基于偏最小二乘法的赤芝子实体三萜类化合物抗氧化谱效关系的研究

测定了64株赤芝(Ganoderma lucidum)子实体醇提物清除二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的活性和三萜指纹图谱,采用遗传算法筛选其指纹图谱中的26个共有峰,并标定出其中15个特征峰,运用偏最小二乘回归分析方法(partial least squares regression,PLSR)对指纹图谱中26个三萜峰与醇提物清除DPPH自由基的活性进行关联分析,建立了赤芝子实体三萜类化合物的抗氧化谱效关系方程。在赤芝子实体醇提物三萜指纹图谱的26个共有峰中,峰S1、S4、S9、S10和S26的峰面积与醇提物清除DPPH自由基的活性呈显著正相关关系;峰S3、S11、S15、S18、S19、S22和S25的峰面积与醇提物清除DPPH自由基的活性呈显著负相关关系。分别测定鉴定出的15个峰对应的三萜化合物对DPPH自由基的清除活性,发现与清除DPPH自由基活性呈显著正相关的三萜化合物灵芝酸C_2(S4)、灵芝酸B(S9)、灵芝酸LM_2(S10)、灵芝醛A(S26)对DPPH自由基的清除活性明显高于其他三萜化合物,与清除DPPH自由基活性呈显著负相关的三萜化合物灵芝酮三醇(S18)、灵芝萜酮二醇(S22)无清除DPPH自由基的活性。另外,利用H_2O_2诱导的PC12细胞损伤模型进一步验证灵芝酸C_2、灵芝酸B、灵芝酸LM_2、灵芝醛A和灵芝萜酮二醇在细胞水平的抗氧化活性,发现灵芝酸C_2、灵芝酸B、灵芝酸LM_2、灵芝醛A具有明显的保护神经细胞氧化损伤的活性,而灵芝萜酮二醇对神经细胞的氧化损伤无保护作用。结果表明,本研究建立的赤芝子实体三萜类化合物抗氧化谱效关系方程具有较高的准确性,能够较全面地反应赤芝子实体醇提物中不同三萜化合物与其抗氧化活性的相关性,可快速锁定有效成分以指导活性成分的分离纯化工作。此外,该方法也为赤芝子实体的质量控制提供了更为有效和准确的方法。     

金针菇子实体化学成分的研究

对金针菇(Flammulina velutipes)子实体进行乙醇提取,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取,经柱层析分离得到12个化合物。经核磁共振及质谱鉴定,这12个化合物分别为:阿糖醇(1)、麦角甾醇(2)、顺式-9-二十三烯(3)、尿嘧啶(4)、烟酰胺(5)、黄嘌呤(6)、甘油(7)、腺苷(8)、海藻糖(9)、甘露醇(10)和酪氨酸(11),其中化合物3、5、6、7和11为首次从金针菇子实体中分离得到。     

椭圆嗜蓝层孔菌子实体化学成分研究

椭圆嗜蓝层孔菌(Phellinus ellipsoidea)子实体甲醇提取物依次用石油醚和乙酸乙酯萃取,其乙酸乙酯分部经柱层析分离得到11个化合物。经鉴定这11个化合物分别为:苯并(1,2-b,5,4-b′)二呋喃-3,5-二酮-8-甲酸甲酯(1)、原儿茶酸(2)、4-(3,4-二羟苯基)-3-丁烯-2-酮(3)、原儿茶醛(4)、Hispidin(5)、Hispolon(6)、Inoscavin A(7)、Phelligridin K(8)、Inoscavin C(9)、Inoscavin E(10)和Inonoblins B(11),其中化合物2、4、7、10为首次从该物种中分离得到。     

平菇子实体化学成分的分析研究

利用正相硅胶、凝胶等分离材料结合高效液相色谱等分离技术对平菇子实体的化学成分进行分离纯化,并根据光谱数据分析鉴定化合物的结构。从平菇子实体中分离得到8个化合物,分别为(1)麦角甾醇、(2)麦角甾醇过氧化物、(3)22E,24R-5α,6α-环氧麦角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇、(4)烟酸、(5)腺苷、(6)D-甘露醇、(7)尿苷、(8)烟酰胺。其中化合物3和5为首次从该菌中分离得到。     

药用拟层孔菌子实体的化学成分及其对肿瘤细胞增殖抑制

通过硅胶柱层析法、Sephadex LH-20凝胶柱层析法和重结晶法,分离纯化药用拟层孔菌(Fomitopsis officinalis)子实体中的化学成分,依据化合物的物理性质,运用核磁共振谱(nuclear magnetic resonance,NMR)、质谱(mass spectrometry,MS)等波谱法分析鉴定化合物结构,并选用得率较高的4种化合物进行体外抗肿瘤实验。共分离出8个化合物,为4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷、麦角甾-7,22-二稀-3β-醇、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸、去氢齿孔酸、阿里红酸A、去氢齿孔酮酸、阿里红酸C、阿里红酸B。其中化合物4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷为首次从药用拟层孔菌子实体中分离得到。阿里红酸A、阿里红酸C、3-酮基-去氢硫色多孔菌酸抑制人乳腺癌细胞MCF-7活性较好,阿里红酸A、阿里红酸C抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性较好。     

不同来源赤芝活性成分分析及质量评价

分别采用高效液相色谱仪、荧光分光光度计、紫外-可见分光光度计测定13批不同来源赤芝（Ganoderma lucidum）子实体的多糖、总三萜中甾醇、灵芝酸C2、灵芝酸B、灵芝酸A、灵芝酸E、灵芝酮三醇、灵芝萜烯二醇以及硒的含量，并基于熵权逼近理想解排序法（technique for order preference by similarity to an idealsolution, TOPSIS）对上述测定指标进行数据分析，综合评价产品质量。结果表明，基于液相色谱分析建立的6种三萜化合物含量测定方法具有较高的灵敏度与准确度；熵权TOPSIS评价模型快速、灵敏、有效，与主成分分析评价模型结论基本一致，能全面、客观地评价赤芝药材质量，可为赤芝品质分析与综合评价提供参考。     

紫芝超临界萃取物中3种三萜醇的分离与鉴定

经超微粉碎获得人工栽培紫芝(Ganoderma sinense)子实体超细粉,以乙醇为改性剂,应用超临界CO2流体萃取技术获得紫芝萃取物(醇溶性部位);从萃取物的石油醚-乙酸乙酯洗脱物中分离得到3个化合物,采用显微熔点测定仪、红外分光光度计和超导核磁共振仪分别鉴定为灵芝醇A(ganoderiol A)、ganodermadiol和灵芝酮三醇(ganodermanontrio1)。     

HPLC法测定赤芝不同生长期不同部位灵芝酸A的含量

建立测定赤芝中灵芝酸A的HPLC方法,并研究赤芝不同生长期和不同部位灵芝酸A的含量。Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 m),乙腈(A)-0.05 mol·L~(-1)磷酸二氢铵水溶液(B)作为流动相梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min~(-1),柱温25℃,检测波长254 nm。结果表明,灵芝酸A在0.6165 mg~8.16 mg范围内有良好的线性关系;平均回收率为96.1%(n=9)。不同生长期和不同部位灵芝酸A含量有差异:未成熟的灵芝蕾成熟期的子实体,菌盖柄。通过对不同生长期和不同部位灵芝酸A的含量比较分析,为建立赤芝质量标准和合理开发利用提供了参考依据。     

六个灵芝菌株的袋栽比较试验

观察比较六个灵芝菌株在不同培养基上的发菌情况、出芝早晚及子实体的农艺性状等因素,筛选出综合性状较好的信芝、韩国芝、赤芝3个灵芝菌株。     

灵芝子实体中三萜酸的提取及其稳定性

研究不同提取方法对灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体中三萜酸提取率的影响,结果表明,采用乙醇回流法所得三萜酸的提取得率最大,影响提取的关键因素为液料比、提取时间和提取次数;采用Box-Behnken设计及响应面分析法对这3个因素进行优化,并通过回归拟合,建立了预测灵芝三萜酸提取的多项式模型,可预测灵芝子实体中三萜酸提取率的回归模型如下:Y=0.33+0.003125 X1+0.021 X2-0.014 X_3+0.0005 X_1X_2-0.019 X_1X_3-0.005 X_2X_3-0.044 X_(12)-0.040 X_2~2-0.032 X_3~2。经响应面最优分析,获得3个因素的最佳水平为:液料比25∶1,提取时间2h,提取次数3次。经实际试验验证,在该条件下,灵芝子实体三萜酸提取率可达0.335mg/g,与预测值相比,实测值低1.18%。稳定性试验结果表明,在较低温度下(25℃以下),三萜酸化合物较稳定;但在50℃及以上温度条件下,三萜酸存在明显的降解现象,三萜酸的稳定性与温度及保藏时间呈负相关。     

红芝酸性物质的HPLC和薄层层析分析

本文采用ＨＰＬＣ和薄层层析分析法,对红芝子实体和菌丝体的有机溶酸性化合物作了分析。结果表明子实体和菌丝体的酸性化合物种类明显不同,相同的化合物在含量上也存在差异,表明与红芝的生长状态有明显的关系     

超临界CO2萃取灵芝子实体三萜工艺优化及其与醇提法比较研究

采用超临界CO2 (SFE-CO2)技术萃取灵芝(Ganoderma lucidum)子实体中的三萜成分,通过单因素试验和正交试验确定最佳条件为:子实体粒度10目、夹带剂95％乙醇、压力35 Mpa、温度40℃、时间2.5h、CO2流量35 g/min、夹带剂体积:子实体重6:1(mL/g),萃取物的得率为2.42％,总三萜的得率为0.98％,萃取物中三萜的含量为40.5％.与传统的醇提法相比,SFE-CO2法中粗提物和总三萜的萃取率略低,但粗提物中三萜的含量较高,且HPLC研究表明,SFE-CO2的粗提物中三萜的种类较多.     

灵芝活性多糖肽GL-LPP3的化学组成分析

灵芝[Ganoderma lucidum(Curtis:Fr.)P.Karst.]子实体经热水提取,乙醇沉淀,透析,柱层析分离纯化得单一组分GL-LPP3;采用高效凝胶渗透色谱法进行纯度鉴定,使用高效液相色谱法进行相对分子量测定和单糖组成分析,ACCQ-TAG衍生法分析氨基酸组成,红外扫描分析多糖初级结构。结果表明     

Crude Polysaccharide and Triterpene Content of Ganoderma Fruit Bodies at Different Stages of Development

Crude polysaccharide and triterpene levels were determined in the fruit bodies of eleven Lingzhi samples,designated as Ganoderma lucidum,G.capense and G.tsugae,harvested at four different stages of development: budding,elongation,maturation and senescence.In most cases,crude polysaccharide levels were highest at the budding stage,decreased during the elongation stage,increased again at maturation and were lowest at senescence.Triterpene levels generally remained relatively high during the first three develo...     

蛹虫草白化菌株生物学特性及其子实体成分分析

对在栽培蛹虫草(Cordyceps militaris)B6过程中发现的白化菌株AB6的部分生物学特性和所获得的子实体成分进行研究。结果表明,AB6在光照条件下菌丝不变色,其菌丝最佳生长温度为25℃、pH 4.0~6.0。AB6子实体的粗蛋白、粗纤维、水、灰分、总水解氨基酸和粗多糖等成分含量与B6子实体无显著差别;而其灰分和虫草素含量较高,分别为8.29%和12.9 mg/g,均高于退化的白化菌株DAB6和B6的子实体;其黄酮类、虫草酸和腺苷,分别为0.22%、14.8 mg/g和1.16 mg/g,比B6子实体低。     

高效液相色谱法测定食用菌中福美双残留量

建立食用菌中福美双残留量的高效液相色谱(HPLC)检测方法.新鲜食用菌子实体样品粉碎后经二氯甲烷超声(53 Hz)提取20 min,离心(3320 g、5 min),二氯甲烷经氮气吹干,甲醇定容后用HPLC测定.以等体积甲醇和0.1％甲酸水溶液为流动相,1 mL/min等度洗脱,在0.05～10 μg/mL范围内,福美双的峰面积与其浓度呈线性相关,R≥0.999,方法检出限为0.02 mg/kg,添加回收率为79.4％～90.2％,变异系数为1.15％～7.51％％.     

灵芝色素的提取、鉴定及稳定性研究

对灵芝(Ganoderma lucidum)色素进行了提取、纯化和鉴定并对其稳定性进行了初步研究。结果表明:灵芝色素易溶于碱性溶液,不溶于水、氯仿和乙醇等有机溶剂;经紫外-可见光谱和傅里叶红外光谱扫描,初步鉴定灵芝色素属于3,4-二羟基苯丙氨酸类黑色素;20~60℃范围内,黑暗条件,pH 4~8范围内灵芝色素稳定性较好。     

裂褶菌对小鼠抗疲劳作用的研究

以裂褶菌子实体干粉（试验Ⅰ组和试验Ⅱ组）和裂褶菌发酵液（试验Ⅲ组）饲喂小鼠，检测裂褶菌子实体干粉和发酵液对小鼠肝糖原含量、肌糖原含量、琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase，SDH）活力、乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase，LDH）活力、血清尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）含量及血乳酸（lactic acid，LD）含量的影响。结果表明，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组小鼠的肝糖原含量、SDH活力及LDH活力极显著高于对照组（饲喂100％基础饲料）（p〈0．01）；试验Ⅰ组和试验Ⅱ组的肌糖原含量极显著高于对照组（P〈0．01）；运动后试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组小鼠的BUN增量和LD的水平极显著低于对照组（P〈0．01），说明裂褶菌具有明显解除运动疲劳的作用。     

金顶侧耳子实体营养成分分析

测定了4个来自不同地区的金顶侧耳菌株子实体中粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、水分和氨基酸含量。结果表明,供试菌株鲜菇含水量为87.5%~89.7%;干菇中粗蛋白、粗脂肪、粗纤维和氨基酸含量分别为42.3%~47.9%、0.8%~1.9%、10.7%~14.9%和23.68%~25.42%;7种测试人体必需氨基酸(色氨酸未测)含量丰富,其中精氨酸和谷氨酸的含量接近或超过α-酪蛋白和卵蛋白。