犬瘟热病毒免疫蛋鸡血清抗体与卵黄抗体消长规律的研究

试验旨在了解产蛋鸡对犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)抗原的免疫反应及其血清抗体和卵黄抗体的消长规律,为制备卵黄抗体提供依据。将CDV接种Vero细胞和DF1细胞进行传代并测定其病毒滴度,选取细胞病变出现早、病毒滴度高的Vero细胞毒作为接种病毒抗原免疫蛋鸡。每10 d免疫蛋鸡1次,第4次免疫后每30 d加强免疫1次。免疫前及免疫后每10 d采血分离血清,每5 d收集鸡蛋提取卵黄抗体,用琼脂扩散法和间接ELISA法测定其抗体水平。结果显示,血清抗体比卵黄抗体的滴度高,两者呈正相关性,卵黄抗体出现较血清抗体迟3~5 d,卵黄抗体在第3次免疫后3~5 d就已达到较高水平,此时即可开始收集鸡蛋制备卵黄抗体。     

禽流感血清抗体与卵黄抗体消长规律比较研究

应用禽流感病毒二价（H5、H9）油乳剂灭活疫苗免疫160日龄非免疫蛋鸡，免疫接种后分别于第0、7、14、21、28、35 d采集相应的鸡蛋和血清，采用血凝抑制(HI)试验监测血清及卵黄中H5、H9抗体的消长规律，结果表明：H5、H9血清抗体于免疫后7 d时开始产生，14 d时到中等水平，21 d时达到最高值，一直维持到35 d之后；而H5、H9卵黄抗体与血清抗体水平相比相对滞后7 d左右；卵黄抗体与血清抗体在28 d时均达到高峰值并一直维持到35 d之后，28 d后血清和卵黄抗体达到相同水平。本研究为临床上以禽流感卵黄抗体检测替代血清抗体检测及以后禽流感高免卵黄抗体的研究提供了依据和数据。     

鸭坦布苏病毒冻干高免卵黄抗体的研制

本研究用鸭坦布苏病毒病灭活苗三次免疫SPF蛋鸡,收取高免鸡蛋,制备成冻干高免卵黄抗体;用鸡胚中和试验和间接ELISA方法进行效价检测。试验结果显示,第3次免疫后2周,卵黄抗体中和效价为1∶103.5,4、5周达到最高值1∶104.5;间接ELISA方法检测冻干前后的抗体效价结果均为阳性;对鸭坦布苏病毒强毒的攻毒保护率达100%,可为鸭坦布苏病毒的防控提供一种有效的冻干高免卵黄抗体制剂。     

鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体最佳免疫程序及检测方法的筛选

为了获得高效价鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体,试验通过设计免疫程序免疫试验蛋鸡和筛选的卵黄抗体效价检测方法对氯仿法提取的卵黄抗体液进行鸡抗犬瘟热卵黄抗体效价检测并比较,筛选鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体最佳免疫程序,并作无菌与保存条件的探讨。结果表明:血凝及血凝抑制试验可作为鸡抗犬瘟热卵黄抗体效价的检测方法;按照基础免疫、加强免疫、强化免疫均间隔9 d,免疫剂量分别为1 m L/次、2 m L/次、3 m L/次的免疫程序能获得1∶512的鸡抗犬瘟热病毒卵黄抗体血凝抑制效价,为此次探讨的鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体最佳免疫程序,-20℃保存温度适合长期保存氯仿法粗提的鸡抗犬瘟热病毒卵黄抗体液。     

鸡新城疫卵黄抗体效价动态变化情况研究

选取150日龄健康产蛋母鸡40羽,肌肉注射鸡新城疫Lasota疫苗2倍剂量/羽,10 d后再注射鸡新城疫油乳剂灭活苗4倍剂量/羽,自由采食和饮水。分别收集免疫前、免疫后10、20、30、40和50 d,母鸡所产鸡蛋提取卵黄抗体,测定不同时间卵黄抗体效价。结果发现免疫前卵黄抗体效价较低,鸡新城疫Lasota疫苗免疫后卵黄抗体效价开始缓慢升高,鸡新城疫油乳剂灭活苗加强免疫后卵黄抗体效价大幅度提高,并在二免后20 d卵黄抗体效价达到高峰,维持一段时间后卵黄抗体效价开始逐步下降。表明收集鸡新城疫疫苗二免后20 d左右的鸡蛋提取卵黄抗体效价高。     

猪链球菌Ⅱ型高免卵黄抗体粉的研制

试验用猪链球菌Ⅱ型CVCC606株制备疫苗免疫产蛋鸡,首免后7d检测到低水平的卵黄抗体,再经3次强化免疫,于末次免疫后7d卵黄抗体效价达到9log2,最高效价达到10log2,高水平卵黄抗体可维持到末次免疫后50d,随后出现下降。收集抗体效价大于9log2的高免蛋卵黄,经喷雾干燥成卵黄抗体粉,效价在10log2以上,卵黄抗体粉质量稳定,于室温(25℃)保存6个月抗体水平无明显降低。体外抑菌试验表明,高免卵黄抗体粉可有效抑制猪链球菌Ⅱ型CVCC606株和猪链球菌II型强毒分离株。高免卵黄抗体粉可有效预防猪链球菌Ⅱ型菌株对BALB/c小鼠的致死性感染。     

抗猪大肠杆菌卵黄抗体变化规律及在体外对大肠杆菌生长的影响

试验研究抗猪大肠杆菌卵黄抗体变化规律及在体外对大肠杆菌生长和对肠黏膜细胞上粘附的影响。试验选用 30周龄海兰褐壳蛋鸡 2 4 0只 ,试验时间 80d。以K88、K99和 987P 3种大肠杆菌混合液为免疫原 ,免疫原中K88、K99和 987P的细菌数分别为 2 .5× 10 9、2 .5× 10 9、2 .5× 10 10 CFU/mL。免疫剂量为 0 .5、1.0、1.5、2 .0mL/只 ,在试验鸡胸腹部肌肉、分多点注射 (每点约 0 .2mL) ,每个免疫剂量免疫健康蛋鸡 5 0只 ,4 0只蛋鸡作对照 ,以个体为单位 ,每天收集鸡蛋 ,4℃保存。在每次免疫 5d后 ,翅静脉采血、分离血清 ,- 2 0℃保存。用盐析法和冷冻干燥法制备抗猪大肠杆菌卵黄抗体粉 ,配制不同蛋白含量的卵黄抗体溶液 ,用体外法研究卵黄抗体对大肠杆菌生长及对肠黏膜细胞粘附的影响。试验结果表明 :最佳免疫剂量为 1.0mL/只 ,卵黄与血清中的抗体水平没有差异 ;在大肠杆菌培养液中 ,添加蛋白含量为 0 .5mg/mL抗猪大肠杆菌卵黄抗体溶液时 ,大肠杆菌的生长受到抑制 (P <0 .0 5 ) ,不同卵黄抗体间没有交叉反应 ;蛋白含量为 0 .2 5mg/mL的抗猪大肠杆菌卵黄抗体溶液对大肠杆菌在肠黏膜细胞上的粘附有抑制作用 (P <0 .0 5 )。     

精制抗副溶血弧菌卵黄抗体的制备与纯化

用灭活浓度为108CFU/ml的副溶血弧菌悬液，加入等体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂，充分乳化，免疫健康海兰蛋鸡，每10d加强免疫1次，第3次加强免疫后1周开始收集鸡蛋。鸡蛋在除去蛋白后用蒸馏水漂洗得到纯卵黄液，应用饱和硫酸铵溶液沉淀法制备粗体的卵黄抗体，再应用Sephadex G-200凝胶层析柱进一步纯化，所得样品经SDS-PAGE电泳检测，证实获得精制抗副溶血弧菌卵黄抗体。     

牛支原体P48蛋白卵黄抗体的制备

为了研究牛支原体P48抗原蛋白的免疫学功能及相应卵黄抗体的生物学特性,探究其抗体效价随免疫时间的变化规律,试验采用牛支原体P48蛋白疫苗免疫健康产蛋母鸡,定时采血并收集鸡蛋,用水稀释法结合硫酸铵盐析法制备特异性卵黄抗体,利用间接ELISA法检测血清抗体(IgG)和卵黄抗体(IgY)效价。结果表明,低、中、高剂量组均能诱导蛋鸡产生有效免疫应答,血清抗体效价与卵黄抗体效价的变化趋势基本一致,但卵黄抗体的产生滞后于血清抗体,在首次免疫后8~10周Ig Y效价达到峰值,其中中剂量组的免疫效价最高,最高效价为1:212。经SDS-PAGE检测,制备所得的纯度达86%以上,得率在8.6 mg/m L以上。说明采用牛支原体P48蛋白免疫蛋鸡可制备高效价、高纯度的抗牛支原体P48蛋白卵黄抗体,从而为卵黄抗体在牛支原体的检测与防控方面的研究奠定了基础。     

犬细小病毒高免卵黄抗体的制备与保护效果研究

为制备抗犬细小病毒病高免卵黄抗体,以期为犬细小病毒感染的临床治疗奠定基础。本研究用自行制备的犬细小病毒组织灭活疫苗免疫高产蛋鸡,多次强化免疫后收集所产的高免鸡蛋,采用盐析法制备抗犬细小病毒病卵黄抗体。结果显示,制备的鸡源犬细小病毒高免卵黄抗体的HI抗体效价达1:512,1.0m L使用剂量的治愈率达100%。表明制备的犬细小病毒高免卵黄抗体具有较好的治疗效果,可以应用于临床治疗,将为犬细小病毒病的综合防治提供了一种有效的技术手段。     

MEV灭活疫苗免疫后鸡蛋卵黄抗体消长规律的探究

为了解产蛋鸡在疫苗接种后卵黄抗体浓度和效价的消长规律,本试验以商品化水貂病毒性肠炎病毒(MEV)灭活疫苗免疫成年海兰褐蛋鸡。经免疫后,采集鸡蛋样本,通过水溶法提取卵黄抗体,经硫酸铵两步沉淀,透析纯化,过滤除菌后制得纯净的卵黄抗体。结果显示,水溶法制备的卵黄抗体纯度为60%~80%,得率为60%,免疫后抗体浓度和效价迅速上升,到30 d达到峰值而后逐步下降,在120 d内二者消长规律基本一致。至150~180 d时抗体浓度下降为峰值的50%,而此时其HI效价已与阴性组相差不大。因此一免后150 d内卵黄抗体滴度有良好的保护作用。     

产蛋鸡抗大肠杆菌F4菌毛的血清抗体和卵黄抗体消长规律的研究

从浙江省10多个规模化猪场采集仔猪断奶腹泻病料,分离致病性大肠杆菌。血清学和PCR方法鉴定菌毛型主要为F4和F18。挑取1株致病性和菌毛表达较强的F4阳性菌株,接种改良M inca培养基培养,热抽提法分离菌毛并纯化菌毛蛋白。将50只蛋鸡随机分5组,分别肌注1 mL免疫原/只:A组菌毛蛋白(250μg/只),B、C和D组菌毛蛋白(250,50,10μg/只) 弗氏佐剂,E组为空白对照。21 d加强免疫。定期采血分离血清,水稀释法和饱和硫酸铵盐析法分离卵黄抗体。ELISA法检测血清和卵黄抗体效价。结果表明,F4菌毛蛋白具有良好的免疫原性:在弗氏佐剂的辅助下,二免后21 d抗体效价达最高峰,血清和卵黄抗体效价分别为4.7 lg和4.4 lg,二免后56 d血清和卵黄抗体效价仍维持在4.0 lg;另外二免后21 d,10μg/只免疫剂量与50μg/只及250μg/只相比,诱导产生的卵黄抗体效价之间差异不显著(P>0.05)。     

猪流行性腹泻病毒卵黄抗体制备及抗体水平检测

利用猪流行性腹泻病毒(PEDV)SC株免疫产蛋鸡,收集高免卵黄,获得鸡源抗PEDV卵黄抗体,建立ELISA方法对卵黄抗体进行测定。跟踪监测在3次免疫期间及之后的18个月卵黄抗体在免疫鸡只所产卵黄中的消长规律。收集第3次免疫后15 d的高免卵黄,经盐析法提纯后封装分别储存于4℃、-20℃、-80℃和冻干后储存于-20℃4种条件下,定期对不同条件下储存的样品进行检测。监测结果显示冻干后储存于-20℃条件下,卵黄抗体保存状况最佳。     

蛋鸡H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫血清抗体与卵黄抗体检测比较分析

为分析蛋鸡免疫后卵黄抗体与血清抗体的相关性,试验采集经H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫的黔东南小香鸡、乌蒙乌骨鸡、威宁鸡血清样本和卵黄样本,采用血凝抑制试验进行相关免疫抗体检测。结果:3个地方品种鸡的血清样本和卵黄样本中均可检测出H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫抗体,且几何平均效价均大于24以上,达到免疫合格标准,不同地方品种鸡群间差异不显著(P>0.05);免疫后30d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,但差异不显著(P>0.05);免疫后60d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,差异显著(P<0.05)。结果表明:卵黄抗体与血清抗体呈正相关性,卵黄抗体几何平均效价均低于血清抗体。在临床上可用卵黄抗体替代血清抗体进行H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫效果的评价,但应选择在免疫后30d以内。     

鸡新城疫血清抗体和卵黄抗体效价比较研究

蛋鸡进行鸡新城疫疫苗免疫接种后,体内B细胞通过对抗原的识别、活化、增殖,最后分化成浆细胞并分泌抗体,产生的抗体进入血液后,血液中的抗体能从输卵管上皮层分泌滤泡分泌到卵黄内。免疫蛋鸡后采血测定血清中抗体效价或制备血清抗体过程中,抓鸡采血时经常造成惊吓而引起产蛋率降低,因而人们想到能否用卵黄抗体代替血清抗体进行上述工作。本研究的目的是对免疫后的蛋鸡血清抗体和卵黄抗体进行测定比较,看两者之间的差异程度     

非洲猪瘟病毒p54抗原蛋白卵黄抗体的制备及生物活性检测

为研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54抗原蛋白及其相应卵黄抗体的生物学特性,特制备ASFV p54蛋白及相应鸡卵黄抗体。可溶性表达制备高纯度ASFVp54抗原蛋白,并制定合理的免疫程序,免疫产蛋母鸡,定时采血并收集鸡蛋。卵黄液经粗提取后二次盐析,制备特异性卵黄抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示,在首次免疫后7d后的血清中即可检测出相应抗体,14d后在卵黄中提取到相应抗体,35d后IgY效价达到峰值。经SDS-PAGE检测,制备所得纯度达到90%,得率在8.8g/L以上。Western-blot检测结果显示,纯化的IgY具有高度的特异性。     

鸭坦布苏病毒冻干卵黄抗体的研制

将鸭坦布苏病毒尿囊液浓缩灭活后制备灭活疫苗,依据制定的免疫程序免疫产蛋鸡,第三次免疫后14天,抗体中和效价≥1∶256,收集高免鸡蛋制备冻干卵黄抗体,并对制备的冻干卵黄抗体进行质量评价。结果表明,制备的冻干卵黄抗体中和效价为1∶90,能有效中和鸭坦布苏病毒,对鸭坦布苏病毒的致病性有较好的预防作用,为鸭坦布苏病毒的预防和治疗提供了一种可行的途径。     

抗鸡病毒性关节炎高免卵黄抗体的制备,检测及应用研究

用鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）弱毒株连续免疫产蛋母鸡３次，制备出高免卵黄抗体，其琼效价为１：１２８－１：２５６。卵黄不需任何处理可直接用于试验，用间接ＥＬＩＳＡ检测血清和卵黄抗体，免疫后１０ｄ两者的ＡＶＡＶ抗体无明显相关性，免疫后２０－５０ｄ两者抗体效价呈显著相关性，相关系数为０．８６３。免疫防治试验表明，肌注高免卵黄抗体的５日龄肉鸡，可抵抗ＡＶＡＶ强毒的攻击；发生ＡＶＡ的病鸡立即用卵黄抗体治疗     

卵黄抗体检测法在禽流感免疫监测中的应用

针对160日龄罗曼产蛋鸡,在免疫接种禽流感病毒油乳剂灭活疫苗(H5N1Re1+Re4)14d、21d、28d、35d后,分别随机抽检、采集相应的鸡蛋和血清各20份,采用血凝抑制(HI)试验分别监测血清及卵黄中H5抗体水平。结果表明,28d后(包括第35天)血清和卵黄中H5抗体产生水平相当。因此,以禽流感卵黄抗体检测代替血清抗体检测完全可以应用于蛋鸡的日常监测,既降低鸡的应激反应,同时又提高鸡群的生产性能,适于基层兽医站推广应用。     

抗BVDV卵黄抗体的制备

采用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)免疫产蛋母鸡,然后用水稀释法成功地从卵黄中分离出抗BVDV免疫球蛋白(抗-BVDV IgY)。建立起测定鸡蛋中特异性抗BVDV活性的间接ELISA方法,并采用此方法检测每次免疫后第10天的抗体滴度。结果表明,蛋鸡在首次免疫后第10天,卵黄中可以检测到抗-BVDV IgY;5次免疫后,抗体效价达到1:6400,半年后仍能维持在该水平。