植酸酶活性测定方法

饲用植酸酶酶活性的定量分析至今没有普遍公认的检测方法,本测定方法是在BASF公司1991提出的植酸酶活性的测定方法的基础上进行研究改进,建立了更适合于普通实验室条件下植酸酶产品酶活性的测定。本方法采用绝对法,取二次曲线方程计算,其线性相关性(R2)匀能够达到0.999～1,同一样品同一时间平行测定实验结果相对误差均<2%,同一样品不同时间测定结果相对标准偏差(RSD%)<10%(n=3)。     

饲料加工工艺对不同剂型植酸酶加工损耗的影响

试验旨在研究热处理对2个进口品牌和2个国产品牌耐高温植酸酶的影响及挤压膨化加工工艺(140~175℃)、环膜硬颗粒加工工艺(70~90℃)、冷挤压平模硬颗粒加工工艺(60~66℃)对不同剂型植酸酶活性损耗率的影响。不同品牌耐高温植酸酶在80℃水浴中处理2 min后测定其活性,同时在饲料中添加4 000、5 000 FTU/kg和8 000 FTU/kg活性的普通酸性植酸酶和耐高温植酸酶,分别测定植酸酶在不同制粒加工工艺条件下的活性。结果表明:热处理对不同耐高温植酸酶活性损耗的影响不同,其活性损耗率范围为8.45%~80.07%。在挤压膨化加工工艺条件下,两种植酸酶基本全部失活;在环模硬颗粒加工工艺条件下,普通商品酸性植酸酶活性损耗率为77.71%,而耐高温植酸酶活性损耗率为34.81%;在冷挤压平模硬颗粒加工工艺条件下,普通商品酸性植酸酶活性损耗率为27.40%,耐高温植酸酶活性损耗率为21.15%。采用内添加方式添加植酸酶,不同加工工艺对植酸酶活性损耗率的影响由大到小依次为:挤压膨化加工工艺环膜硬颗粒加工工艺冷挤压平模硬颗粒加工工艺。     

应用钼黄法和钼兰法测定植酸酶活性测定条件的研究

植酸酶活性的测定,基于在一定的条件下植酸酶酶解底物(植酸钠),游离出磷和肌醇。游离出磷量的多寡反映出酶活的高低。测定磷的方法应用较多的为钼黄法和钼兰法。钼黄法因其标准曲线线性关系好,颜色稳定,干扰物质相对较少而成为测定低含量磷的经典方法。钼兰法其测定条件及还原剂的选择已有深入的研究,并在微量磷测定中得到应用。钼黄法和钼兰法应用于植酸酶活性的测定,由于表面活性剂的引入,植酸钠及植酸酶的存在,改变了方法的测定条件。而酶提取溶剂的选择也是影响测定成败的主要因素。本文对上述因素的引入给测定方法带来的影响进行研究,…     

无淀粉麦麸为底物体外植酸酶活性评价方法的建立

为提高体外检测方法的科学性和客观性,预测植酸酶在动物体内的活性和作用效果,研究以无淀粉麦麸为底物,探索并建立了一种更为客观评价植酸酶活性的检测方法.与现有的植酸酶酶活测定国家标准相比,在不同pH值的缓冲液中检验植酸酶降解天然植酸的效果,具有更为科学、客观与简便等优点.     

常用植物性饲料中的植酸酶活性及加热温度的影响

在pH5,0,37℃,反应15分钟的条件下测定了小麦、大麦、豆饼、玉米、菜籽饼和麦麸中的植酸酶活性(PU/g干物质),它们分别为1454、1278、204、183、334和2349。麦麸中植酸酶有较好的耐热性,在60℃或80℃的温度下加热1小时,其活性仅下降了7％,但在100℃的温度下加热1小时,植酸酶的活性却下降60％。     

饲用植酸酶酶活测定过程中底物的影响研究

参照国标法测定饲用植酸酶活性,研究不同来源的底物植酸钠、底物浓度、底物pH对饲用植酸酶活性的影响。结果表明,以P8810为代表的植酸钠盐水合物作为底物,其测定出的植酸酶酶活显著高于使用以P3168为代表的植酸钠作为底物所测定的植酸酶酶活。以P8810作为底物时,其反应浓度在高于6.6 mmol/L时,会产生底物抑制效应。以P8810作为底物时,调节底物pH至国标中定义的5.5与未调节pH所测得的植酸酶酶活相比较,差异并不显著,且在低底物pH条件下,某些植酸酶同样能够释放出最大催化活性。因此现有的国标法测定饲用植酸酶活性已与实际应用有一定的差别,不能照搬国标方法测定现有饲用植酸酶产品。     

家蚕精子顶体酶活性分析及冷冻精液的人工授精

采用改良Kennedy s法测定了家蚕精子顶体酶活性,得到了适合家蚕精子顶体酶活性测定的最佳条件,即:孵育温度为25℃,孵育时间为4 h;精液体外4℃存放随时间延长其顶体酶活性呈下降趋势,酶活性的测定应在15 h内进行。虽然冷冻精液随着冷冻时间的延长其酶活性下降,但是不同冷冻方式之间酶活性变化趋势不同,-80℃保存时酶活性直线下降,120 d后酶活性下降了61%。液氮中保存的精液虽然在30 d后的酶活性为冷冻前的58%,但在其后的几个月中酶活性下降不明显。此外,顶体酶活性的高低与精液人工授精产卵数及受精卵率相关,酶活性越低其产卵数越少,受精卵率也越低,提示顶体酶活性的高低可以在一定程度上反映精液的品质。     

植酸酶在肉仔鸡消化道内环境下活性变化的体外研究

本研究在体外条件下对肉仔鸡消化道内pH环境以及蛋白质水解酶对黑曲霉植酸酶活性的影响进行了研究。结果表明,该植酸酶为酸性植酸酶,最适pH为5.5。该植酸酶对pH环境和蛋白质水解酶较为敏感。当环境pH远离其最适pH时其活性迅速下降,且大部分酶活损失发生在30 min内,然后趋于稳定。在pH3.0和pH6.0条件下,加入胃蛋白酶和胰酶后,植酸酶活性亦进一步迅速降低,然后趋于稳定,但与胃蛋白酶相比,胰酶对植酸酶活性的影响更大。从植酸酶在14、28和42日龄肉仔鸡胃和小肠稳定性的研究可以看出,植酸酶在胃存留率分别为42%、40%和49%,在小肠内的存留率仅19%。植酸酶在胃内的稳定性好于小肠,小肠内环境不利于植酸酶存活。植酸酶活性受肉仔鸡消化道pH和蛋白酶的影响较大,这可能是影响植酸酶作用效果的主要因素之一。     

旋转磁场对饲用植酸酶活性影响的试验研究

试验采用来自国内外不同企业生产的4种植酸酶试剂,常规条件下分别在旋转磁场中处理0、5、10、15、20、25min,用钒钼磷显色法检测酶活性,试验结果表明:其中3种酶活性受到旋转磁场影响不显著,而另一种酶活性却降低到原活性的50%左右,其原因可能是由于磁场改变了植酸酶的空间结构,从而影响其活性。     

pH值对植酸酶酶活的影响及其在猪、鸡消化道中的分析

通过测定在不同ｐＨ值条件下两种植酸酶的活性,发现ｐＨ值对植酸酶活力有较大影响。在鸡嗉囊的ｐＨ值条件下,Ｔ植酸酶和Ｎ植酸酶的酶活相对标准酶活都是１００％,而在动物真胃的ｐＨ值条件下,Ｔ植酸酶和Ｎ植酸酶的酶活相对标准酶活分别是７７．８２％和４９．６１％。     

猪用植酸酶产品功效的比较

正植酸酶产品在每单位酶释放的磷值上存在差异。同样,实验室对植酸酶活性的分析也存在差异。因此,在比较植酸酶活性和添加水平时必须谨慎。一种可以比较不同植酸酶产品活性以确定不同产品间替代率的方法,是在指定的磷释放值(如,释放0.10%的有效P)上比较它们的功效。     

酶制剂在饲料工业中应用的研究(三)——几种酶制剂在肉鸡饲料中的应用效果

酶活性测定、酶耐高温性能测定、酶体内消化试验等都是从不同侧面反映酶制剂的质量或作用。要想了解酶制剂应用于饲料中的效果如何,必须通过饲养试验来验证。     

产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料发酵参数的优化

研究旨在优化产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料的发酵参数,试验采用4因子5水平正交设计和二因子有重复观察值的设计方法进行,通过测定发酵底物中的植酸酶活性,确定生物饲料发酵条件参数和发酵底料组成及接种比例.研究结果表明,产植酸酶枯草芽孢杆菌生物饲料优化发酵条件参数为温度37℃,时间周期72 h,底物初水分30%,初始pH 7.0;底料组成和接种量的优化结果:底料组成为棉粕90%和玉米10%;接种量为7.0 mL/100 g.     

微生物植酸酶在体外条件下活性的测定

由于添加无机磷导致粪便中磷的排出量增多 ,污染水源和土壤 ,同时磷酸氢钙还易导致氟中毒和其他重金属中毒 ,因此在饲料中添加植酸酶代替直接添加无机磷日益受到重视。植酸酶的应用效果 ,关键在于其在消化道中的活性。自然界有许多不同的植酸酶来源 ,通过遗传工程技术 ,利用微生物 (黑曲霉—Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ)发酵工程技术生产饲用植酸酶 ,已成功地应用于猪和家禽中。本试验是应用这种微生物植酸酶 ,以玉米、豆饼、麦麸为植酸磷载体 ,模拟畜禽胃肠消化道环境 ,在体外条件下测定微生物植酸酶的活性。1　材料与方法1 1　试验…     

植酸酶活性测定应注意的几个问题

1温度植酸酶作为一种酶制剂,对温度非常敏感,温度低会降低它的生物活性;温度高也会降低其生物活性,甚至完全失活。因此,在检测过程中对温度的控制则显得非常重要,国标要求植酸酶活性测定时的温度为(37±0.1)℃。在33℃时植酸酶不能很好地发挥其活性,酶活与其真实值相比约低10%;     

3-植酸酶和6-植酸酶的比较研究

3-植酸酶主要来源于真菌和大多数细菌微生物，而6-植酸酶主要来源于植物和大肠杆菌。大量试验结果表明：从纯酶角度而言，其差别仅在EC码的最后一位，即水解磷酸根的启动位置不同。但是，即使同是植酸酶，不同的来源会在动物的表现上有相当大的差异。因此，仅用酶的活性数量还不能完全描述或作为衡量、判断3-植酸酶和6-植酸酶的差异。因此，从空间结构、酶学特性、作用机理等方面比较研究3-植酸酶和6-植酸酶，更有利于科学合理地制作配方，促进国产植酸酶走向国际市场。     

瘤胃微生物植酸酶的分类与酶学性质研究进展

反刍动物能很大程度上依靠瘤胃微生物来消化利用饲料中的植酸盐,但目前国内有关瘤胃微生物植酸酶的研究报道较少.本文对瘤胃微生物植酸酶的主要来源和活性进行了综述分析,发现主要有5种瘤胃细菌能分泌植酸酶,其中,反刍兽新月形单胞菌(Selenomonas ruminantium)分泌的植酸酶活性最高(199.1～703.6 U·mL-1)；根据酶促反应的最适pH和催化机理,可将瘤胃微生物植酸酶分别归类为酸性植酸酶和半胱氨酸磷酸酶植酸酶；根据植酸酶水解植酸时的立体专一性,发现瘤胃微生物植酸酶中可能同时存在3-植酸酶和5-植酸酶2类植酸酶.最后本文论述了瘤胃微生物植酸酶酶促反应动力学特性,发现反刍兽新月形单胞菌植酸酶的最适pH为4.0～5.5、最适温度为50～55℃、对植酸和ATP表现出较强的活性；埃氏巨形球菌植酸酶的最适pH为5,0、最适温度为60℃、仅对植酸表现出活性.     

液体植酸酶的稳定性研究

此文研究了液体植酸酶在不同贮存温度下的酶活稳定性,以及不同稀释倍数和调节稀释后酶液的pH时液体棱酸酶的活性和物理性状的影响,同时探讨了液体植酸酶与液体木聚糖酶复配的稳定性能。试验结果表明：液体植酸酶在低温下贮存酶活稳定性较好;不同稀释倍数对液体植酸酶活性无明显影响,但稀释倍数较大显著影响？植酸酶溶液的物理性状;通过调节稀释后的植酸酶溶液的pH可以显著改善其物理性状。此外,与液体木聚糖酶复配无论是复配后酶液蛇活性还是其物理性状均具有很好盼稳定性。     

大肠杆菌植酸酶appA2基因真核表达载体的构建及在细胞中的表达

根据已经公布的植酸酶appA2基因序列,设计合成了1对特异性引物,应用RT-PCR技术从大肠杆菌中扩增得到植酸酶appA2基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了重组真核表达质粒pcDNA-appA2,对重组表达质粒鉴定正确后,转染猪PK15细胞,经G418筛选后,通过实时荧光定量PCR检测细胞内appA2表达,同时测定细胞内植酸酶的活性,检测结果表明,本试验成功构建了pcDNA-appA2重组真核表达载体,转染细胞后appA2的表达量是对照组的1 686.55倍,同时具有较好的植酸酶活性,为通过生物反应器制备植酸酶研究奠定了基础。     

桑蚕血液H2O2酶活性的性别差异及其与抗逆性的关系

生物体内许多酶的活性与机体的抗性有密切关系。过氧化氢(H_2O_2)酶能保护机体免受包括自身代谢产物在内的有毒物质的毒害作用。关于桑蚕不同品种血液H_2O_2酶活性的研究已有一些报道,但对于雌雄间该酶活性的表现不明。本试验以春蚕和夏秋蚕品种为材料,分别测定雌雄个体血液中H_2O_2酶的活性,借以比较该酶活性的性别差异,并进一步探论H_2O_2酶与抗逆性间的关系。