旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的应用研究

应用ＭｃＡｂ 快速ＥＬＩＳＡ 诊断盒,对感染了４ 个旋毛虫隔离种的猪定期检测其血清中抗体出现情况。结果,猪旋毛虫和旋毛形线虫（Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ）在感染２４ ｄ 后、犬旋毛虫和本地毛形线虫（ Ｔ．ｎａｔｉｖａ）３１ ｄ 后,可在猪血清中检出抗体;在抗体出现时间上前二者较后二者早７ ｄ 左右。     

旋毛虫各隔离株某些生物学特性的研究

通过对猪、犬旋毛虫和国际标准隔离：旋毛形线虫（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ）和本地毛形线虫（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｎａｔｉｖａ）的研究发现，猪旋志虫和旋毛形线虫在小鼠膈肌中出现保姆细胞的时间比较早，分别于感染第１６ｄ和１８ｄ出现，第３８ｄ和３６ｄ所有幼虫都已形成保姆细胞，而 虫和本地毛形线虫出现保姆细胞的时间较晚，于感染第２０ｄ和２２ｄ出现，第３２ｄ完成形成。猪旋毛虫和旋毛形线虫雌虫     

各旋毛虫隔离种某些生物学特性研究

通过对猪、犬旋毛虫和国际标准隔离种：旋毛形线虫（Trichinella spiralis)和本地毛形线虫（Trichinella nativa)的研究发现，猪旋毛虫和旋毛形线虫在小鼠隔肌中出现保姆细胞的时间比较早，分别于感染第16天和18天出现，第38天和36天所有幼虫都已形成保姆细胞，而犬旋毛虫和本地毛形线虫出现保姆细胞的时间较晚，于感染第20天和22天出现，第32天完全形成。猪旋毛虫和旋毛形线虫雌虫体外培养24小时平均产新生幼虫数分别为66．0和76．2，而犬旋毛虫和本地毛形线虫分别是28．8和22．0，前二者在雌虫体外产新生幼虫能力上明显高于后二者。研究结果表明，黑龙江猪旋毛虫为旋毛形线虫，犬旋毛虫为本地毛形线虫。     

五种旋毛虫抗原对猪的免疫保护作用研究

本实验研究了旋毛虫肌幼虫可溶性粗抗原、排泄分泌抗原（ＥＳ）、表面抗原（ＳＡ）及成虫ＥＳ、ＳＡ５种抗原对猪的免疫保护作用。结果５种抗原对猪均具有一定程度的免疫原性，可诱导猪体产生对攻击感染的抵抗力（减虫率），其中肌幼虫粗抗原为５５．２０％；肌幼虫ＥＳ为４２．５６％，肌幼虫ＳＡ为７２．２１％；成虫ＥＳ为３２．９２％；成虫ＳＡ为４２．１７％。免疫５种抗原后用肌幼虫“Ｂ”抗原、新生幼虫可溶性抗原及成虫可溶性抗原进行ＥＬＩＳＡ检测，均可测出血清抗体应答反应，其中以相应抗原测出的抗体应答较强烈。免疫５种抗原后猪外周血液中Ｂ淋巴细胞减少，Ｔｈ及Ｔｓ增加，Ｔｈ／Ｔｓ比值降低，呈暂时的细胞免疫抑制现象。     

不同旋毛虫隔离种感染猪检疫情况及其分类研究

用来自哈尔滨地区猪，犬体内的旋毛虫和国际准虫株旋毛形线虫（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａｓｐｉｒａｌｉｓ）、本地毛形线虫（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａｎａｔｉｖａ）同时感染猪，定期检测嗜酸性细胞的变化情况，抗体出现规律，剖杀后，用消化法检查各部位肌肉中的幼虫数以确定感染情况和分布规律；用不同隔离种的肉样在－２２℃和－３２℃冷冻条件下进行冷冻性研究；用鲜肉及冷冻不同时间的肉感染情况和分布规律；用不同隔离种的内样在     

东北地区4株猪,犬旋毛虫间及与国际标准虫株间的杂交试验

为了给中国旋毛虫虫株的分类提供依据，将分离自中国东北地区的４株猪，犬源旋毛虫虫株分别接种于小鼠，按常规分离出肌幼虫，纯化后，设８个杂交试验组，将每２个虫株的雌，雄幼虫体各５条混合，以食管灌注法接种于小鼠，４２ｄ后扑杀，消化，集虫，计数回收肌幼虫数。同法进行了哈尔滨猪株，犬株与国际标准虫株Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ（Ｔ．ｓ）．Ｔ．ｎａｔｉｖａ（Ｔ．ｎａ）之间的杂交试验。     

猪、犬旋毛虫DNA限制性片段长度多态性分析

以旋毛虫国际标准虫种Ｔ．ｓｐｉｄａｉｓ和Ｔ．ｎａｔｉｖａ作对照,应用ＤＮＡ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）技术对黑龙江省猪、大旋毛虫进行虫种鉴定。结果显示：猪旋虫和Ｔ．ｓｐｉｒｌａｉｓ酶切图谱相同;犬旋毛虫和Ｔ．ｎａｔｉｖａ酶谱一致,结果提示,黑龙江猪旋毛虫为Ｔｓｐｉｒａｌｉｓ,犬旋毛虫为Ｔ．ｎａｔｉｖａ。     

旋毛虫各隔离种成虫肠期持续时间的研究

以旋毛虫国际标准种：旋毛形线虫（Trichinella spiralis）和本地毛形线虫（Trichiella nativa）为对照，对黑龙江省猪、犬旋毛虫成虫肠期持续时间了比较研究，研究结果表明：4个旋毛虫隔离种均在感染后的6－8d成虫回收率最高；猪旋毛虫和Txspiralis成虫肠期持续时间分别为22d和20d，犬旋毛虫和T.nativa分别为16d和14d。研究结果揭示，黑龙江省猪旋毛虫相当于旋毛形线虫（Trichinella spiralis），犬旋毛虫相当于本地毛形线虫（Trichinella nativa）。     

旋毛虫各隔离种嗜酸性粒细胞变化的研究

旋毛虫各隔离种感染猪后,其血液中嗜酸性粒细胞显著增多,而其它各类细胞无明显变化,嗜酸性粒细胞于感染后７ｄ开始升高,１６ｄ左右达最高峰,以后逐渐下降趋势;猪旋毛虫和旋毛形线虫的嗜酸性粒细胞数量始终高于犬旋毛虫和本地毛形线虫,嗜酸性粒细胞增多可作为早期诊断旋毛虫病的重要临床指标之一。     

旋毛虫各隔离种快速诊断方法的研究

提取４个旋毛虫隔离种的ＤＮＡ，应用Ｊｅａｎ设计的引物序列进行了ＰＣＲ扩增。结果黑龙江猪旋毛虫和Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ均显示出家畜型旋毛虫特异的６０２ｂｐ目的ＤＮＡ基因片段，而犬旋毛虫和Ｔ．ｎａｔｉｖａ未见此片段。扩增结果显示，黑龙江猪旋毛虫相当于Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ，犬旋毛虫相当于Ｔ．ｎａｔｉｖａ。     

猪旋毛虫病疫苗后海穴免疫研究

本项目对猪旋毛虫病成虫可溶性抗原疫苗经后海穴免疫注射的效果进行了研究。大鼠经口感染旋毛虫肌幼虫后３或７ｄ剖杀，收集成虫。经超声粉碎、高速离心制备成虫可溶性抗原。将抗原与等体积ＦＣＡ乳化，按０．２５ｍｇ／头及０．５０ｍｇ／头的抗原量分别进行后海穴注射（ＡＰ）及腹腔注射（ＩＰ），免疫猪只，使之经受旋毛虫的实验室攻击感染及自然感染。结果表明，３日龄及７日龄成虫可溶性抗原的免疫原性基本一致。采用后海穴注射疫苗具有减少抗原用量、增强免疫效果的作用。免疫后猪血清抗体滴度增加，呈暂时的细胞免疫抑制现象。后海穴注射疫苗猪群保护率达１００％，增加一倍抗原量经腹腔注射的猪群保护率为７５．２６％。     

抗旋毛虫循环抗原单克隆抗体的制备及初步应用

为评价单克隆抗体用于检测旋毛虫循环抗原（ＣＡ）的应用价值，作者利用淋巴细胞杂交瘤技术制备了４个抗旋毛虫ＣＡ的杂交瘤细胞系，建立了以单克隆抗体双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测ＣＡ的方法，并初步应用于动物血清中ＣＡ的检测。应用该法检测旋毛虫病猪血清的阳性率为７２．１％（３１／４３）。６０头健康猪、３０头感染猪囊虫和３０头感染弓形虫的猪均为阴性。对流行地区河南邓县３４头和湖北囊樊１３４头屠宰猪进行流行病学调查，     

不同佐剂免疫原对猪施毛虫病的免疫保护作用比较研究

采用７日龄旋毛虫成虫可溶性抗原与弗氏完全佐剂，白油－司班佐剂，ＩＳＡ２０６佐剂和蜂胶佐剂乳化制备免疫原，对试验猪腹腔注射免疫３次，每次间隔７ｄ，每头猪的免疫剂量为０．５ｍｇ。最后一次免疫后７ｄ攻击感染旋毛虫肌虫２００条／ｋｇ体重。于感染后第３５ｄ和第１２０ｄ剖杀试验猪，用消化法检查计算每克肌肉的荷虫数。     

应用马立克氏病肿瘤细胞表面洗脱的抗体制备肿瘤表面抗原的内映像

从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）人工感染鸡的淋巴细胞瘤表面洗脱抗马立克氏病相关肿瘤表面抗原（ＭＡＴＳＡ）的抗体。以此作为Ａｂ１免疫家兔，成功地制备了ＭＡＴＳＡ的内映像（Ａｂ２β）。将纯化的Ａｂ２β与白油佐剂乳化，给３０日龄鸡肌注免疫，应用间接ＥＬＩＳＡ对免疫鸡ＭＡＴＳＡ抗体的消长进行了监测。结果表明：正常鸡的血清中无ＭＡＴＳＡ抗体的存在，而用这种Ａｂ２β于第１次免疫后１０ｄ即可形成明显的抗体应答，ＥＬＩＳＡ的ＯＤ值（ｘ）为０．２０；至第３次免疫后１０ｄ，ＯＤ值（ｘ）为０．３３，达峰值，以后则呈下降趋势。研究结果表明，应用来自ＭＤＶ感染鸡肿瘤细胞表面的抗ＭＡＴＳＡ的抗体，可以用作肿瘤表面抗原内映像的制备，从而为抗肿瘤独特型疫苗的研究提供了一种新途径     

用间接荧光抗体法对鸡肾型传染性支气管炎抗原定位的研究

本文建立了检测鸡肾型ＩＢ抗原的间接荧光抗体染色法，用此法对Ａｕｓｔ－Ｔ和ＴＪ＿（９３０１）肾型毒株抗原的定位进行了系统研究，结果表明于人工感染后２４小时在气管中最早出现特异性荧光，４８小时开始在肺、肾等器官中检测到特异性荧光，特异性荧光持续时间最长的器官是肾脏，为８～１１天，其他器官包括气管和肺均只持续４～５天。两毒株感染后，病死鸡肾脏特异性荧光检出率均１００％，而气管特异性荧光的检出率：Ａｕｓｔ－Ｔ为１５．６３％、ＴＪ＿（９３０１）为２５．００％，肺检出率：Ａｕｓｔ－Ｔ为１８．７５％、ＴＪ＿（９３０１）为３７．９４％。由此推测ＩＢＶ肾型毒株的主要靶器官是肾脏，主要亲嗜细胞是肾小管上皮细胞。     

旋毛虫各隔离种成虫在小鼠肠道中的分布

以旋毛虫国际标准种旋毛形线虫（Trichinella spiralis）和本地毛形线虫（Trichinella nativa）为对照，对黑龙江省猪、旋毛虫成虫在小鼠肠道中的分布进行了比较研究，研究结果表明：分别有76.3%，80.67%和86.18%，88.30%的猪旋毛虫、T.spiralis和旋毛虫、T.nativa分布于小肠的前、中段。说明猪旋毛虫、T.spiralis、犬旋毛虫、T.nativa的成虫均主要分布于小肠的前、中段，但犬旋毛虫、T.nativa、所占比例明显高于猪旋毛虫、T.spiralis，差异极显著（P＜0.01）。研究结果揭示，黑龙江省猪旋毛虫相当于旋毛形线虫（Trichinella spiralis），犬旋毛虫相当于本地毛形线虫（Trichinella.native）。     

猪旋毛虫McAb快速ELISA法的应用研究

本研究用保存在小鼠中的猪旋毛虫、旋毛形线虫（Trichinella spiralis)、犬旋毛虫、本地毛形线虫（Trichinella nativa)四种不同来源的旋毛虫隔离种接种断乳仔猪，定期用ELISA法检查抗体出现情况，剖杀后用鲜肉及冷冻不同时间的肉制成肉汁，进行ELISA抗体检测。结果表明：用ELISA法检出阳性的时间为：猪旋毛虫和T.spiralis在16天以后，犬旋毛虫和T.nativa在24天以后；鲜肉肉汁ELISA检测结果与其血清结果基本相同；冷肉肉汁检疫中，短期内冷冻对ELISA检测结果影响也不大。     

旋毛虫各隔离种对猪的感染性和低温耐受性的研究

用消化法所得的猪旋毛虫、犬旋毛虫、旋毛形线虫（Trichinella spiralis）和本地毛形线虫（Trichinella nati-va）分别感染猪和小鼠,以观察其感染性,同时在-22℃和-32℃条件下对其进行冷冻试验。结果表明:4个旋毛虫隔离种对猪的感染性存在着明显差异,猪旋毛虫和T.spiralis对猪易感,其繁殖力指数（RCI）分别为385.68±41.51和300.55±12.45;而犬旋毛虫和T.nativa对猪不易感,RCI分别是0.064±0.031和0.033±0.033。猪旋毛虫和旋毛形线虫不耐低温,在猪体内-32℃、24 h,-22℃、72 h;在小鼠体内-32℃、12 h即全部死亡。而犬旋毛虫和本地毛形线虫对低温抵抗力较强,在猪体内-32℃、72h,-22℃、192 h;在小鼠体内-32℃、48 h才失去感染性。结果揭示:黑龙江省猪旋毛虫相当于旋毛形线虫,犬旋毛虫相当于本地毛形线虫;犬旋毛虫和T.nativa很难通过猪的感染而对人体健康构成威胁。     

猪旋毛虫病疫苗后海穴免疫研究

本项目对猪旋毛虫病成虫可溶性抗原疫苗经后海穴免疫注射的效果进行了研究。大鼠经口感染旋毛虫肌幼虫后３或７ｄ剖杀，收集成虫。经超声粉碎、高速离心制备成虫可溶性抗原。将抗原与等体积ＦＣＡ乳化，按０．２５ｍｇ／头及０．５０ｍｇ／头的抗原量分别进行后海穴注射（ＡＰ）及腹腔注射（ＩＰ），免疫猪只，使之经受旋毛虫的实验室攻击感染及自然感染。结果表明，３日龄及７日龄成虫可溶性抗原的免疫原性基本一致。采用后海穴注射     

不同佐剂免疫原对猪旋毛虫病的免疫保护作用比较研究

采用７ 日龄旋毛虫成虫可溶性抗原与弗氏完全佐剂（ＦＣＡ） 、白油司班佐剂、ＩＳＡ２０６佐剂和蜂胶佐剂乳化制备免疫原，对试验猪腹腔注射免疫３ 次，每次间隔７ｄ ，每头猪的免疫剂量为０５ｍｇ。最后一次免疫后７ｄ 攻击感染旋毛虫肌幼虫２００ 条／ｋｇ 体重。于感染后第３５ｄ 和第１２０ｄ 剖杀试验猪，用消化法检查计算每克肌肉的荷虫数。结果４ 种佐剂免疫猪肌幼虫的减虫率分别为９６１２ ％ 、８７９７ ％ 、８９８４ ％ 和９５１５ ％ ，其中以ＦＣＡ 和蜂胶佐剂免疫组的保护作用最好。表明４ 种佐剂均具有免疫增强作用，而蜂胶佐剂在乳化程序、注射、价格及免疫增强作用等方面都优于其它佐剂，更具有开发应用前景。