不同生长期灵芝子实体三萜酸和多糖含量测定

分别采用HPLC法和药典法测定不同生长期灵芝子实体中三萜酸和灵芝多糖的含量。HPLC法色谱条件:色谱柱为Alltech Alltima C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04%甲酸溶液,检测波长254 nm,流速1.0 m L/min,柱温15℃。结果:灵芝酸C_2、灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝酸B、灵芝烯酸A、灵芝酸A、灵芝酸D、灵芝烯酸D和灵芝酸C_1的线性范围为5.9~42.0μg/m L,r为0.999,加样回收率为96.42%~104.14%。表现方法可行、重现性好,能定量测定灵芝中三萜酸和多糖的含量。     

三种因素对“沪农灵芝1号”子实体三萜的影响

以8种灵芝三萜标准品为对照,考察栽培生境、栽培方式、采收时期三种因素对我国灵芝主栽品种“沪农灵芝1号”子实体中三萜含量和指纹图谱的影响.结果表明,三种因素对灵芝子实体中的三萜含量具有显著影响,福建栽培所得灵芝子实体中三萜含量较高,代料栽培子实体三萜含量显著高于段木栽培,成熟期灵芝子实体的三萜含量较高;随着孢子粉采收时间的延长,子实体中三萜含量逐渐降低,但是各因素对灵芝子实体中三萜指纹图谱信息无显著影响,相似度均在0.93以上.     

废弃葡萄枝蔓栽培灵芝的适宜菌株筛选

为筛选适合以葡萄枝屑替代部分木屑为原料进行栽培的优良灵芝菌株,采用果园废弃的葡萄枝屑为主料,对8个灵芝菌株进行栽培试验,考察产量和生物转化率等指标,并检测其子实体和孢子的灵芝多糖及三萜含量,进行综合评分。结果:子实体和孢子产量、生物转化率、子实体和孢子的三萜含量均以GH8为好,其综合评分为83.24,也最高;子实体多糖则以圆8较高。8个菌株的多糖和三萜酸含量均超出国家药典标准。因此GH8可作为葡萄枝屑栽培灵芝的适宜菌株。     

基于偏最小二乘法的赤芝子实体三萜类化合物抗氧化谱效关系的研究

测定了64株赤芝(Ganoderma lucidum)子实体醇提物清除二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的活性和三萜指纹图谱,采用遗传算法筛选其指纹图谱中的26个共有峰,并标定出其中15个特征峰,运用偏最小二乘回归分析方法(partial least squares regression,PLSR)对指纹图谱中26个三萜峰与醇提物清除DPPH自由基的活性进行关联分析,建立了赤芝子实体三萜类化合物的抗氧化谱效关系方程。在赤芝子实体醇提物三萜指纹图谱的26个共有峰中,峰S1、S4、S9、S10和S26的峰面积与醇提物清除DPPH自由基的活性呈显著正相关关系;峰S3、S11、S15、S18、S19、S22和S25的峰面积与醇提物清除DPPH自由基的活性呈显著负相关关系。分别测定鉴定出的15个峰对应的三萜化合物对DPPH自由基的清除活性,发现与清除DPPH自由基活性呈显著正相关的三萜化合物灵芝酸C_2(S4)、灵芝酸B(S9)、灵芝酸LM_2(S10)、灵芝醛A(S26)对DPPH自由基的清除活性明显高于其他三萜化合物,与清除DPPH自由基活性呈显著负相关的三萜化合物灵芝酮三醇(S18)、灵芝萜酮二醇(S22)无清除DPPH自由基的活性。另外,利用H_2O_2诱导的PC12细胞损伤模型进一步验证灵芝酸C_2、灵芝酸B、灵芝酸LM_2、灵芝醛A和灵芝萜酮二醇在细胞水平的抗氧化活性,发现灵芝酸C_2、灵芝酸B、灵芝酸LM_2、灵芝醛A具有明显的保护神经细胞氧化损伤的活性,而灵芝萜酮二醇对神经细胞的氧化损伤无保护作用。结果表明,本研究建立的赤芝子实体三萜类化合物抗氧化谱效关系方程具有较高的准确性,能够较全面地反应赤芝子实体醇提物中不同三萜化合物与其抗氧化活性的相关性,可快速锁定有效成分以指导活性成分的分离纯化工作。此外,该方法也为赤芝子实体的质量控制提供了更为有效和准确的方法。     

四种灵芝产品中多糖和三萜含量的比较

以市场上的灵芝破壁孢子粉、未破壁孢子粉、子实体和精粉共4种灵芝产品为研究对象,比较分析其活性成分三萜和多糖含量的差异。应用光学显微镜比较破壁孢子粉与未破壁孢子粉的差别、热水浸提法提取多糖、苯酚-硫酸法测定多糖含量、醇提法提取三萜、香草醛-冰醋酸法测定三萜含量、高效液相色谱法(HPLC)检测灵芝酸。结果显示精粉中多糖含量为52.40 mg·g~(-1),显著高于其他三者,破壁与未破壁孢子粉多糖含量为(21.32±1.11)mg·g~(-1),差异不显著,但高于子实体的9.83 mg·g~(-1)。而子实体中三萜含量却是最高的,为4.97 mg·g~(-1),破壁孢子粉中三萜含量为2.23 mg·g~(-1),明显高于未破壁的1.10 mg·g~(-1)。通过对比4种产品的三萜指纹图谱发现,子实体和精粉中的灵芝酸种类远远多于破壁及未破壁孢子粉中的,且不同产品中有相同的组分。     

适合孢子粉高产的赤灵芝栽培配方筛选

为充分利用湛江市本地甘蔗渣、桑屑枝条、土沉香渣等秸秆资源，降低赤灵芝生产对木材原料的依赖，通过研究3个配方菌丝生长速度、子实体和孢子粉产量、品质(多糖、三萜)、抗氧化活性等，筛选出适合本地的优良赤灵芝栽培配方。结果显示，添加了甘蔗渣的配方2，菌丝生长速度最快(0.75 cm·d^-1)，孢子粉产量最高(14.45 g/袋)，且多糖和三萜总含量也高于其他2个配方。添加土沉香渣的配方3，菌盖直径(7.55 cm)、子实体鲜质量(36.79 g/袋)、总产量最高，但多糖和三萜总含量不如其他2个配方。添加了桑屑的配方1，赤灵芝的总抗氧化活性稍高于其他2个配方，但无显著差异。3个配方下子实体的三萜含量高于孢子粉，而孢子粉的多糖含量高于子实体。综合分析，配方2是实现梅灵3号灵芝孢子粉高产的较优栽培配方，适合在当地推广应用。     

不同灵芝中粗多糖含量的比较研究

本实验利用苯酚－硫酸法对同一菌种液体发酵的菌丝体、不同生长阶段的子实体及其孢子粉中的粗多糖的含量进行了分析，发现灵芝菌丝体中粗多糖的含量明显高于灵芝子实体和孢子粉中的含量，菌丝体中粗多糖含量是灵芝老化期子实体中粗多糖含量的6倍，是灵芝孢子粉中粗多糖含量的2．8倍。而粗多糖在灵芝子实体的生长过程中呈逐渐下降的趋势。另外，不同品种的灵芝子实体中多糖含量存在一定的差异，其中南韩灵芝最高，达到1．58％，而紫灵芝中粗多糖的含量相对较低，为1．05％。     

不同来源赤芝活性成分分析及质量评价

分别采用高效液相色谱仪、荧光分光光度计、紫外-可见分光光度计测定13批不同来源赤芝（Ganoderma lucidum）子实体的多糖、总三萜中甾醇、灵芝酸C2、灵芝酸B、灵芝酸A、灵芝酸E、灵芝酮三醇、灵芝萜烯二醇以及硒的含量，并基于熵权逼近理想解排序法（technique for order preference by similarity to an idealsolution, TOPSIS）对上述测定指标进行数据分析，综合评价产品质量。结果表明，基于液相色谱分析建立的6种三萜化合物含量测定方法具有较高的灵敏度与准确度；熵权TOPSIS评价模型快速、灵敏、有效，与主成分分析评价模型结论基本一致，能全面、客观地评价赤芝药材质量，可为赤芝品质分析与综合评价提供参考。     

灵芝新型固体发酵菌质中活性成分的研究

以中药渣为主要培养基质，对灵芝新型固体发酵菌质中多糖和氨基酸含量进行测定分析。结果表明灵芝药渣菌质中多糖含量是子实体中含量的2．4倍，氨基酸总量是子实体中含量的2．64倍，必需氨基酸是子实体中的2．67倍。试验表明：药渣菌质能促进灵芝菌丝生长，发菌快、长势好。从灵芝药渣菌质中提取有效成分，具有原料资源丰富，方法简便，功能成分丰富等特点。     

灵芝子实体中三萜酸的提取及其稳定性

研究不同提取方法对灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体中三萜酸提取率的影响,结果表明,采用乙醇回流法所得三萜酸的提取得率最大,影响提取的关键因素为液料比、提取时间和提取次数;采用Box-Behnken设计及响应面分析法对这3个因素进行优化,并通过回归拟合,建立了预测灵芝三萜酸提取的多项式模型,可预测灵芝子实体中三萜酸提取率的回归模型如下:Y=0.33+0.003125 X1+0.021 X2-0.014 X_3+0.0005 X_1X_2-0.019 X_1X_3-0.005 X_2X_3-0.044 X_(12)-0.040 X_2~2-0.032 X_3~2。经响应面最优分析,获得3个因素的最佳水平为:液料比25∶1,提取时间2h,提取次数3次。经实际试验验证,在该条件下,灵芝子实体三萜酸提取率可达0.335mg/g,与预测值相比,实测值低1.18%。稳定性试验结果表明,在较低温度下(25℃以下),三萜酸化合物较稳定;但在50℃及以上温度条件下,三萜酸存在明显的降解现象,三萜酸的稳定性与温度及保藏时间呈负相关。     

灵芝孢子粉脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱构建及含量测定

以16批（S1～S16）不同来源的灵芝（Ganoderma lucidum）孢子粉为材料，构建灵芝孢子粉脂质成分高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）指纹图谱，将S1～S16的HPLC-ELSD指纹图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版），指认共有峰和评价相似度，采用HPLC-ELSD测定S1～S16中亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇含量。结果表明：共指认4个共有峰，分别为亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇；除S14外，其他15批灵芝孢子粉中脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱相似度高，较为稳定；不同来源的灵芝孢子粉中亚油酸、棕榈酸和油酸的含量差异较大，麦角甾醇含量较为稳定。     

滇中灵芝和可食灵芝生物学特性及驯化

采用单因素实验和正交实验研究滇中灵芝（Ganoderma dianzhongense）和可食灵芝（G. esculentum）菌株的生物学特性，并进行驯化，测定其农艺性状和子实体的主要活性成分。结果表明：滇中灵芝菌丝生长最适碳源、氮源和无机盐分别为葡萄糖、酵母粉和三氯化铁，最适p H为6.0，最适培养温度为26℃；可食灵芝菌丝生长最适碳源、氮源和无机盐分别为麦芽糖、硫酸铵和三氯化铁，最适pH为5.0，最适培养温度为28℃。通过小孔开袋覆土栽培法，首次成功获得滇中灵芝和可食灵芝子实体，滇中灵芝菌株的生物学效率为12.08%，子实体总三萜和多糖含量分别为1.05%和0.91%；可食灵芝菌株的生物学效率为8.97%，子实体总三萜和多糖含量分别为1.13%和0.97%。研究结果可为云南高原特色灵芝资源发掘利用、新品种选育提供有益参考。     

空气中CO_2浓度对灵芝三萜的影响及其分子机制研究

灵芝作为1种比较名贵的菌类药材,目前已经能实现大规模的人工栽培。通过控制CO_2浓度来研究空气中CO_2浓度对灵芝生长发育过程中药用成分灵芝三萜的影响,并对空气中CO_2浓度对三萜含量影响做了初步的分子机制研究。试验结果表明,随着空气中CO_2浓度的提高,子实体三萜含量在生长各个阶段均逐渐升高。在灵芝子实体发育的早期,空气中CO_2浓度对总三萜含量的影响更加显著。但过高的CO_2浓度会使子实体形态呈现细长的鹿角状;空气中CO_2浓度对灵芝三萜含量累积的影响可能是通过影响基因ls表达量的上调实现的。     

灵芝菌丝水提物活性成分分析研究

目的：研究分析灵芝菌丝水提物的活性成分及含量。方法：按照国家药典及有关标准检测方法,检测灵芝菌丝水提物多糖、三萜及甾醇、灵芝酸、腺苷、氨基酸、微量元素、农药残留及毒素的含量。结果：灵芝菌丝水提物多糖质量分数为0.43%,三萜及甾醇质量分数为0.18%,灵芝酸A、D、F、G及腺苷质量分数分别为7.2μg/g、6.9μg/g、32.0μg/g、12.6μg/g、42.1μg/g,含有16种氨基酸,总质量分数为13.7 g/100 g,含硒、硼、锌等12种微量元素,农药残留及黄曲霉毒素未检出。结论：灵芝菌丝水提物无毒安全,含有多糖、三萜、甾醇、灵芝酸等多种活性成分,可被开发为一种食品新资源。     

38株灵芝子实体抗肿瘤质量的生物评价

针对38株灵芝子实体样品,开展醇提物抑制He La、SK-OV-3肿瘤细胞增殖活性和三萜含量测定研究,对其抗肿瘤质量进行评价,筛选具有开发抗肿瘤产品潜力的优质菌株。实验结果表明,33号、34号2株灵芝对He La细胞和SK-OV-3细胞均具有较强的杀伤作用,对2株细胞增殖抑制IC50分别为16.55μg·m L-1、10.2μg·m L-1和31.9μg·m L-1、30.64μg·m L-1,可作为优质资源进行进一步开发。各菌株灵芝子实体的三萜含量在1.372 mg·g-1~6.184 mg·g-1之间,不同菌株子实体间三萜含量差异较大,细胞增殖抑制活性与三萜含量间不具有相关性,提示灵芝抗肿瘤原料质量评价宜考虑补充生物质量评价方法。     

原木灵芝孢子研究：（Ⅲ）与木屑袋栽灵芝孢子的鉴别

原木灵芝孢子与木屑袋栽灵芝孢子可以鉴别如下:1.在扫描电镜下,前者形态饱满,后者大多数孢壁内陷;2.X-射线能谱面扫描分析结果表明,两者Mg、Al、Si、P、S、Cl、K、Ca、Fe、Ni等无机元素相对含量差异显著,前者Si、Ca含量较高;3.高效液相色谱分析结果表明,前者灵芝酸(Ganoderic acid)A、B等灵芝三萜酸含量较高,而后者未检出Ganoderic acid C;4.孢子粉经乙醚脱脂后用乙醇回流提取、浓缩成浸膏,前者提取率(固形物含量)达4.2％～4.8％,而后者仅为1.9％～2.1％。     

基于牛蒡根的灵芝固体发酵菌质化学成分的初步分析

以牛蒡根为发酵基质,初步探究灵芝固体发酵所获菌质中多种化学成分的变化。利用可见分光光度计、高效液相色谱仪及定氮仪等测定了牛蒡根原药材和牛蒡根灵芝菌质中多糖、总三萜酸、总黄酮、核苷及蛋白质含量,并进行HPLC指纹图谱分析。牛蒡根经灵芝菌丝体发酵后,多糖含量由9.94%降低至2.76%,总三萜酸含量从无升高至0.14 mg·g~(-1),总黄酮含量由3.47%降低至0.34%,4种核苷总量由861.05μg·g~(-1)升高到1 113.49μg·g~(-1),且新合成了腺苷,蛋白质含量由13.38%升高至17.28%。HPLC指纹图谱显示牛蒡根在灵芝发酵前后化学成分差异较大。灵芝固体发酵使牛蒡根多糖和黄酮含量降低,核苷和蛋白质含量升高,并新产生三萜酸和腺苷,具有明显的生物转化作用。     

超临界CO2萃取灵芝子实体三萜工艺优化及其与醇提法比较研究

采用超临界CO2 (SFE-CO2)技术萃取灵芝(Ganoderma lucidum)子实体中的三萜成分,通过单因素试验和正交试验确定最佳条件为:子实体粒度10目、夹带剂95％乙醇、压力35 Mpa、温度40℃、时间2.5h、CO2流量35 g/min、夹带剂体积:子实体重6:1(mL/g),萃取物的得率为2.42％,总三萜的得率为0.98％,萃取物中三萜的含量为40.5％.与传统的醇提法相比,SFE-CO2法中粗提物和总三萜的萃取率略低,但粗提物中三萜的含量较高,且HPLC研究表明,SFE-CO2的粗提物中三萜的种类较多.     

灵芝液体富硒深层培养时间与菌丝产量及品质的关系

目的:研究灵芝液体富硒深层培养时间与产量及品质的关系,寻求最佳培养时间,达到最优品质和最高产量;方法:试验设四处理,间隔5 d测定各处理生物产量、多糖、三萜化合物和硒含量;结果:随着培养时间的延长,灵芝生物产量提高,多糖和三萜化合物含量以及硒含量也相应提高,但品种间差异较大,生物产量与多糖含量相差近1倍,硒含量相差三分之一。结论:灵芝液体富硒深层培养时间以2周为宜。     

五种五指山野生灵芝培养基筛选及活性成分分析

以五指山野生灵芝1号、2号、3号、4号、5号和对照7号灵芝为材料,研究4种母种培养基配方和4种原种培养基配方对野生灵芝菌种菌丝生长速度和生长势的影响,并比较分析不同灵芝品种中灵芝蛋白、多糖、三萜的含量。结果显示,在4种母种培养基上,菌丝生长速度的差异极显著,生长速度最快和生长势最强的是培养基配方B(PDA+木屑),最差的是配方D(PSA);在4种原种培养基上,生长速度和生长势强弱的先后顺序为配方3配方4配方2配方1;在5种野生灵芝中,灵芝多糖、蛋白质、三萜含量最高的分别是5号(0.732 mg·g~(-1))、2号(0.088 mg·g~(-1))、5号(1.193 mg·g~(-1)),3种成分综合含量最高的是5号。该试验为五指山野生灵芝的开发利用提供了参考依据。