赤芝、紫芝和鹿角灵芝醇提物的活性成分及生物活性研究

赤芝、紫芝和鹿角灵芝是三种常见的灵芝。对这三种灵芝的乙醇提取物所作的抗氧化活性比较结果,鹿角灵芝提取物中多酚含量最高,具有较强的抗氧化活性。在提取液0.5～2.0 mg/mL的浓度范围内,赤芝、紫芝和鹿角灵芝的醇提物显示出一定的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性,且未显现浓度的依赖性。     

不同种的灵芝醇提物对肝癌细胞增殖的抑制作用

为探讨7种不同种的灵芝中三萜及甾醇含量及子实体醇提物对人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721增殖的抑制作用,采用紫外-可见分光光度法测定三萜及甾醇含量,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定不同种的灵芝子实体醇提物对肝癌细胞增殖的抑制效果。结果表明:松杉灵芝(Ganoderma tsugae)、黄边灵芝(G.luteomarginatum)、赤芝(G.lucidum)、紫芝(G.sinense)、无柄灵芝(G.resinaceum)、无柄紫灵芝(G.mastoporum)、皱盖假芝(Amauroderma rude)三萜及甾醇含量依次降低,除无柄紫灵芝和皱盖假芝外,其余5种的含量均符合《中华人民共和国药典》的要求;7种灵芝的子实体醇提物均具有抑制HepG2细胞增殖的作用,半抑制率(IC_(50))分别为102.12、143.84、92.17、121.11、92.74、163.11、40.25μg/mL;对于SMMC-7721细胞,除皱盖假芝具有较小的抑制作用外,IC_(50)为166.21μg/mL,其余6种均无明显的抑制作用。7个种中皱盖假芝对肝癌细胞增殖的抑制作用效果最好,但其三萜及甾醇含量却最低,因此推测皱盖假芝的抗肿瘤活性成分可能除三萜及甾醇外还包含其它成分。     

基于偏最小二乘法的赤芝子实体三萜类化合物抗氧化谱效关系的研究

测定了64株赤芝(Ganoderma lucidum)子实体醇提物清除二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的活性和三萜指纹图谱,采用遗传算法筛选其指纹图谱中的26个共有峰,并标定出其中15个特征峰,运用偏最小二乘回归分析方法(partial least squares regression,PLSR)对指纹图谱中26个三萜峰与醇提物清除DPPH自由基的活性进行关联分析,建立了赤芝子实体三萜类化合物的抗氧化谱效关系方程。在赤芝子实体醇提物三萜指纹图谱的26个共有峰中,峰S1、S4、S9、S10和S26的峰面积与醇提物清除DPPH自由基的活性呈显著正相关关系;峰S3、S11、S15、S18、S19、S22和S25的峰面积与醇提物清除DPPH自由基的活性呈显著负相关关系。分别测定鉴定出的15个峰对应的三萜化合物对DPPH自由基的清除活性,发现与清除DPPH自由基活性呈显著正相关的三萜化合物灵芝酸C_2(S4)、灵芝酸B(S9)、灵芝酸LM_2(S10)、灵芝醛A(S26)对DPPH自由基的清除活性明显高于其他三萜化合物,与清除DPPH自由基活性呈显著负相关的三萜化合物灵芝酮三醇(S18)、灵芝萜酮二醇(S22)无清除DPPH自由基的活性。另外,利用H_2O_2诱导的PC12细胞损伤模型进一步验证灵芝酸C_2、灵芝酸B、灵芝酸LM_2、灵芝醛A和灵芝萜酮二醇在细胞水平的抗氧化活性,发现灵芝酸C_2、灵芝酸B、灵芝酸LM_2、灵芝醛A具有明显的保护神经细胞氧化损伤的活性,而灵芝萜酮二醇对神经细胞的氧化损伤无保护作用。结果表明,本研究建立的赤芝子实体三萜类化合物抗氧化谱效关系方程具有较高的准确性,能够较全面地反应赤芝子实体醇提物中不同三萜化合物与其抗氧化活性的相关性,可快速锁定有效成分以指导活性成分的分离纯化工作。此外,该方法也为赤芝子实体的质量控制提供了更为有效和准确的方法。     

灵芝属3个种菌丝生长的最适碳源、氮源及温度比较

通过试验研究5种碳源、氮源和温度对灵芝属(Ganoderma)3个种菌株的菌丝生长速度和长势的影响,其结果表明:试验范围内,灵芝(G.lingzhi)P1、肥城树舌灵芝(G.applanatum)和紫芝(G.sinense)的最适碳源分别为蔗糖、葡萄糖和麦芽糖;3个不同种菌株的最适氮源均为酵母膏;灵芝P1菌丝最适生长温度为25℃,肥城树舌灵芝和紫芝菌丝适宜生长温度范围为25℃~30℃。     

CHO细胞源性二肽基肽酶Ⅳ抑制剂筛选模型的建立及食药用菌活性提取物筛选

建立中国仓鼠卵巢(CHO)细胞来源的二肽基肽酶Ⅳ(Dipeptidyl peptidase IV,DPPIV)抑制剂筛选模型并对多种食药用菌提取物及萃取物抑制DPPIV活性的效果进行研究。以H-甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺(H-Gly-pNA·HCl)为反应底物,通过发色底物法检测CHO细胞来源DPPIV的活性,优化的筛选模型条件为:底物浓度90mmol/L、显色时间60min、孵育温度37℃、pH 7.6,阳性对照药物Ile-Pro-Ile的最佳作用浓度5mmol/L。利用此模型检测供试样品抑制CHO细胞源性DPPIV活性结果表明,鲍姆木层孔菌(Phellinus baumii)和灵芝(Ganoderma lucidum)醇提物的抑制效果明显好于其他7种食用菌;鲍姆木层孔菌及灵芝的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等四种萃取物在10g/mL和100g/mL浓度下均具有一定抑制效果,其中鲍姆木层孔菌及灵芝的乙酸乙酯萃取物抑制效果较好。     

两种无孢灵芝子实体醇提物的比较

以龙芝2号和鹿角灵芝两种无孢灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体为原料,95%乙醇超声提取,对醇提物中的三萜进行了分析和体外抗肿瘤实验。结果表明,两种样品的醇提物得率分别为1.8%和3.7%,醇提物中三萜化合物含量分别为0.53%和1.16%;高效液相结果表明,鹿角灵芝中三萜的种类也多于龙芝2号。两种无孢灵芝的醇提物对肿瘤细胞K562和SW620的增殖均有一定的抑制作用,龙芝2号抑制肿瘤增殖的活性优于鹿角灵芝。     

破壁灵芝孢子粉的制备及体外抗氧化活性研究

超音速气流破壁制备破壁灵芝孢子粉;对破壁与未破壁灵芝孢子粉的醇提物和水提物,分别利用DPPH、ABTS、FRAP、羟自由基的清除能力和超氧阴离子清除能力,测定抗氧化活性。灵芝孢子粉破壁率达到98%以上;灵芝孢子醇提物的抗氧化活性:E1(破壁灵芝孢子粉95%乙醇提取)活性都较高;DPPH、ABTS和羟自由基清除率的EC50较E0(未破壁灵芝孢子粉95%乙醇提取)分别低46.53%、77.11%和69.51%,FRAP值和ORAC值分别高出287.87%和30.18%。灵芝孢子水提物的抗氧化活性:W0(未破壁灵芝孢子水提物)活性都为最低,其他4种水提物抗氧化能力相似。破壁之后的灵芝孢子粉抗氧化活性比未破壁灵芝孢子粉高;但破壁灵芝孢子由于直接接触空气,因此,放置时其活性物质极易变质。     

灵芝及其同属的几个种的营养生理的研究

测定了灵芝、紫芝、白芝、薄树芝在阔叶树锯木屑上生长0-60天期间,基物失重,木质纤维素降解和几种胞外多糖分解酶的活性变化。结果表明: 1.灵芝、紫芝、白芝、蒋树芝是很强的木材腐朽菌,它们能够分解木质纤维素中的全部组分。以灵芝分解能力为最强,培养56天时,基物失重76.70％,呼吸消耗有机质达54.01％,转化为子实体的有机质为22.69％(灰分忽略不计)。56天期间,基物中木素,半纤维素和纤维素分别降解了78.66％、85.51％和86.41％。 2.灵芝菌体后期生长发育所需要的营非物质约有1/2左右是由基物中木质纤维索的降解所提供,另1/2左右是来源于基物中的营养菌丝。由此可见,灵芝苗丝体发育期的营养代谢和子实体发育期本质纤维素的分解代谢都将影响着子实体的生长发育。 3.4个菌株的CMC酶和半纤维素酶的活性大小及在栽培过程中的动态变化规律趋于一致。但淀粉酶活的大小和在栽培过程中的动态变化有明显的差异。     

超临界CO2萃取灵芝子实体三萜工艺优化及其与醇提法比较研究

采用超临界CO2 (SFE-CO2)技术萃取灵芝(Ganoderma lucidum)子实体中的三萜成分,通过单因素试验和正交试验确定最佳条件为:子实体粒度10目、夹带剂95％乙醇、压力35 Mpa、温度40℃、时间2.5h、CO2流量35 g/min、夹带剂体积:子实体重6:1(mL/g),萃取物的得率为2.42％,总三萜的得率为0.98％,萃取物中三萜的含量为40.5％.与传统的醇提法相比,SFE-CO2法中粗提物和总三萜的萃取率略低,但粗提物中三萜的含量较高,且HPLC研究表明,SFE-CO2的粗提物中三萜的种类较多.     

西藏白肉灵芝栽培关键技术

<正>市场上的灵芝或者灵芝产品主要是赤芝(Ganoderma lucidum)、紫芝和松杉灵芝。白肉灵芝(Ganoderma leucocontextum)是新发现的种类~([1])。西藏自治区农牧科学院蔬菜研究所与中国科学院微生物研究所合作开展的白肉灵芝活性物质分析与功效研究[5],目前白肉灵芝药效作用也成为学术研究的热点~([2,3])。为实现西藏白肉灵芝产业品牌化发展,规范化繁育菌种和标准化栽培提供技术支持,笔者总结     

植物生长调节剂对珠芽黄魔芋叶柄离体培养效果的影响

以珠芽黄魔芋无根组培苗的叶柄为外植体材料,通过正交实验法研究了植物生长调节剂对其愈伤组织诱导、不定芽诱导、继代增殖的影响并进行生根试验,以期建立珠芽黄魔芋叶柄离体快繁体系。结果表明:2,4-D、6-BA及NAA对愈伤组织诱导率的影响差异达极显著水平(P<0.01),影响效应主次顺序为2,4-D>NAA>6-BA,优组合为2,4-D 0.5 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.4 mg·L-1;IAA、6-BA、GA3及TDZ对平均不定芽数的影响达极显著水平(P<0.01),影响效果主次顺序为TDZ>6-BA>IAA>GA3,优组合为IAA 0.6 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+TDZ 0.02 mg·L-1+GA30 mg·L-1,平均不定芽数为4.88个,生长良好;6-BA及GA3对不定芽增殖系数的影响达极显著水平(P<0.01),而IAA的影响不显著(P>0.05),影响效应主次顺序为GA3>6-BA>IAA,优组合6-BA 2.0 mg·L-1+IAA 0.6 mg·L-1+GA30 mg·L-1,增殖系数高达4.54;单独附加NAA 0.5 mg·L-1的1/2MS利于不定根的分化,生根率高达99.33%,平均根数为8.20条,平均根长为3.37 cm,根系效果指数为0.046。     

高温胁迫下茄子qRT-PCR内参基因筛选及稳定性分析

为筛选茄子(Solanum melongena L.)高温胁迫下稳定表达的内参基因,以不同茄子品系(种)为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术对来自茄子高温胁迫转录组数据库8个候选内参基因(SmEF1a、SmEF2、Sm40s RPS29、Sm60s RPL24、SmTRX、SmCK I、SmDAHPS I、SmUCP)和SmActin在不同试验情况下进行表达检测,并结合GeNorm、Norm Finder、Best Keeper和ReFinder软件综合评价9个内参基因的表达稳定性。结果表明,在茄子热敏品系05-1和耐热品系05-4经高温处理不同时间的样品和不同组织样品以及10个耐热性不同的茄子品系(种)中,9个内参基因的表达丰度及稳定性存在差异;茄子热敏品系05-1和耐热品系05-4高温胁迫处理不同时间样品中表达稳定性最好的是SmEF1a和SmUCP;其不同组织中表达水平最稳定的是SmEF1a和SmTRX;高温胁迫下不同茄子品系(种)中以SmTRX和SmEF2的表达稳定性最好。综合来看,SmEF1a和SmTRX在所有茄子试验样品中的表达稳定性最好,而SmActin和SmCK I的表达稳定性较差。     

Reciprocal difference of interspecific hybridization between three different colours of Iris dichotoma and I. domestica

Previously, we found that reciprocal F₁ hybrids of purple-flowered Iris dichotoma and I. domestica were different. To further characterize this reciprocal difference, we carried out reciprocal crosses between three different colours of I. dichotoma and I. domestica. Morphological and cytological characters of F₁ hybrids of six interspecific crosses between three different colours of I. dichotoma and I. domestica (three direct and their three reciprocals) were evaluated. The results showed that the fruit-setting rates of three different colours of I. dichotoma as female and I. domestica as male were lower than reciprocal cross combinations, but their seed germination rates were significantly higher than reciprocal ones. Reciprocal differences of F₁ hybrids were observed for most morphological characters. The F₁ hybrids of three different colours of I. dichotoma as female were totally different from their parents; however, the F₁ hybrids of I. domestica as female were extremely similar to the mother. The six interspecific hybrids had the same chromosome number (2n = 32) as their parents. Reciprocal differences were detected for karyotype. Parents’ and F₁ hybrids’ karyotypes focused on 1A to 2B. In these cases, the direction of the cross must be kept in mind in order to improve the efficacy of future breeding programmes.     

石蒜属植物实时荧光定量PCR内参基因的选择

以石蒜属植物换锦花（Lycoris sprengeri）、石蒜（Lycoris radiata）和中国石蒜（Lycoris chinensis Traub）不同组织器官、不同花发育时期以及不同杂交种的幼小鳞茎为研究材料,利用qRT-PCR技术检测Actin、EF-1α、GAPDH、5S rRNA、Ubiquitin和β-Tubulin等6个内参基因的mRNA表达情况,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper和Reffinder软件综合评价6个内参基因的表达稳定性。结果表明,石蒜属植物种间和种内内参基因表达差异明显,在分析换锦花不同组织基因表达时可选用β-Tubulin、Actin和GAPDH作为内参基因,分析不同花期的基因表达时宜选用5S rRNA、EF-1α、Actin和β-Tubulin作内参基因。中国石蒜不同组织最合适的内参基因是5S rRNA、Ubiquitin、EF-1α和β-Tubulin,而不同花期最合适的内参基因则是Ubiquitin、β-Tubulin。分析石蒜不同组织间基因表达的适宜内参基因是β-Tubulin和5S rRNA,不同花期为Ubiquitin、β-Tubulin以及5S rRNA。不同杂交种鳞茎适宜内参基因为β-Tubulin和Actin。     

杜鹃组培苗的练苗技术研究

以映山红杜鹃的叶片通过无菌培养获得的组培苗为材料,研究了不同育苗基质、不同覆盖措施、施用不同肥料对其练苗效果的影响,以期筛选最适宜的练苗条件。结果表明:练苗基质最适配比是腐殖土∶锯末∶珍珠岩=3∶1∶1;最适覆盖方式为透光率25%遮阳网直接覆盖;采用0.1尿素+0.1%KH2PO4效果最佳,苗木成活率最高。     

法兰地草莓花药培养技术研究

以法兰地草莓为试材,研究了不同6-BA浓度、不同碳源、不同基本培养基对法兰地草莓花药愈伤组织诱导的影响,不同组合的细胞分裂素对愈伤组织诱导分化的影响.结果表明:6-BA浓度1 mg/L、麦芽糖作碳源、MS为基本培养基最适合法兰地草莓愈伤组织诱导.细胞分裂素以6-BA 2 mg/L+ZT 2mg/L组合最适合诱导不定芽分化.试验中观察到:法兰地草莓花药直接接种于MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L+麦芽糖30 g/L的培养基上,70 d后可直接诱导出不定芽,其分化率高达11%.     

茄子SmNAC1 基因的克隆与表达分析

 以茄子幼苗为试材,利用cDNA 末端快速扩增（RACE）技术获得SmNAC1 基因全长,并利 用RT-qPCR 技术检测该基因在GA、4 ℃低温、NaCl 处理下的时空表达。结果显示：SmNAC1 全长序列 1 279 bp,开放阅读框为909 bp,编码302 个氨基酸,推测其蛋白质分子量约35.04 kD;SmNAC1 含有 NAC 家族的N 端保守域,与番茄、马铃薯同源性高达90%。SmNAC1 受GA、低温和高盐诱导,表达上 调,但在根、茎、叶中的表达量有差异,在根中表达水平整体高于茎和叶中,显示SmNAC1 在根中优势 表达,且短时间（0.5 ~ 1 h）相对表达量较高,而在茎和叶中应答相对迟缓,且叶中表达水平趋于稳定。 可见SmNAC1 可能参与了茄子对外源GA 诱导的响应及对低温、高盐胁迫的耐受调节过程。     

不同因素对矮牵牛离体开花的影响

以矮牵牛组培苗为试材,在12、16 h光照备件下,研究不同培养基MS、1/2MS及1/2MS添加0、10、25、50、100 mg/L浓度的阿司匹林(ASP)对矮牵牛离体开花的影响.结果表明:在16 h光照条件下,采用1/2MS培养基培养矮牵牛离体开花效果最佳;阿司匹林对矮牵牛离体开花无明显的促进作用,且随着浓度升高,对植株的生长有抑制作用.     

Rosuvastatin inhibits up-regulation of inflammatory factors in endothelial outgrowth cells induced by C-reactive protein

AIM：To study the effects of rosuvastatin on C-reactive protein (CRP)-induced expression of inflammatory factors in endothelial outgrowth cells (EOCs). METHODS：Mononuclear cells (MNCs) were isolated from human umbilical cord blood by density gradient centrifugation. EOCs were treated with CRP at concentration of 5, 10, 25 and 50 mg/L and were exposed to 50 mg/L CRP for different time (0, 3, 6 and 12 h). In addition, EOCs were pre-incubated with rosuvastatin at different concentrations (10-8, 10-7 and 10-6mol/L) for 12 h and then stimulated with 50 mg/L CRP. The mRNA levels of IL-8, MCP-1, VCAM-1 and ICAM-1 in EOCs were measured by quantitative PCR. The protein levels of MCP-1 and VCAM-1 were detected by ELISA. RESULTS：CRP dose-dependently increased the mRNA levels of inflammatory factors (IL-8, MCP-1, VCAM-1 and ICAM-1) and protein levels of MCP-1 and VCAM-1. The mRNA levels of IL-8, VCAM-1, and ICAM-1 in EOCs reached to the peak at 6 h, while MCP-1 peaked at 3 h when treated with 50 mg/L CRP. The protein levels of MCP-1 and VCAM-1 increased in a time-dependent manner. The mRNA and protein levels of the inflammatory factors were significantly decreased by treatment with rosuvastatin at different concentrations. CONCLUSION：CRP is not just an inflammatory marker as CRP induces inflammation in EOCs. Rosuvastatin attenuates CRP-induced inflammatory response in EOCs, indicating a new target for the prevention of atherosclerosis.     

Effects of ERK1/2/PPARα/SCAD signal pathways on physiological cardiac hypertrophy and pathological cardiac hypertrophy

AIM：To investigate the different effects of ERK1/2/PPARα/SCAD (short-chain acyl-CoA dehydrogenase) signal pathways on the cardiac hypertrophy induced by insulin-like growth factors 1 (IGF-1) or phenylephrine (PE). METHODS：The neonatal rat cardiomyocytes induced by IGF-1 were used as the model of physiological cardiac hypertrophy, and those induced by PE were used as the model of pathological cardiac hypertrophy. The surface area of the cardiomyocytes, the expression of p-ERK1/2, PPARα and SCAD, the activity of SCAD and the content of free fatty acid in the cardiomyocytes were measured. RESULTS：Compared with the control cells, the surface area of the cardiomyocytes induced by IGF-1 and PE were both increased. Compared with the controls, the expression of SCAD and PPARα, and the activity of SCAD in the cardiomyocytes induced by IGF-1 were increased, while the expression of p-ERK1/2 was decreased. However, the cardiomyocytes treated with PE showed decreased expression of SCAD and PPARα, decreased activity of SCAD and increased expression of p-ERK1/2. Meanwhile, the decrease in free fatty acid in IGF-1-induced cardiomyocytes and the increase in PE-induced cardiomyocytes indicated that the fatty acid utilization was increased in the cardiomyocytes induced by IGF-1, but decreased in the cardiomyocytes induced by PE. CONCLUSION：The changes of p-ERK1/2, PPARα and SCAD in the cardiac hypertrophy induced by IGF-1 or PE indicate that the effects of ERK1/2/PPARα/SCAD signal pathways are different between physiological cardiac hypertrophy and pathological cardiac hypertrophy, and that SCAD may be a molecular marker of these 2 different cardiac hypertrophies and a potential therapeutic target for pathological cardiac hypertrophy.