引起葡萄黄化类症状的病毒和类病毒RT-PCR检测

[目的]明确引起新疆葡萄黄化类症状的病毒及类病毒种类,分析其单病毒和复合感染情况,为葡萄病毒及类病毒的防治提供重要的理论依据和有效的检测技术.[方法]利用已报道的6对特异性引物(GRSPaV-RSP48/49、GFKV-L630/U279、GLRav2-V2dCPf2/V2CPr1、HSVd-f/r、GYSVd1-fl/r1和GYSVd2-f2/r2)分别对新疆不同地区黄化类症状的葡萄病样进行RT-PCR检测,并对各引物的扩增产物进行序列分析.[结果]3种病毒及3种类病毒(GRSPaV、GFkV、GLRaV-2、GYSVd2、GYSVd1和HSVd)在新疆葡萄中均有不同程度的感染,其感染率分别为36.1;、51.4;、48.6;、37.5;、37.5;、94.4;;72个病样中,2种以上病毒或类病毒复合感染率约为75;,6种病毒或类病毒复合感染率为10;以上.[结论]可侵染新疆葡萄引起黄化类症状的病毒和类病毒可达6种,且复合感染较为普遍.     

往复双向电泳法(R-PAGE)检测马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)核酸制备的改进

双向往返电泳(R-PAGE)法是检测马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)的有效手段，本试验通过对该方法中马铃薯纺锤块茎类病毒核酸提取步骤的改进，提高了核酸纯度，使检测结果更为准确、清晰，且灵敏度高。     

果树类病毒及检测技术研究进展

类病毒是一类单链共价闭合环状的裸露RNA分子,侵染植物引起严重病害。概述了危害果树的类病毒种类以及果树类病毒的危害特征、病理学特性、致病机理及检测方法。     

柑橘类病毒的分子鉴定与分型

 【目的】检测湖南地区柑橘所携带的柑橘类病毒类型,并鉴定柑橘类病毒的亚型。【方法】以田间柑橘枝条韧皮部为试材,提取总RNA,反转录成cDNA,再用不同类型类病毒的特异引物进行PCR扩增,鉴定出各个样品所携带的柑橘类病毒类型;通过测序分析各类型的序列,并与国内外报道的序列进行同源性分析,确定所测样品的亚型。【结果】建立了CEVd、CVdII、CVdⅢ等柑橘类病毒的RT-PCR检测方法。在5个供试样品中检测出3种类型的柑橘类病毒,即柑橘裂皮病类病毒（citrus exocortis viroid,CEVd）、柑橘类病毒Ⅱ型（citrus viriodⅡ,CVdⅡ,又名hop stunt viroid,HSVd）和柑橘类病毒Ⅲ型（citrus viriodⅢ,CVdⅢ）,其中CVdⅡ和CVdⅢ为国内首次发现。亚型分析表明CVdⅡ可能为新的亚型;CVdⅢ为b亚型,可能具有矮化功能。【结论】在中国鉴定出3种类型的柑橘类病毒,CEVd与国内已报道的序列完全一致,其中CVdⅡ和CVdⅢ为首次在中国发现;检测到的CVdⅡ可能为新的亚型。     

植物的类病毒病

类病毒作为已知最小的致病ＲＮＡ，无论在致病性，还是在诊断上都不同于一般的病毒。由于类病毒可引起许多重要经济作物的严重损失，因此，要防止其危害，必须找到迅速、简便和灵敏的检测方法。本文对植物类病毒病的发生生态、传染方式、诊断方法及其防治措施等进行了研究。     

PSTVd，PLRV和PVS在马铃薯试管苗不同部位继代积累规律研究

 为研究病毒和类病毒在马铃薯试管苗不同部位的积累规律,利用实时荧光定量PCR和DAS-ELISA两种方法检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid, PSTVd)、马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus, PLRV)和马铃薯S病毒（Potato virus S, PVS）在马铃薯试管苗基部和顶端继代培养5代（继5代）后的含量。结果表明：PSTVd,PLRV和PVS在马铃薯试管苗常规组织培养过程中是逐代传递的,其在马铃薯试管苗顶端和基部的积累规律存在显著的品种差异,分别供试的7个品系中,存在PSTVd顶端积累和基部积累效应的各3个品系,存在PLRV顶端积累和基部积累效应的分别为4个和2个品系,存在PVS顶端积累和基部积累效应的分别为3个和2个品系,其中PSTVd的顶端积累效应最强为基部的4倍;同一马铃薯品系的顶端和基部对不同病毒和类病毒的积累趋势相对一致。实时荧光定量PCR是一种灵敏度很高的定量检测马铃薯病毒和类病毒的方法。     

植物类病毒检测技术概述

类病毒是一类无外壳蛋白、能在受侵染寄主植物中自我复制的环状单链RNA小分子。文中概述了目前检测类病毒的几种方法。     

NASH技术和R-PAGE技术在马铃薯类病毒检测上的应用

往复聚丙烯酰胺凝胶电泳 (R- PAGE)和核酸斑点杂交技术 (NASH)是检测马铃薯块茎类病毒(PSTVd)的主要技术 ,利用这两种方法 ,进行马铃薯脱毒试管苗的类病毒检测。结果表明 ,两种方法得到了相似的检测结果。通过试验 ,比较两种检测方法在检测灵敏度、操作性、检测量等方面的优缺点和可行性。NASH方法具有较高的灵敏性 ,适合大批量样品检测和异地取样。而 R- PAGE可区分类病毒的强弱系 ,对试验条件和技术条件要求低于 NASH方法     

啤酒花潜隐类病毒研究进展

啤酒花潜隐类病毒在啤酒花上的感染较普遍,且一般不产生明显症状,给生产带来一定损失。对于该类病毒病害,较为可行的控制措施是实行检疫控制其扩展和培育与栽培无类病毒苗。较为系统地综述了国内外啤酒花潜隐类病毒的分布与危害、生物学特性、基因组结构与序列分析、检测方法及防治与控制等方面的研究进展。     

新疆苹果树上苹果锈果类病毒(ASSVd)的检测与全序列分析

[目的]检测并分析新疆223团场多年生苹果树上的苹果锈果类病毒.[方法]对采自新疆库尔勒223团的多年生苹果树的枝条、叶片、果实((果皮、种子))样品进行RNA提取,利用RT-PCR技术检测鉴定.[结果](1)多年生的‘金冠’苹果树上检测到苹果锈果类病毒,得到4条克隆序列(ASSVd Y1:KC110858;ASSVd Y6:KC110859;ASSVd Y8:KC110860;ASSVd Y10:KC110861),所得序列与GenBank中已报道的国内外ASSVd序列同源性达85;以上.(2)序列比对可知,4条‘金冠’分离物序列之间只有3个碱基变异,与首次登录生物X17696有26个碱基变异,其中有4个碱基缺失和5个碱基插入,且变异多集中在类病毒序列的TL与TR区.[结论]通过序列分析比对,各寄主上的ASSVd分离物核酸序列变异较小,建立了优化的RT-PCR检测方法,为苹果树ASSVd的快速检测奠定了良好的基础.     

A universal probe for simultaneous detection of six pospiviroids and natural infection of potato spindle tuber viroid (PSTVd) in tomato in China

Several viroids in the genus Pospiviroid can infect tomato (Solanum lycopersicum) and cause severe diseases, posing a serious threat to tomato production.  For simultaneous detection of six tomato-infecting pospiviroids - columnea latent viroid (CLVd), pepper chat fruit viroid (PCFVd), potato spindle tuber viroid (PSTVd), tomato apical stunt viroid (TASVd), tomato chlorotic dwarf viroid (TCDVd), and tomato planta macho viroid (TPMVd), we developed a universal probe based on a highly conserved 61 nt long sequence shared among them.  Compared with their specific probes, the universal probe has a similar, though slightly reduced, detection sensitivity and has the advantages of simple and cost-effective preparation and simultaneous detection of the six pospiviroids.  In addition, the universal probe was used in dot-blot hybridization assays for a large-scale survey of viroid(s) in tomato plantings in China.  Only PSTVd was detected in a few greenhouse-planted tomato plants.  Sequence analysis revealed that these tomato PSTVd isolates may have been introduced from tomato seeds imported from abroad.      

Preliminary Studies on Species and Distribution of Citrus Viroids in China

Citrus viroids are the small but economically important RNA pathogens. For investigating their occurrence and distribution in China, 65 viroid samples collected from 8 major citrus cultivated regions were evaluated using one-step or multiplex onestep RT-PCR and biological indexing for specifically detection of Citrus exocortis viroid （CEVd）, Citrus bent leaf viroid （CBLVd）, Hop stunt viroid （HSVd）, Citrus viroid-Ⅲ （CVd-Ⅲ） and Citrus viroid-Ⅳ （CVd-Ⅳ）. The results showed that there were at least 4 kinds of citrus viroids （CEVd, CBLVd, HSVd, and CVd-Ⅲ） on citrus trees in China. Most of the infected citrus plants harbored more than one viroid species, and two plants were infected with up to 4 citrus viroids. Sweet orange was more frequently infected by viroids than other citrus varieties. It is the preliminary report on the species and distribution of citrus viroids in China.     

湖北省柑桔裂皮类病毒的检测及序列分析

以表现柑桔裂皮病典型症状的罗伯逊脐橙为材料,采用双向电泳、RT-PCR和RNA斑点杂交及组织印迹杂交的方法,对柑桔裂皮类病毒进行了检测,结果表明RT-PCR和2种核酸杂交技术均可用于该类病毒的有效检测。对该类病毒全长RNA的RT-PCR产物进行了克隆和序列分析,该分离株(命名为CEVd-HB分离株)的全长RNA由371个核苷酸组成,与已报道的其它不同来源分离株相似性为90%~99%。     

Cell-free circularization of viroid progeny RNA by an RNA ligase from wheat germ

Linear, potato spindle tuber viroid RNA has been used as a substrate for an RNA ligase purified from wheat germ. Linear viroid molecules are efficiently converted to circular molecules (circles) which are indistinguishable by electrophoretic mobility and two-dimensional oligonucleotide pattern from viroid circles extracted from infected plants. In light of recent evidence for multimeric viroid replication intermediates, cleavage followed by RNA ligation by a cellular enzyme may (i) be a normal step in the viroid life cycle and (ii) may also reflect cellular events.     

Sensitive and rapid diagnosis of potato spindle tuber viroid disease by nucleic Acid hybridization

A sensitive and reliable new method for the detection of potato spindle tuber viroid in potato tubers has been developed. The method is based on hybridization of highly radioactive recombinant DNA to viroid RNA that has been attached to a solid support. The method can be automated and permits the rapid testing of large numbers of tubers.     

柑桔木质陷孔病类病毒贵州分离物的分子鉴定

 从采自贵州感染了啤酒花矮化类病毒（Hop stunt viroid, HSVd）的柑桔植株中抽提总核酸,通过一对鉴别引物,经RT-PCR扩增初步筛选出柑桔木质陷孔病类病毒（Citrus cachexia viroid, CCaVd）。扩增该类病毒的全长核苷酸片段,通过克隆和测序,结果发现,该片段全长298bp,与GenBank中报道的木质陷孔病类病毒分离物同源性达到96％以上。这是中国发生的木质陷孔病类病毒的分子生物学特征的首次报道。     

椰子死亡类病毒及其传入中国的风险性分析

对椰子死亡类病毒(CCCVd)的国内外分布状况、潜在经济危害性、寄主植物经济重要性、传播扩散可能性和危险性管理难度等方面进行系统概述,运用多指标综合评价方法对其在我国的传播扩散风险进行评估。结果表明,CCCVd的风险性R值为2.29,属于高度危险入侵物种。提出了两种降低风险的备选方案,选择其中任何一种方案都能将CCCVd传入我国的风险降到最低。     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅺ病原研究：类病毒问题

 感染云南烟草丛枝症病害的病苗的细胞切片中观察到类似于旁壁体的质膜体,旁壁体是类病毒侵染植物形成的特征病变结构,但多次双向电泳实验均未检测到类病毒分子,质膜体的形成可能和莫笑晗等发现的与云南烟草丛枝症病害相关的稳定RNA有密切关系,但线性开环结构和失活温度说明其不具有类病毒核酸特征。