沙打旺黄萎病菌的分离鉴定及其生物学特性和遗传多样性

为明确沙打旺Astragalus adsurgens黄萎病病原菌的种类及其生物学特性和遗传多样性,结合形态学特征和分子生物学方法对分离自疑似感染黄萎病沙打旺植株的病原菌进行鉴定,并依照柯赫氏法则进行致病性验证,同时在室内条件下对病原菌的生物学特性进行测定,分别利用大丽轮枝菌Verticillium dahliae生理小种和交配型特异性引物对病原菌的生理小种和交配型进行PCR分子鉴定。结果表明,共分离到13株病原菌菌株,其形态学特征和培养性状基本相似,经鉴定引起沙打旺黄萎病的病原菌为大丽轮枝菌。该菌具有较宽的温度和酸碱度适应范围,最适生长和产孢的温度为25℃,最适生长和产孢的pH范围分别为pH 7～9和pH 6～7;该病原菌生长和产孢的最适碳源为可溶性淀粉和D-甘露醇,最适生长氮源为牛肉膏和胰蛋白胨,最适产孢氮源为甘氨酸。分离获得的13株大丽轮枝菌菌株均属于2号生理小种和MAT1-2-1交配型,表明无性繁殖可能是大丽轮枝菌的主要繁殖形式。     

西藏青稞籽粒燕麦镰刀菌生物学特性研究

以西藏青稞籽粒中分离到的燕麦镰孢(Fusarium avenaceum)Hb39分离株为对象,研究了温度、湿度、pH、光照、营养对其菌丝生长和孢子萌发的影响,以便为进一步研究由燕麦镰孢引起的青稞病害发生规律、防治方法奠定基础,并为研究由此引致的人类疾病提供理论依据.该菌株在供试的10种不同固体、液体培养基上均能生长,但菌丝生长速度和生长量均有很大差异,PDBA、PDA、PSA培养基有利于该菌的生长,而HA、CMA和WA不利于该菌的生长.比较不同碳、氮源对菌丝生长的影响,发现该菌能利用多种单糖、多糖及可溶性淀粉作碳源,其中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖较好;能利用蛋白胨等有机氮和硝酸钠等无机氮作氮源,其中蛋白胨最好.该菌最适生长温度为25℃,生长的温度范围为5～30℃.菌丝生长最适pH为6,也能在pH 3～12的范围内生长.连续光照不利于菌丝的生长,而光暗交替或黑暗条件下菌落生长无显著性差异.大型分生孢子萌发的温湿度范围分别为10～30℃、RH 85%～100%,pH值3～12,最适萌发条件为25℃、RH100%和pH 6.该菌株的致死温度为45℃10 min.     

罗汉果青枯病菌生物学特眭初步研究

对罗汉果青枯病菌的生长温度、pH、碳氮营养等生物学特性进行了测定。试验结果表明,罗汉果青枯病菌Lu-L3菌株能在pH5．0～8．5和12-40℃的范围内生长,最适生长的pH范围为6．0～7．5,最适生长的温度范围为28~35℃。测试的6株病原菌株,其生长均能利用蔗糖、葡萄糖、乳糖、山梨醇、麦芽糖、甜醇和甘露醇作为碳源,利用蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、硝酸铵、硝酸钾和脲作为氮源。气温、土壤种类和罗汉果的生育期对病原菌入侵寄主有影响。在20~35℃范围内,气温升高利于病原菌的入侵,病害发生严重;病原菌在黏土中入侵寄主容易,在壤土中入侵寄主困难;罗汉果植株越小越利于病原菌的入侵,花蕾期后,未观察到植株被病原菌侵染。接种病原菌Lu-L3菌株后,12h时植株的根表分离到接种的病原菌株;24h时根内分离到接种的病原菌株;36h时茎内分离到接种的病原菌株。     

贵州省白及叶褐斑病病原菌鉴定及其生物学特性

为明确贵州省白及叶褐斑病病原菌及其生物学特性,采用组织分离法和离体接种法分别对其病原菌进行分离和致病性测定,利用形态学及ITS、EF-1α、β-tubulin基因序列分析对病原菌的分类进行鉴定,并对病原菌的生物学特性进行研究。结果表明:分离得到的白及叶褐斑病病原菌菌株编号为HGUP_(17)355;该菌菌丝白色、羊绒状,菌落中心隆起呈淡黄色、背面枫叶红色,大型分生孢子窄镰刀形,3～8个分隔,未见厚垣孢子,小型分生孢子卵圆形,1～2个分隔;在以ITS、EF-1α、β-tubulin三个基因序列构建的系统发育树中,菌株HGUP_(17)355与燕麦镰刀菌Fusarium avenaceum聚于一支,且支持率达100%,结合形态特征与分子生物学将其鉴定为燕麦镰刀菌。该菌菌丝最适生长温度为20℃,最适生长pH为6,在燕麦片琼脂培养基上生长最快,以麦芽糖为碳源、以L-苯丙氨酸为氮源时利用率最高,致死温度为45℃,对光照不敏感。     

主要环境及营养因素对西瓜枯萎病菌生长的影响

采用菌丝生长速率法和产孢量测定研究了不同温度、光照、pH及碳氮源对来源于海南、河北和上海的3株西瓜枯萎病菌Fo-HN-46、Fo-HB-12和Fo-SH-1生长速率和产孢量的影响。结果表明:西瓜枯萎病菌菌株的适宜生长温度为20~30℃,Fo-HN-46最适生长温度为28℃,Fo-HB-12和Fo-SH-1最适生长温度为25℃,产孢的最适温度为28~30℃;光照对西瓜枯萎病菌生长速率无显著影响,对产孢影响显著,Fo-HN-46在黑暗条件下单位面积产孢量最高,Fo-HB-12和Fo-SH-1在半光照条件下产孢量最高;pH对西瓜枯萎病菌菌株的生长速率和产孢量有显著影响,pH 7~9时菌丝生长速率快,pH 8~11时产孢量高;葡萄糖、淀粉和乳糖作为碳源能够显著增加西瓜枯萎病菌的产孢量;蛋白胨作为氮源能显著促进菌丝生长,硝酸钠、酵母粉和蛋白胨均能显著增加西瓜枯萎病菌的产孢量。用最适碳源、氮源培养,Fo-HN-46生长速率大于Fo-HB-12和Fo-SH-1。Fo-SH-1产孢量高于Fo-HN-46和Fo-HB-12。     

交枝顶孢霉杀柑橘全爪螨活性及其生物学特性研究

为了明确交枝顶孢霉Acremonium implicatum CQBBW8的杀螨活性及其生物学特性,采用触杀毒力法检测CQBBW8菌株对柑橘全爪螨的致死率,通过单因素试验测试不同培养基、碳源、氮源、温度、pH及紫外线对CQBBW8菌株生长、产孢及其分生孢子萌发的影响。结果表明,CQBBW8菌株对柑橘全爪螨Panonychus citri(McGregor)的校正致死率为54.42%,LC_(50)为1.2×10~6个/mL,LT_(50)值为5.175 9d。最佳生长和产孢培养基分别为PDA和SEA;菌丝生长最适碳源和氮源为甘露醇和蛋白胨,产孢最适碳源和氮源为可溶性淀粉和氯化铵;最适生长温度为25℃,最适产孢和分生孢子萌发温度为30℃;最适生长和产孢pH为6.0,最适萌发pH为7.0;紫外线对菌丝生长影响不明显,对产孢影响较大,紫外线照射时间越长,孢子萌发率越高。综上,CQBBW8菌株对柑橘全爪螨有较强的毒力,对营养需求不高,环境适应性较强,具有开发为杀螨真菌制剂的潜力。     

罗汉果青枯病菌生物学特性初步研究

对罗汉果青枯病菌的生长温度、pH、碳氮营养等生物学特性进行了测定。试验结果表明,罗汉果青枯病菌Lu L3菌株能在pH5.0～8.5和12～40 ℃的范围内生长,最适生长的pH范围为6.0～7.5,最适生长的温度范围为28～35 ℃。测试的6株病原菌株,其生长均能利用蔗糖、葡萄糖、乳糖、山梨醇、麦芽糖、甜醇和甘露醇作为碳源,利用蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、硝酸铵、硝酸钾和脲作为氮源。气温、土壤种类和罗汉果的生育期对病原菌入侵寄主有影响。在20～35 ℃范围内,气温升高利于病原菌的入侵,病害发生严重;病原菌在黏土中入侵寄主容易,在壤土中入侵寄主困难;罗汉果植株越小越利于病原菌的入侵,花蕾期后,未观察到植株被病原菌侵染。接种病原菌Lu L3菌株后,12 h时植株的根表分离到接种的病原菌株;24 h时根内分离到接种的病原菌株;36 h时茎内分离到接种的病原菌株。     

黑龙江省高粱靶斑病病原菌的鉴定及其生物学特性

为明确黑龙江省高粱靶斑病病原菌种类及其生物学特性，采用组织分离法对采集自黑龙江省8个地区的75份高粱病叶进行病原菌分离，利用形态学特征观察及分子生物学技术对选取的代表菌株进行鉴定，并分析其生物学特性。结果表明，共分离得到42株病原菌菌株，按采集地选择的8株代表菌株的菌丝生长速率不同，但形态学特征较一致，分生孢子为棕黄色，呈圆柱形，中部较宽，稍弯曲，大小为29~96 μm×9~15 μm，具3~9个隔膜，脐点明显，基部平脐；8 株代表菌株的ITS序列与高梁生双极蠕孢菌Bipolaris sorghicola（GenBank登录号为AF071332.1）的同源性为99%~100%；结合形态学特征和ITS序列分析确定黑龙江省高粱靶斑病病原菌为高梁生双极蠕孢菌B. sorghicola。8株代表菌株在燕麦片琼脂培养基上生长最好，但不同菌株的菌丝生长速率存在差异；在10~35℃范围内均能生长，但不同菌株的最适生长温度不同；光照对菌丝生长有促进作用；最适生长的pH为8；不同菌株对碳、氮源的利用差异较大，表明高粱生双极蠕孢菌菌株间存在生物学特性差异。     

莲雾软腐病病原菌鉴定及其生物学特性研究

莲雾果实采后产生的主要病害为软腐病。本试验对莲雾果实采后软腐病病原菌进行了分离纯化,运用形态学和分子生物学对病原菌进行了鉴定,并研究了其病原菌生物学特性。结果表明,引起莲雾果软腐病的病原菌是异色拟盘多毛孢(Pestalotiopsis versicolor)。生物学特性研究结果表明,该病原菌最适生长温度为25℃,最适菌丝生长的相对湿度为75%~80%,湿度对菌丝生长影响不大,菌丝在pH 3~9之间都能生长,pH 5~6生长较好;最适碳源为麦芽糖,甘露醇不利于菌丝生长;最适氮源为蛋白胨,尿素不利于菌丝生长。该菌对于光照较敏感,完全黑暗能促进其菌丝生长。该菌的孢子致死温度为55℃10min。其生物学特性说明了莲雾果实软腐病病原菌对生存环境具有比较强的适应能力。     

苜蓿轮枝菌的生物学特性分析及ATMT遗传转化体系的建立

 为了揭示苜蓿轮枝菌Verticillium alfalfae的生物学特性及其致病机理,在室内条件下测定不同温度、pH值、碳源和氮源对菌株Ms198的生长速率和产孢量的影响,同时利用农杆菌转化法(Agrobactirium tumfacience-mediated transformant,ATMT)将带有潮霉素(Hygromycin,Hyg)抗性标记和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告基因的双元载体转入苜蓿轮枝菌的分生孢子,获得147株阳性转化子,以野生型菌株为对照,对挑取的15株阳性转化子的菌落形态、生长速率、产孢量、孢子萌发率、粗毒素分泌量和致病力进行研究。结果表明,苜蓿轮枝菌具有较宽的温度和酸碱度适应范围,最适生长和产孢温度分别为25 ℃和20 ℃,最适生长pH值为6 ~ 9,最适产孢pH值为9。可以利用多种碳、氮源,最适生长的碳、氮源分别为可溶性淀粉和牛肉膏,最适产孢的碳、氮源分别为D-牛乳糖和胰蛋白胨。与野生型菌株相比,15株供试转化子中有66.67%的转化子在菌落形态方面与野生型菌株无明显差别,而其生长速率、产孢量和孢子萌发率均有不同程度的降低。在产毒能力和致病力方面,1株转化子的粗毒素分泌量显著高于野生型菌株,9株显著低于野生型菌株,其余5株与野生型菌株无显著差异;4株转化子的致病力显著低于野生型菌株,其余11株转化子的致病力与野生型菌株均无显著差异。研究结果表明,转化子的生物学特性以及产毒能力和致病力,随外源基因插入位点的随机性而有所变化。     

中国薯蓣干腐病的病原鉴定

在薯蓣发病块茎组织中分离到真菌菌株HSQM2005,经柯赫氏法则验证该菌为薯蓣致病菌。对菌株HSQM2005核糖体DNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)进行序列分析,并结合其形态特征、培养性状将该菌鉴定为Penicillium sclerotigenum Yamamoto。该菌生长温度范围10～31℃,最适温度22～28℃;在pH 2～12均能生长,最适pH为5～8。     

土壤中降解涕灭威菌株的分离鉴定及降解特性

为探明土壤微生物对涕灭威的降解能力,用富集培养法分离驯化土壤中涕灭威的优势降解菌,初步筛选出了对涕灭威具有较高降解能力的菌株TB26和100-8。经过生理生化鉴定和16S rDNA序列同源性分析,将菌株TB26初步鉴定为克雷伯杆菌属(Klebsiella sp.),菌株100-8初步鉴定为枯草芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。TB26和100-8生长的最适碳源分别为麦芽糖、D-果糖,最适氮源分别为蛋白胨、脲。基础无机盐培养基和缺氮培养基对两种菌的生长情况及降解率的影响不同,外加氮源能够提高100-8的降解率,而缺氮培养基中TB26的降解率较高。     

香石竹枯萎病菌的生物学特性研究

对尖孢镰刀菌石竹专化型(Fusarium oxysporum f.sp.dianthi)的生物学特性进行了研究。结果表明,菌落在所供试的培养基上均能够生长,能有效地利用各种碳氮源,以蛋白胨为氮源和可溶性淀粉为最适合碳源。菌落在4～35℃范围均能生长,最适合温度为25℃。在pH 2～9的范围内都能生长,最适合pH 6。全光照条件下生长得最好,全黑暗的条件下生长得最慢。孢子的致死温度为65℃,10 min。生物学特性显示,该菌是一类对营养需求不高,对环境适应力强的病原菌。     

茶扦插苗根腐性苗枯病菌腐皮镰孢生物学特性研究

 茶扦插苗根腐性苗枯病菌腐皮镰孢生长温度范围10~35℃,最适生长温度25℃;在27~31.5℃下培养时,RH 96%产孢量最大;孢子发芽率则以在30℃和RH 100%、25~27℃和p H 5.6~8.1时较高。黑暗、日光灯及黑暗与散光交替处理对菌丝生长和产孢无明显差异,但紫外灯处理可使菌丝生长显著减慢。孢子致死温度58℃ 10 min。室温下病菌在病残体中可存活18个月以上。该菌能利用多种单糖、双糖及醇类作碳源和利用L-胱氨酸、草酸铵、尿素、DL-α-氨基丙酸作氮源。L-赖氨酸不适于病菌生长和产孢。     

苹果枝枯病病原菌鉴定及生物学特性

正苹果(Malus pumila Mill.)是世界上栽培最为广泛的水果之一,由于其生态适应性强、营养价值高、耐贮性好及供应周期长,相当多的国家都将其列为主要消费果品[1],而我国是世界上苹果种植面积最大、产量最高的国家[2]。我国苹果枝干病害以苹果轮纹病和腐烂病为主,近年来随着气候环境的改变,一些新的病害也逐渐产生。2017年7月对烟台市几个苹果果园调查时,发现一种新病害。该病害主要危害苹果枝条,产生褐色坏死病斑,严重时导致枝条枯死,发     

苹果枝枯病病原菌鉴定及生物学特性

In July 2017, a new shoot dieback disease, caused brown necrotic spots with black granules on the shoots in the late stage, was found in several apple orchards in Yantai, Shandong Province. The fungal pathogen was isolated on PDA plate from the infected shoots using the tissue isolation, which formed white to grey colonies bearing abundant fruiting bodies on Czapek solid media with lactose as carbon source. The purified fungal isolates La1-La3 were obtained from single spore isolation after spore tendrils exuding from pycnidia generated on the plates. This study was to identify and characterize the causal agent . Based on morphological characteristics and analysis of rDNA internal transcribed spacer (ITS), β-tubulin (TUB) and translation elongation factor 1-α (TEF1) nucleotide sequences, the fungal isolates were identified as Lasiodiplodia pseudotheobromae, a new pathogen on apple tree. The test of Koch's rule confirmed that L. pseudotheobromae was the pathogen of this disease. Effects of different temperature, pH value, carbon and nitrogen sources were tested against the growth of isolated fungus in vitro. The results showed that the optimal growth temperature and pH value were at 30℃ and pH 6-9, respectively, while the optimum carbon source was sucrose, and favourable nitrogen sources were sodium nitrate, ammonium nitrate and peptone.     

羊肚菌菌盖干腐病病原菌鉴定及培养特性研究

菌盖干腐病是羊肚菌Morchella spp.出菇后发生最严重的病害之一,常给羊肚菌生产造成较大损失.为明确引起贵州六盘水地区羊肚菌菌盖干腐病致病菌种类,采用单孢分离法从六盘水地区3个羊肚菌栽培点的菌盖干腐病样品上分离到9个菌株.基于形态学及ITS和LSU基因序列分析将9个菌株鉴定为长孢卵单隔孢霉Diplo(o)spo...     

一种新的香蕉黑斑病病原菌鉴定及生物学特性研究

 在广西香蕉种植区发现一种引起香蕉黑斑病的新病原。通过对病原菌分离培养、致病性测定、形态学观察、分子生物学鉴定及对该病原菌生物学特性进行初步研究,表明引起该病害的病原菌为芒果球座菌(Guignardia mangiferae A.J. Roy)。该病原菌菌落为深橄榄色,产生棒状子囊、梭形子囊孢子及倒梨形分生孢子;其最适生长温度为28℃,最适pH 值为6;病原菌生长较好的碳源为果糖和阿拉伯糖,氮源为蛋白胨和酵母膏;在全光条件下,病原菌菌丝扩展速度最快;菌丝的致死温度为54℃。由G. mangiferae引起的香蕉黑斑病,在国内外为首次报道。