在成熟过程中添加牛血清和猪卵泡液对猪卵母细胞核成熟及体外受精后早期胚胎发育的影响

研究目的在于探讨在成熟过程中添加牛血清和猪卵泡液对猪卵母细胞核成熟、卵丘细胞扩散及体外受精后早期胚胎发育的影响。卵母细胞·卵丘细胞复合体在含FSH和LH的以下处理组的成熟液中成熟培养 2 3～ 2 4h :(1)对照组-改良TCM - 199+0 .1%PVA ;(2 )试验组 1-改良TCM - 199+10 %新生牛血清 ;(3)试验组 2 -改良TCM - 199+10 %猪卵泡液 ,再移至无FSH和LH的不同处理组的成熟液中成熟培养 2 3～ 34h。试验 1中 ,卵母细胞在 4 6～ 4 8h成熟培养后 ,观察卵丘细胞扩散情况 ,并对卵母细胞进行固定和染色 ,鉴定卵母细胞减数分裂情况 :试验 2中 ,对在不同处理组的成熟液中成熟培养 4 6～ 4 8h的卵母细胞进行体外受精 ,再培养 8d。受精后第 2天检查分裂率、第 6天检查桑椹胚 /囊胚率、第 8天检查囊胚率。 4 6～ 4 8h成熟培养后试验组 1和试验组 2的大部分卵母细胞 -卵丘细胞复合体的卵丘细胞完全扩散 ,而对照组的卵丘细胞只有 5 0 %扩散。试验组 1和试验组 2的卵母细胞核成熟率分别为 39.9% (77/ 193)和 4 4 .3% (93/ 2 10 ) ,与对照组的卵母细胞核成熟率 4 8.1% (99/ 2 0 6 )相比没有显著差异 (P <0 .0 5 )。卵母细胞分裂率试验组 1(5 0 .0± 1.8) %和试验组 2 (49.9± 2 .6 ) %与对照组的卵母细胞分裂率 (49.0± 2     

培养介质、卵丘细胞和卵泡直径对猪卵母细胞体外成熟的影响

A类卵母细胞在mTCM 199、NCSU2 3和NCSU37体系中培养 4 4～ 5 2小时后 ,成熟率分别为 76 .1%、78.1%和 6 5 .2 %。前两者差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,但显著高于后者 (P <0 .0 5 )。卵母细胞在添加eCG和hCG的NCSU2 3体系中的成熟率 (75 .6 % )明显高于添加FSH的LH和成熟率 (6 5 .2 % ) (P <0 .0 5 )。A、B、C三类卵母细胞在NCSU2 3的成熟率分别为 73.3%、6 0 .4 %和 11.0 % ,三者间差异显著 (P <0 .0 5 )。大 (ф >6mm)、中 (ф =3～ 6mm)和小 (ф <3mm)三种卵泡中的卵母细胞在NCSU2 3中培养后 ,成熟率分别为 5 6 .2 % ,78.1%和 5 1.9% ,中等卵泡中卵母胞的体外成熟率显著高于其他两组 (P <0 .0 5 )。     

影响绵羊体外受精技术因素的研究

作者对影响卵母细胞体外成熟和体外受精的因素进行研究。结果表明,激素FSH和LH明显促进卵母细胞的体外成熟,且10、20和40μg/m l组成熟率高于5μg/m l组,差异显著;运输温度在28~32℃的成熟率高于22~24℃和35~37℃,差异显著;用BO受精体系卵子卵裂率高于TALP受精体系,差异显著;用绵羊冻精进行体外受精,受精前除去大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞卵裂率高于保留大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞。     

卵丘细胞与卵母细胞解离对小鼠卵子体外成熟及受精的影响

卵丘细胞与卵母细胞的解离会降低小鼠卵母细胞的成熟质量,该研究将解离所得裸卵用不同种成分明确的成熟培养液进行体外成熟、体外受精、体外发育,从而确定卵丘细胞与卵母细胞的解离对小鼠卵母细胞成熟、受精、发育的影响,并通过筛选建立起最优的试验体系,为去除卵丘细胞的卵母细胞体外成熟质量的提高及后续研究提供参考依据。结果显示,裸卵的成熟率与成熟培养液的选择密切相关,TYH组、HTF组极显著优于M199组、α-MEM组;卵丘细胞与卵母细胞的解离与否对受精率的影响是巨大的,解离后(10%～28%)与解离前(48%～76%)差异极为显著(P<0.01);卵丘细胞与卵母细胞的解离与否对发育率的影响未发现显著差别(P>0.05)。因此,卵丘细胞与卵母细胞的解离主要影响了小鼠卵母细胞的体外受精率,通过选用适当的培养液可以相对改善该情况。     

卵泡大小和颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

用切割法采集卵泡液,收集卵丘一卵母细胞复合体（Cumulus oocytes comlexs,COCs）和自然裸卵,将部分COCs去除卵丘细胞获得机械裸卵,COCs放入体外成熟培养液中培养为成熟卵母细胞,加入获能的精子液,进行体外受精。结果表明：卵母细胞的体外成熟率和卵裂率与卵泡直径密切相关,大卵泡（80．95％,P〈0．01）和中等卵泡（75．50％,P〈0．05）的卵母细胞成熟率高于小卵泡（50．27％）;犬卯泡（53．53％）和中等卵泡（47．13％）的卵裂率显著高于小卵泡的32．26％（P〈0．05）。COCs、机械裸卵和自然裸卵的体外成熟率分别为75．0％、54．2％和10．5％,差异极显著（P〈0．01）,卵裂率分别为53．8％、10．8％和0％,差异极显著（P〈0．01）。对照组和1×10^5、1×10^6个／mL颗粒细胞组卵母细胞体外成熟率分别为68．6％、69．6％和67．8％,无显著差异（P〉0．05）,但均显著高于1×10^7个／mL（51．5％,P〈0．05）和1×10^10个／mL（35．5％,P〈0．05）颗粒细胞组,但各组间的体外受精率无显著差异（P〉0．05）。结果提示,大卵泡和中卵泡的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率显著高于小卵泡,体外成熟培养液中添加高浓度的颗粒细胞能显著抑制卵母细胞的体外成熟。     

FSH对牦牛卵母细胞EGF、EGFR表达及其细胞凋亡的影响

旨在研究促卵泡素(FSH)对牦牛卵母细胞体外成熟,以及对表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达影响和与细胞凋亡的关系。在牦牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度FSH(终浓度分别为0、2、5、10μg·mL~(-1)),体外成熟培养后,运用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)和免疫荧光染色技术检测EGF、EGFR表达情况,采用qRT-RCR和蛋白免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化。结果表明:1)成熟培养液中加入FSH可提高COCs成熟率,当成熟液中FSH为5μg·mL~(-1)时,成熟率最高,达到76.84%,显著高于其他组(P0.05);2)随着FSH浓度的增加,EGF和EGFR表达逐渐升高,其中在5μg·mL~(-1) FSH组中,EGF和EGFR的表达最高,显著高于其他组(P0.05),而在10μg·mL~(-1)FSH组中,EGF和EGFR的表达水平降低;EGF主要位于卵丘细胞中,而EGFR在卵丘细胞和卵母细胞均有表达;3)随着FSH浓度的增加,Bax和Bcl-2的表达显示出明显的逆向模式,Bax的表达水平逐渐降低,Bcl-2的表达水平逐渐升高,在5μg·mL~(-1) FSH组中Bax的表达量最低,Bcl-2的表达量最高,而在10μg·mL~(-1)FSH组中,Bax的表达水平升高。综上表明,在牦牛卵母细胞体外成熟过程中,FSH提高了卵母细胞发育能力,诱导EGF和EGFR表达,而且可能通过调控Bax、Bcl-2等凋亡相关因子的表达,抑制卵母细胞凋亡。     

不同组分体外成熟培养基对绵羊卵母细胞成熟、代谢及孤雌胚胎发育的影响

为了探究不同组分体外成熟培养基对绵羊卵母细胞体外成熟的影响,试验从健康绵羊卵巢中分离卵丘-卵母细胞复合体(COCs),将分离的COCs分为V-FSH+LH+E₂+FBS组、V-FSH+FBS组、V-FSH+LH+E₂+BSA组、P-FSH+LH+E₂+FBS组、P-FSH+FBS组、P-FSH+LH+E₂+BSA组,每组分别添加以V-促卵泡素(FSH,垂体中提纯的FSH)和P-FSH(体外基因重组表达的FSH)为基础设计的体外成熟培养基以进行体外成熟试验,即各组依次添加V-FSH+促黄体素(LH)+雌激素(E₂)+胎牛血清(FBS)、V-FSH+FBS、V-FSH+LH+E₂+牛血清白蛋白(BSA)、P-FSH+LH+E₂+FBS、P-FSH+FBS、P-FSH+LH+E₂+BSA体外成熟培养基,体外成熟后检测各组卵丘扩展指数(CEI)、第一极体排出率、卵母细胞氧化还原态、乳酸生成量、葡萄糖消耗量、ATP生成量;...     

多种激素对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

为了探讨促卵泡素(FSH)、人绒毛膜促性膜激素(HCG)、雌二醇(E_2)三种激素和丙酮酸钠在卵母细胞体外成熟培养液中的最佳添加浓度,深入研究小鼠卵母细胞体外成熟的规律,进而完善小鼠卵母细胞体外成熟培养体系,试验对小鼠卵母细胞进行体外培养,在完全培养基中单独或组合添加FSH、HCG、E_2三种激素,并在此基础上添加不同浓度的丙酮酸钠,分别测定第一极体(PB1)排出率和自然裸卵细胞(NO)死亡率。结果表明:小鼠卵母细胞经体外培养14 h后,在完全培养基中只添加FSH,1 IU/mL FSH试验组的卵母细胞体外成熟率最高,PB1排出率为52.50%, NO死亡率为15.00%;在只添加HCG以及1 IU/mL FSH和HCG组合添加试验中, 1 IU/mL HCG试验组卵母细胞体外成熟率最高,PB1排出率分别为35.70%和53.83%,NO死亡率分别为67.50%和25.00%;在只添加E_2试验中,1μg/mL E_2试验组卵母细胞体外成熟率最高,PB1排出率为47.00%,NO死亡率为0;在添加1 IU/mL FSH、1 IU/mL HCG和1μg/mL E_2的条件下添加不同浓度的丙酮酸钠,0.04 mg/mL丙酮酸钠试验组卵母细胞体外成熟率最高,PB1排出率为75.80%,NO死亡率为11.37%。说明在完全培养基中添加1 IU/mL FSH、1 IU/mL HCG、1μg/mL E_2和0.04 mg/mL丙酮酸钠,对小鼠卵母细胞PB1排出的促进作用最好,对NO体外成熟培养效果最好。     

马卵母细胞体外成熟的研究进展

随着全球马产业的发展,马发挥的经济价值越来越大。辅助生殖技术有利于发挥优良马匹的潜在价值。马卵母细胞体外成熟(IVM)是辅助生殖技术重要的组成部分,卵母细胞的获取是体外成熟的前提,切刮法能从离体卵巢中获得较多的马卵母细胞,而活体采卵技术(OPU)则能持续地获得卵母细胞,并能较好的保存马卵母细胞的发育能力。扩张型卵母细胞的成熟率高于紧密型卵母细胞,母马的年龄会影响到其卵母细胞的质量。马卵母细胞体外存放较长时间不会影响其发育能力,现在已有较为成熟的体系能使马卵母细胞在体外保存24 h以上而不影响其成熟率。在马卵母细胞成熟体系中常用的基础培养液是M199,添加胎牛血清(FBS)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等物质能显著提高成熟率,常用培养环境为38~39℃,5%CO2饱和湿度下培养,培养时间30 h。成熟的卵母细胞有扩张的卵丘细胞和极体,且成熟的卵母细胞的细胞骨架及微管结构也会发生变化。本文针对马卵母细胞的采集和体外成熟培养的相关研究进行总结,重点阐述了不同采集技术的回收率以及影响马卵母细胞体外成熟率的关键因素,以期对今后马卵母细胞体外成熟的进一步研究及后期体外受精技术的发展提供借鉴与参考。     

马卵母细胞体外成熟的研究进展

随着全球马产业的发展,马发挥的经济价值越来越大。辅助生殖技术有利于发挥优良马匹的潜在价值。马卵母细胞体外成熟(IVM)是辅助生殖技术重要的组成部分,卵母细胞的获取是体外成熟的前提,切刮法能从离体卵巢中获得较多的马卵母细胞,而活体采卵技术(OPU)则能持续地获得卵母细胞,并能较好的保存马卵母细胞的发育能力。扩张型卵母细胞的成熟率高于紧密型卵母细胞,母马的年龄会影响到其卵母细胞的质量。马卵母细胞体外存放较长时间不会影响其发育能力,现在已有较为成熟的体系能使马卵母细胞在体外保存24 h以上而不影响其成熟率。在马卵母细胞成熟体系中常用的基础培养液是M199,添加胎牛血清(FBS)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)等物质能显著提高成熟率,常用培养环境为38～39℃,5%CO_2饱和湿度下培养,培养时间30 h。成熟的卵母细胞有扩张的卵丘细胞和极体,且成熟的卵母细胞的细胞骨架及微管结构也会发生变化。本文针对马卵母细胞的采集和体外成熟培养的相关研究进行总结,重点阐述了不同采集技术的回收率以及影响马卵母细胞体外成熟率的关键因素,以期对今后马卵母细胞体外成熟的进一步研究及后期体外受精技术的发展提供借鉴与参考。