粮 2 0 0mg/kg硫酸铜来源的铜。结果表明 ,日粮添加 2 0 0mg/kg赖氨酸铜或硫酸铜来源的铜均可显著提高脂肪的消化率 (P <0 0 5 ) ,对氮的消化率、沉积率有一定的提高 ,但差异不显著 (P >0 0 5 )。两种铜源对仔猪养分的利用率影响无显著差异